河南省駐馬店市食品藥品檢驗(yàn)所（463000）葉英劍 李啟彬 劉園園

堿性嫩黃O也被叫做奧拉明O，為粉末狀物質(zhì)，顏色為樣色，屬于工業(yè)染料，通常情況下在棉織品、醋酯纖維的染色中應(yīng)用率較高，同時(shí)還可將其用于皮革、紙張以及油漆的染色，但該物質(zhì)具備毒性，當(dāng)其與機(jī)體皮膚接觸或是通過(guò)呼吸道進(jìn)入到人體后，均會(huì)導(dǎo)致中毒事件的發(fā)生[1]。目前所應(yīng)用的大量液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)中，并未對(duì)凈化處理進(jìn)行設(shè)置，因此導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果受到嚴(yán)重影響。本次研究就通過(guò)對(duì)樣品處理方式進(jìn)行優(yōu)化，將GPC凈化系統(tǒng)進(jìn)行引入，并通過(guò)對(duì)三類食品進(jìn)行抽檢，探討食品堿性嫩黃O含量測(cè)定采取超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的效果。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 本次研究所應(yīng)用的樣品均購(gòu)自農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)，均為豆制品，包括豆腐、腐竹以及豆皮。檢測(cè)所應(yīng)用的儀器為上海諾普林公司生產(chǎn)的DHK500型液相色譜串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜儀，電子天平、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、離心機(jī)以及凝膠色譜儀。所應(yīng)用的試劑包括甲酸、甲醇、乙酸乙酯、環(huán)己烷，同時(shí)水為超純水。定溶液為0.1%甲酸甲醇溶液以及0.1%甲酸水溶液，二者比例為70∶30。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為堿性嫩黃O標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 色譜條件 檢測(cè)所應(yīng)用的色譜柱為Ecipse-C18，3.5μm，柱溫控制為30℃；所應(yīng)用的流動(dòng)相材料及配比為：0.1%甲酸甲醇溶液以及0.1%甲酸水溶液，二者之間的比例為70∶30，進(jìn)樣量控制為10μL。在0min時(shí)，流速控制為0.2mL/min，0.1%甲酸水溶液為30%，0.1%甲酸甲醇溶液為70%；在3min時(shí)，流速控制為0.2mL/min，0.1%甲酸水溶液為30%，0.1%甲酸甲醇溶液為70%；在3.5min時(shí)，流速控制為0.2mL/min，0.1%甲酸水溶液為90%，0.1%甲酸甲醇溶液為10%；在5.5min時(shí)，流速控制為0.2mL/min，0.1%甲酸水溶液為90%，0.1%甲酸甲醇溶液為10%；在6min時(shí)，流速控制為0.2mL/min，0.1%甲酸水溶液為30%，0.1%甲酸甲醇溶液為70%；在8min時(shí)，流速控制為0.2mL/min，0.1%甲酸水溶液為30%，0.1%甲酸甲醇溶液為70%。

附表 堿性嫩黃O的回收率和精密度試驗(yàn)結(jié)果

1.2.2 質(zhì)譜條件 應(yīng)用電噴霧離子源，實(shí)施正離子掃描以及多反應(yīng)監(jiān)測(cè)，電噴霧電壓控制為4000V，霧化器壓力控制為10L/min，離子源溫度控制為350℃。

1.2.3 配置標(biāo)準(zhǔn)使用液 對(duì)堿性嫩黃O標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確稱量，采用定溶液對(duì)其開(kāi)展配置，得到標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，該溶液的濃度為100μg/mL。在對(duì)該溶液進(jìn)行使用前，根據(jù)具體的需求應(yīng)用定溶液對(duì)標(biāo)準(zhǔn)使用液進(jìn)行配置，分別為2.50ng/mL、5.00ng/mL、10.00ng/mL、20.00ng/mL、50.00ng/mL以及100ng/mL。

1.2.4 處理樣品 首先對(duì)樣品進(jìn)行提取，準(zhǔn)確稱量樣品200g，將樣品碾碎，然后準(zhǔn)確稱量1.00g樣品，將其放置到10mL離心管內(nèi)，采用（1+1）乙酸乙酯-環(huán)己烷加入到離心管內(nèi)，使樣品被充分溶解，然后定容為10.0mL。渦旋1min，然后放入超聲機(jī)中進(jìn)行提取，提取時(shí)間為10min，以每分鐘4000r速度離心，離心時(shí)間為5min。

