北京市朝陽區(qū)食品藥品安全監(jiān)控中心（100124）韓鋒 錢鈺娟 劉開玉

氨茶堿為茶堿與乙二胺復鹽，其藥理作用主要來自茶堿，乙二胺使其水溶性增強。本品對呼吸道平滑肌有直接松弛作用。能夠增強膈肌收縮力，改善呼吸功能。適用于支氣管哮喘、喘息型支氣管炎、阻塞性肺氣腫等緩解喘息癥狀；也可用于心源性肺水腫引起的哮喘。茶堿的毒性與常出現(xiàn)在血清濃度為15～20μg/ml，特別是在治療開始，早期多見的有惡心、嘔吐、易激動、失眠等，當血清濃度超過20μg/ml，可出現(xiàn)心動過速、心律失常，血清中茶堿超過40μg/ml，可發(fā)生發(fā)熱、失水、驚厥等癥狀，嚴重的甚至呼吸、心跳停止致死[1]。因此在日常監(jiān)督中，氨茶堿片的含量應在藥典標準規(guī)定的區(qū)間范圍內(nèi)，以保證用藥安全。

測量不確定度，簡稱不確定度，是根據(jù)所用到的信息，表征賦予被測量值分散性的非負參數(shù)[2]。不確定度可以度量某個結(jié)果與其他結(jié)果相吻合的程度，從而度量結(jié)果的可信度，以此證明結(jié)果的適宜性和質(zhì)量[3]。本文參考國家計量技術(shù)規(guī)定JJF1059.1-2012《測量不確定度評定與表示》，并查看相關(guān)材料及文獻，對氨茶堿片含量測定（無水茶堿和乙二胺）進行不確定度的分析與評定，提高被測量結(jié)果的準確性和可信性。

1 材料與方法

1.1 無水茶堿含量測定

1.1.1 儀器與試劑 TU-1901型紫外分光光度計（普析通用公司）；Mettler-XP105DR型電子天平 (瑞士梅特勒-托利多公司，d=0.01mg/0.1mg)；0.01mol·L-1氫氧化鈉（分析純）溶液；水為純化水。200ml容量瓶，250ml容量瓶及5ml單標移液管(均為A級)。氨茶堿片[規(guī)格：0.1g，批號：1704163，山東新華制藥股份有限公司]；實驗溫度：27℃，實驗用移液管及容量瓶校正溫度：20℃。

1.1.2 樣品的處理及測定[4]取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于氨茶堿100mg），置200ml容量瓶中，加0.1mol·L-1氫氧化鈉溶液20ml與水60ml，振搖10分鐘使氨茶堿溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置250ml容量瓶中，加0.01mol·L-1氫氧化鈉溶液至刻度，搖勻，照紫外-可見分光光度法，在275nm的波長處測定吸光度，按C7H8N4O2的吸收系數(shù)為650計算，即得。

1.2 乙二胺含量測定

1.2.1 儀器與試劑 Mettler-XP105DR型電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司，d=0.01mg/0.1mg)；0.1mol·L-1鹽酸滴定液（國家化學試劑質(zhì)檢中心，標定濃度：0.1001mol·L-1）；水為純化水。25ml滴定管(A級)。氨茶堿片[規(guī)格：0.1g，批號：1704163，山東新華制藥股份有限公司]；實驗溫度：26℃，實驗用滴定管校正溫度：20℃。

1.2.2 樣品的處理及測定[4]取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于氨茶堿0.5g），加水50ml，微溫使溶解，放冷，加茜素磺酸鈉指示液8滴，用鹽酸滴定液（0.1mol·L-1）滴定至溶液顯黃色。每1ml鹽酸滴定液（0.1mol·L-1）相當于3.005mg的C2H8N2。

2 數(shù)學模型

2.1 無水茶堿含量測定

式中：A275nm：275nm處的吸光度；m：樣品稱樣量；：吸收系數(shù)；m20：20片片重；：稀釋倍數(shù)；標示量：0.1g。

2.2 乙二胺含量測定

式中：V：消耗鹽酸滴定液的體積；T：滴定度；C：鹽酸滴定液的濃度；m：樣品稱樣量；m20：20片片重；標示量：0.1g。

3 不確定度的來源和評定

實際實驗中采用平行測定法，由于兩次測量值接近，故選取第一組測量值計算不確定度。

3.1 無水茶堿含量測定的不確定度

3.1.1 實驗數(shù)據(jù) 本品規(guī)格：0.1g；20片片重：m20=2.0409g；樣品取樣量：m1=0.1043g，m2=0.1028g；吸光度：A275nm(1)=0.529，A275nm(2)=0.523；計算得含無水茶堿為氨茶堿標示量：F1=79.62%，F(xiàn)2=79.87%，F(xiàn)=79.7%。

3.1.2 樣品稱量（m）引入的不確定度 電子天平校正產(chǎn)生的不確定度，按檢定證書提供：最大允許誤差為±0.5mg，采用均勻分布將誤差轉(zhuǎn)化為標準不確定度：

3.1.2.1 精密稱定20片片重引入的不確定度 采用減重法稱量，需使用兩次：

3.1.2.2 精密稱取樣品適量（約相當于氨茶堿100mg）引入的不確定度 采用減重法稱量，需使用兩次：。

3.1.3 玻璃容量器以及溫度變化引入的不確定度

3.1.3.1 溶解氨茶堿所用的200ml容量瓶引入的不確定度 使用200mlA級容量瓶，檢定證書提供的最大允差：±0.15ml；按三角分布轉(zhuǎn)化為標準不確定度

