糖酵解是代謝的原始途徑之一,在能量代謝和生物合成中起著舉足輕重的作用。眾所周知,糖酵解酶可形成短暫的多酶組合。近日,德國馬克斯普朗克研究所植物系統(tǒng)生物學(xué)和生物技術(shù)中心Alisdair R.Fernie團(tuán)隊(duì)在Nature Communications雜志上在線發(fā)表了題為“A moonlighting role for enzymes of glycolysis in the co-localization of mitochondria and chloroplasts”的文章。本文結(jié)合現(xiàn)代分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和生化證據(jù)來研究植物糖酵解酶的組裝,探索了植物糖酵解酶更廣泛的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,揭示了特定的糖酵解酶在介導(dǎo)線粒體和葉綠體共定位中的作用。
糖酵解是呼吸的標(biāo)志性途徑之一,為多種代謝物的生物合成提供碳骨架,也是能量轉(zhuǎn)換的核心。糖酵解酶在許多物種中都能形成多酶復(fù)合物,但這些組合體的功能尚不清楚。對(duì)酵母、血細(xì)胞和植物的研究表明,糖酵解酶在細(xì)胞膜上的ATP被快速消耗的區(qū)域共定位,這表明這種酶的組合起著調(diào)節(jié)作用。利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)和活體細(xì)胞漂白后的熒光恢復(fù)來跟蹤糖酵解酶組合,證明糖酵解途徑的前四種酶各自獨(dú)立地遵循其特定的底物梯度,這為了解酶復(fù)合物組裝的潛在機(jī)制提供了重要的見解。在植物中,已證明糖酵解酶與線粒體存在相關(guān)性。進(jìn)一步的重要實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與同位素標(biāo)記的葡萄糖共同提供時(shí),線粒體相關(guān)的酶能夠維持呼吸通量,酶與線粒體的關(guān)聯(lián)是動(dòng)態(tài)的并且取決于細(xì)胞的呼吸需求。線粒體和葉綠體外膜之間的直接相互作用已經(jīng)得以證實(shí),膜微區(qū)對(duì)于細(xì)胞器運(yùn)輸、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞器束縛可能也很重要,并且據(jù)推測(cè),細(xì)胞器之間的代謝物交換可能受這些微區(qū)的調(diào)節(jié),但尚不清楚如何實(shí)現(xiàn)或調(diào)節(jié)植物細(xì)胞器的空間共定位。
該研究團(tuán)隊(duì)利用分子和細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)來研究胞質(zhì)定位的糖酵解酶互作關(guān)系。葉綠體和線粒體之間共定位結(jié)果表明蛋白質(zhì)復(fù)合物在葉綠體外膜和線粒體之間形成了一種體內(nèi)連接,磷酸甘油酸變位酶(PGAM)、烯醇化酶和丙酮酸激酶之間有較強(qiáng)的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)互作關(guān)系。利用這些酶的突變體首次深入了解了這種復(fù)合物的生理作用,據(jù)報(bào)道在野生型植物中線粒體以一種動(dòng)態(tài)的方式與葉綠體相互作用,為弄清這種相互作用是否會(huì)在enolase突變體和pgam突變體中受到干擾,作者通過表達(dá)靶向線粒體的綠色熒光蛋白(GFP)來檢測(cè)線粒體和葉綠體的互作關(guān)系,發(fā)現(xiàn)磷酸甘油酸變位酶或烯醇化酶的敲除突變會(huì)導(dǎo)致兩個(gè)細(xì)胞器的互作程度顯著降低,明確了這些酶在葉綠體和線粒體共定位中新的微妙作用,與它們的催化活性無關(guān)。