楊勸生 張軍蘭 趙金鳳 趙強(qiáng)

【摘要】以黃酮的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)建立秦州大櫻桃葉的提取工藝。

【關(guān)鍵詞】秦州大櫻桃葉? 黃酮? 提取? 研究

櫻桃葉是櫻桃的主要副產(chǎn)物，富含多種人體有益成分，尤以黃酮類化合物蘆?。≧utin）含量較高，黃酮類化合物具有抗氧化、保護(hù)心腦血管系統(tǒng)、抗癌、止血等生理活性，且低毒。在食品工業(yè)中可用作抗氧化劑、色素等。在醫(yī)學(xué)上可以用于清除自由基、治療冠心病和腦血栓等一系列疾病。

本研究以秦州大櫻桃葉為原料，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以乙醇回流提取大櫻桃葉黃酮類化合物，建立并優(yōu)化了秦州大櫻桃葉中蘆丁提取工藝，HPLC法測(cè)定秦州大櫻桃葉中黃酮類化合物的含量，以確定最佳提取工藝參數(shù)，為大櫻桃副產(chǎn)物中有效成分的提取分離提供了一定的參考。

一、材料與儀器

（一）藥材

“紅燈”大櫻桃葉（經(jīng)天水師范學(xué)院趙強(qiáng)教授鑒定），2018年6月采集于天水市秦州區(qū)煙鋪村，經(jīng)自然風(fēng)干，粉碎，過(guò)篩。

（二）儀器

Agilent 1100 Series型高效液相色譜儀、KQ-500D型數(shù)控超聲波清洗器、RE52-99型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、UV751GD型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)、JY系列電子天平、色譜工作站為CAG Bootp Serier、色譜柱為Eclipse×DB–C18柱等。

（三）試藥

蘆丁對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：11844-200505

），95%乙醇、NaOH，以及其它分析純?cè)噭?/p>

二、方法與結(jié)果

（一）對(duì)照品溶液的制備

精密稱取蘆丁對(duì)照品0.0251 g，用25 mL 80%乙醇溶解并定容至100 mL容量瓶中，搖勻，得質(zhì)量濃度為25.1 mg/mL的蘆丁對(duì)照品溶液。

（二）供試品溶液的制備

稱取上述櫻桃葉粉末10.0 g，加入不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇，在室溫下浸泡5-7 h后，經(jīng)300W超聲波50℃處理80min。將超聲處理過(guò)的物質(zhì)全部轉(zhuǎn)移索氏提取器中加熱回流提取，得到回流液。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將回流液減壓濃縮至無(wú)醇味之后立即將濃縮液轉(zhuǎn)入100mL錐形瓶中，得抽濾樣品液。重復(fù)此操作三次，將三次實(shí)驗(yàn)的抽濾樣品液合并，減壓濃縮至粘稠狀，趁熱移入150mL錐形中，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%NaOH調(diào)pH至8-10，密封靜置24h。經(jīng)減壓抽濾，將濾液移入100mL容量瓶中，加入95%乙醇定容至刻度，封口4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

（三）黃酮含量測(cè)定色譜條件

檢測(cè)器：Eclipse×DB–C18柱（4.6 mm×250mm），波長(zhǎng)：254 nm，流動(dòng)相：甲醇∶1%冰醋酸=60∶40（v/v），柱溫：30℃，進(jìn)樣量：20μL，流速1.0mL/min。

（四）正交提取結(jié)果與分析

取45%、60%、75%不同體積的乙醇，液料比7.51、12.51、17.51 mL/g，提取溫度40℃、60℃、80℃，設(shè)定正交試驗(yàn)表，考察黃酮含量的提取率，結(jié)果取3次試驗(yàn)結(jié)果的平均值。結(jié)果顯示提取率在1.08%～1.32%之間，方法可行，工藝可靠。

（五）驗(yàn)證試驗(yàn)

再按選出的工藝進(jìn)一步驗(yàn)證試驗(yàn)，分別稱取櫻桃葉5份，各30g，以櫻桃葉黃酮含量為驗(yàn)證指標(biāo)進(jìn)行試驗(yàn)，黃酮含量平達(dá)1.250mg/g，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好，可建立櫻桃葉中黃酮的提取工藝。

三、結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)以秦州大櫻桃“紅燈”的葉子為實(shí)驗(yàn)材料，在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行L9（33）正交實(shí)驗(yàn)，優(yōu)選乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、提取溫度等主要影響因素，確定了最佳提取工藝（乙醇體積分?jǐn)?shù)60%、料液比12.51、提取溫度70℃），黃酮類化合物含量可達(dá)1.250mg/g，并發(fā)現(xiàn)三種影響因素之間存在一定的交互作用。由于大櫻桃葉來(lái)源廣泛、綠色天然無(wú)污染，廉價(jià)易得，葉中所含黃酮類化合物有較強(qiáng)的抗氧化能力，且在機(jī)體內(nèi)低殘留，可作為較理想的自由基清除劑，用于保護(hù)機(jī)體健康和食品安全領(lǐng)域，并有望開(kāi)發(fā)成為一種新型的食品添加劑。通過(guò)一系列研究，為當(dāng)?shù)卮髾烟耶a(chǎn)業(yè)深入開(kāi)發(fā)和研究提供理論依據(jù)。

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基金項(xiàng)目：2019年天水市科技計(jì)劃項(xiàng)目（18JR3RE244）。

作者簡(jiǎn)介：楊勸生（1974-），男，主任中藥師（教授），研究方向：中草藥化學(xué)分析以及食品、保健品、新藥研發(fā)等。