3.1.3.2 溫度變化引入的不確定度 由于液體的體積膨脹明顯大于容量瓶的體積膨脹，因此只需考慮前者。實驗溫度27℃，玻璃容量器校準溫度20℃，水的體積膨脹系數(shù)為2.1×10-4℃-1；產(chǎn)生的體積變化為±（200×7×2.1×10-4）=±0.294ml。

3.1.3.3 精密量取續(xù)濾液5ml所用的5ml單標線吸管引入的不確定度 使用5mlA級單標線吸管，檢定證書提供的最大允差：±0.015ml；按三角分布轉(zhuǎn)化為標準不確定度0.015/=0.0061ml。

3.1.3.4 溫度變化引入的不確定度 產(chǎn)生的體積變化為±（5×7×2.1×10-4）=±0.0074ml；按均勻分布轉(zhuǎn)化為標準不確定度。

3.1.3.5 定容氨茶堿所用的250ml容量瓶引入的不確定度 使用250mlA級容量瓶，檢定證書提供的最大允差：±0.15ml；按三角分布轉(zhuǎn)化為標準不確定度。

3.1.3.6 溫度變化引入的不確定度 產(chǎn)生的體積變化為±（250×7×2.1×10-4）=±0.3675ml；按均勻分布轉(zhuǎn)化為標準不確定度。

3.1.4 紫外分光光度計引入的不確定度 檢定證書給出的定量測量重現(xiàn)性為0.3%，按均勻分布，。

3.1.5 重復性測定引入的不確定度 采用極差法評定，即F1=79.62%，F(xiàn)2=79.87%，極差系數(shù)C＝1.13，n=2；。

3.1.8 擴展不確定度 取包含因子k=2，U=kUC(F)=2×0.46%=0.92%。

本次氨茶堿片中無水茶堿含量測定結(jié)果為氨茶堿標示量的(79.7±1.0)%，k=2。

3.2 乙二胺含量測定的不確定度

3.2.1 實驗數(shù)據(jù)：本品規(guī)格：0.1g；20片片重：m20=2.0409g；樣品取樣量：m1=0.5107g，m2=0.5103g；滴定結(jié)果：V1=22.60ml，V2=22.55ml。

計算得含乙二胺為氨茶堿標示量：F1=13.584%，F(xiàn)2=13.564%，F(xiàn)=13.57%。

3.2.2 樣品稱量（m）引入的不確定度 電子天平校正產(chǎn)生的不確定度，按檢定證書提供：最大允許誤差為±0.5mg，采用均勻分布將誤差轉(zhuǎn)化為標準不確定度：。

3.2.2.1 精密稱定20片片重引入的不確定度 采用減重法稱量，需使用兩次：。

3.2.2.2 精密稱取樣品適量（約相當于氨茶堿0.5g）引入的不確定度 采用減重法稱量，需使用兩次：。

3.2.3 鹽酸滴定液滴定體積引入的不確定度

3.2.3.1 25ml酸式滴定管引入的不確定度使用25ml A級酸式滴定管，檢定證書提供的最大允差：±0.04ml。

按三角分布轉(zhuǎn)化為標準不確定度0.04/=0.016ml。

3.2.3.2 溫度變化引入的不確定度 由于液體的體積膨脹明顯大于容量瓶的體積膨脹，因此只需考慮前者。

實驗溫度26℃，玻璃容量器校準溫度20℃，水的體積膨脹系數(shù)為2.1×10-4℃-1，產(chǎn)生的體積變化為±（22.60×6×2.1×10-4）=±0.0285ml。

按均勻分布轉(zhuǎn)化為標準不確定度0.0285/=0.016ml；。

3.2.4 鹽酸滴定液（C）引入的不確定度 鹽酸滴定液（0.1mol/L），購自國家化學試劑質(zhì)檢中心，標定濃度為0.1001mol·L-1，擴展不確定度0.2%，計算相對標準不確定度：。

3.2.5 重復性測定引入的不確定度 采用極差法評定，即F1=13.584%，F(xiàn)2=13.564%，極差系數(shù)C＝1.13，n=2。。

3.2.6 滴定度（T）引入的不確定度 滴定度由藥典直接給出，未給出不確定度，忽略不計。

3.2.8 擴展不確定度 取包含因子k=2，U=kUC(F)=2×0.026%=0.052%。本次氨茶堿片中乙二胺含量測定結(jié)果為氨茶堿標示量的(13.57±0.06)%，k=2。

4 討論

在藥物質(zhì)量分析中運用不確定度測量有助于分析各種不確定來源對試驗結(jié)果的影響，對藥物分析結(jié)果具有重要意義，同時可以幫助實驗室控制數(shù)據(jù)質(zhì)量，提高工作水平，分析關(guān)鍵因素，有針對性地進行有效的質(zhì)量保證和控制措施，以確保過程穩(wěn)定并受控。本文通過分析及計算氨茶堿片含量測定方法中，各個不確定度的來源及數(shù)值，可以看出，對實驗結(jié)果影響較大的因素包括稱量、稀釋、儀器及重復性等。在實驗中，應盡量避免過小的稱樣量；應盡量減少稀釋步驟，并盡量選擇較大體積的容量器；實驗室所用儀器應按時檢定及校準，以確保儀器靈敏度符合測量精度要求；應盡量增加實驗次數(shù)，減小重復性引入的不確定度，提高結(jié)果質(zhì)量。