徐楊超 賴青 許春 黃磊 吳劍 陳劍英

【摘 要】：目的觀察枸杞多糖對(duì)活性氧引起的小鼠GC-1spg精原細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。方法利用體外培養(yǎng)的小鼠GC-1spg精原細(xì)胞建立氧化應(yīng)激模型，通過(guò)采用MTS比色法測(cè)定小鼠GC-1spg精原細(xì)胞活力，評(píng)價(jià)枸杞多糖對(duì)小鼠GC-1spg精原細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。結(jié)果次黃嘌呤/黃嘌呤活性氧化可導(dǎo)致精原細(xì)胞活性降低，而添加枸杞多糖可以降低次黃嘌呤/黃嘌呤活對(duì)小鼠GC-1spg精原細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率。結(jié)論枸杞多糖可通過(guò)抗氧化作用保護(hù)活性氧引起的小鼠GC-1spg精原細(xì)胞氧化損傷。

【關(guān)鍵詞】：枸杞多糖;小鼠GC-1spg精原細(xì)胞;次黃嘌呤/黃嘌呤;氧化損傷

枸杞多糖（Lycium Barbarum PoIysaccharides，LBP）是枸杞子的主要功能成分之一，對(duì)生殖系統(tǒng)具有多種藥理作用和生物活性功能[1]。國(guó)內(nèi)有研究通過(guò)枸杞多糖對(duì)生殖系統(tǒng)損傷大鼠的抗氧化作用及對(duì)性激素水平的影響[2]，通過(guò)在對(duì)睪丸組織超微結(jié)構(gòu)觀察證實(shí)，枸杞多糖能明顯減輕大鼠睪丸組織的損傷程度，而目前枸杞多糖（LBP）對(duì)小鼠精原細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)機(jī)制目前并未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)擬利用小鼠GC-1spg精原細(xì)胞為研究對(duì)象，采用次黃嘌呤/黃嘌呤氧化損傷模型，研究枸杞多糖（LBP）對(duì)小鼠GC-1 spg精原細(xì)胞有無(wú)氧化損傷的保護(hù)作用，為男性生殖健康保護(hù)和天然生物活性物質(zhì)的利用提供理論依據(jù)[3-4] 。

1材料與方法

1.1GC-1 spg精原細(xì)胞培養(yǎng)? 小鼠GC-1spg精原細(xì)胞為上海通派生物科技公司提供，合格證編號(hào)HDC-20180562541。培養(yǎng)液為高糖DMEM培養(yǎng)液（Sigma），其中添加Hepes 1.75mmoL·mL-1、谷氨酰胺2mmoL·mL-1、青霉素100U·mL-1、鏈霉素100 mg·mL-1、胰島素10mg·mL-1、轉(zhuǎn)鐵蛋白5mg·mL-1和亞硒酸鈉3×10-8 moL·mL-1作為完全培養(yǎng)液。

1.2分組及藥物處理? 將小鼠GC-1spg精原細(xì)胞按隨機(jī)數(shù)字法分為4組：對(duì)照組、次黃嘌呤/黃嘌呤氧化組（hypoxanthine/xanthine oxidase，HX/XO組，次黃嘌呤10μmoL·L-1，黃嘌呤2.5U·L-1）、枸杞多糖組（LBP組，枸杞多糖10mg·mL-1）、枸杞多糖和次黃嘌呤/黃嘌呤氧化組（HX/XO+LBP組，枸杞多糖10 mg·mL-1，次黃嘌呤10μmoL·L-1，黃嘌呤2.5U·L-1）。細(xì)胞培養(yǎng)于37℃的培養(yǎng)箱。每次處理組4孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3精原細(xì)胞活性測(cè)試? 本實(shí)驗(yàn)采用四氮唑藍(lán)鹽（MTS）比色法測(cè)定精原細(xì)胞活力。細(xì)胞培養(yǎng)24h后，加入MTS 20ul，繼續(xù)培養(yǎng)4h。用酶標(biāo)儀測(cè)570nm下的吸收度值，并計(jì)算細(xì)胞存活率。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法? 采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)量資料用表示，組間差異比較用檢驗(yàn)。

2?結(jié)果

2.1 ? LBP和HX/XO對(duì)小鼠GC-1 spg精原細(xì)胞存活的影響

通過(guò)MTS比色法檢測(cè)小鼠GC-1spg精原細(xì)胞活力發(fā)現(xiàn)：小鼠GC-1spg精原細(xì)胞培養(yǎng)24h后，與對(duì)照組相比，HX/XO氧化組小鼠GC-1spg精原細(xì)胞活力明顯降低，枸杞多糖組及枸杞多糖和HX/XO氧化組小鼠GC-1spg精原細(xì)胞活力明顯升高（均P〈0.05）見(jiàn)圖1。

2.2LBP和HX/XO對(duì)小鼠GC-1spg精原細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率的影響

通過(guò)采用MTS比色法檢測(cè)小鼠GC-1spg精原細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率發(fā)現(xiàn)枸杞多糖對(duì)小鼠GC-1spg精原細(xì)胞氧化損傷有一定保護(hù)作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果詳見(jiàn)表1。

3 討論

哺乳動(dòng)物精原細(xì)胞待遇細(xì)胞內(nèi)外的氧化狀態(tài)高度敏感，極易受到內(nèi)外的氧化損傷。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，枸杞多糖能夠顯著改善HX/XO對(duì)小鼠GC-1spg精原細(xì)胞的活力影響，并且枸杞多糖可以降低HX/XO氧化小鼠GC-1spg精原細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率，表明枸杞多糖對(duì)HX/XO呤所致小鼠GC-1spg精原細(xì)胞的氧化損傷有很好的防護(hù)作用，有一定的臨床意義。

參考文獻(xiàn)

鄒惟瑩， 夏麗萍， 楊樹(shù)龍， 等.槲皮素對(duì)小鼠精原細(xì)胞氧化應(yīng)激的保護(hù)作用[J].南昌大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2014，（12）：1-3，8.

南亞昀， 雍學(xué)芳， 王禮星， 等.枸杞多糖藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].天津中醫(yī)藥，2014，（12）：763-765.

黃庚娣， 賀芳， 韓魁， 等.枸杞多糖對(duì)紫外線照射的RAW264.7細(xì)胞保護(hù)作用的分析[J].中國(guó)病理生理雜志，2015，（10）：1837-1837.

張大雷， 楊蓓， 吳磊， 等.人參皂苷保護(hù)小鼠精原細(xì)胞氧化損傷的研究[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2010，（8）：1014-1016.