然后對(duì)樣品實(shí)施凈化，凝膠色譜條件為：凝膠凈化柱，所應(yīng)用的流動(dòng)相為1∶1的乙酸乙酯以及環(huán)己烷，流速控制為3.5mL/min，5mL定量環(huán)，開(kāi)展20min預(yù)淋洗，然后采用凝膠色譜平衡8min，8～18min收集。采集離心后的上清液，采集量為5.0mL，經(jīng)由GPC柱開(kāi)展凈化處理，將采集的洗脫液旋轉(zhuǎn)至干。然后采用定溶液實(shí)施定容，定溶液應(yīng)用量為1.0mL。過(guò)濾后上機(jī)測(cè)量，過(guò)濾膜直徑為0.22μm。

1.2.5 計(jì)算公式 樣品中堿性嫩黃O的含量計(jì)算方法為：待測(cè)液中堿性嫩黃O的濃度減去空白待測(cè)液中堿性嫩黃O的濃度，乘以樣品測(cè)試樣的最后定容體積，再將乘積除以50%樣品質(zhì)量。

2 結(jié)果

2.1 定性及定量結(jié)果 應(yīng)用保留時(shí)間和響度離子豐度所具備的最大允許偏差來(lái)開(kāi)展定性，相對(duì)離子豐度與允許的最大偏差依次是：超過(guò)50時(shí)為±20；20～50時(shí)為±25；10～20時(shí)為±30；低于10時(shí)為±50。同時(shí)將樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液加入到檢測(cè)儀器中，加入量分別為10μL，定量方法為外標(biāo)法，定量離子應(yīng)用268.2/147.1定量，定性離子應(yīng)用268.2/252.1定性。

2.2 檢測(cè)方法的檢出限 通過(guò)對(duì)檢出條件進(jìn)行優(yōu)化，確定檢測(cè)的回歸方程為3891.17X-2210.36，相關(guān)系數(shù)為0.9995，具備較好的重現(xiàn)性，同時(shí)具備高靈敏度，儀器所具備的檢測(cè)最大限度為0.25ng/mL，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的檢測(cè)限度為0.5μg/kg。

2.3 回收率與精密度試驗(yàn) 通過(guò)對(duì)樣品進(jìn)行隨機(jī)選擇，將其分別加入到標(biāo)準(zhǔn)溶液中，開(kāi)展加標(biāo)試驗(yàn)，標(biāo)準(zhǔn)溶液的劑量為1.0mL，濃度為100ng/mL。然后開(kāi)展6次平行測(cè)定，并實(shí)施空白試驗(yàn)，對(duì)樣本中的本底成分進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如附表。通過(guò)檢測(cè)結(jié)果可知，樣本中所具備的本底值存在一定差異，在將空白進(jìn)行扣除后，樣本本身含量為0?；厥辗秶_(dá)到77.5%～114.2%，RSD為7.8%～9.5%，提示基質(zhì)并不會(huì)明顯影響檢測(cè)結(jié)果，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法具備較好的重現(xiàn)性，且結(jié)果可靠度高。

2.4 檢測(cè)結(jié)果 通過(guò)檢測(cè)結(jié)果可知，本次研究所選取的樣品中均未檢測(cè)出堿性嫩黃O。

3 結(jié)論

我國(guó)相關(guān)法律法規(guī)中有明確規(guī)定，不可在食品中添加堿性嫩黃O。目前實(shí)驗(yàn)室在對(duì)堿性嫩黃O含量進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，所應(yīng)用的方法主要包括高效液相色譜法以及高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。本次研究通過(guò)采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)食品中的堿性嫩黃O進(jìn)行檢測(cè)，在開(kāi)展檢測(cè)前，對(duì)樣品應(yīng)用GPC實(shí)施凈化處理，從而可使樣品得到有效凈化，同時(shí)也能夠使樣品得到富集，并將勞動(dòng)力進(jìn)行解放，使檢測(cè)工作效率明顯提升[2][3]。

在對(duì)堿性嫩黃O進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的操作較為簡(jiǎn)單，具備較高的靈敏度以及準(zhǔn)確性，而且可重復(fù)性好，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)食品堿性嫩黃O含量的最小檢出值為0.5μg/kg；豆腐回收率為78.4%～100.5%，腐竹回收率為87.1%～107.3%，豆皮回收率為92.7%～114.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為7.7%～9.6%，線性相關(guān)系數(shù)為0.9995，可作為食品中堿性嫩黃O檢測(cè)的有效方法[4][5][6]。