孫春玲

（1. 錫林郭勒職業(yè)學(xué)院，內(nèi)蒙古 錫林浩特 026000；2. 錫林郭勒食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心，內(nèi)蒙古錫林浩特 026000）

沙門氏菌（Salmonella） 是常見的食源性致病微生物，因其會(huì)導(dǎo)致人體出現(xiàn)傷寒傷寒、急性腸胃炎、菌血癥和敗血癥等癥狀，還可能會(huì)引發(fā)腸穿孔、敗血癥，最終導(dǎo)致死亡，因此是食品微生物檢測(cè)中常檢項(xiàng)[1-4]。傳統(tǒng)的沙門氏菌檢測(cè)方法不但需要4～7 d才能完成，而且對(duì)檢測(cè)人員能力要求較高，尤其是從選擇性平皿上挑選典型特征菌落，所以選出一個(gè)簡(jiǎn)便、快捷并準(zhǔn)確的方法是十分必要的。

乳膠凝集試劑盒是利用人工大分子乳膠顆粒標(biāo)記的抗體可以與待測(cè)的目標(biāo)微生物的抗原發(fā)生肉眼可見的凝集反應(yīng)原理制成的試劑盒[5]。乳膠凝集試劑盒能在短時(shí)間內(nèi)對(duì)可疑菌落進(jìn)行判定，不需要任何儀器設(shè)備，方便快捷。研究了沙門氏菌乳膠凝集試劑盒在沙門氏菌檢測(cè)中的作用，并對(duì)其效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，旨在探求一種適合于食品中沙門氏菌檢測(cè)要求的快速準(zhǔn)確方法，為提高今后沙門氏菌檢測(cè)效率提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)菌株

沙門氏菌、大腸埃希氏菌和金黃色葡萄球菌，實(shí)驗(yàn)室保藏菌株，編號(hào)分別為CMCC50071，ATCC25922 和CMCC26003。

1.1.2 試劑和儀器

（1） 試劑。緩沖蛋白胨水（BPW）、亞硫酸鉍瓊脂（BS）、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（SC）、四硫磺酸鈉煌綠增菌液基礎(chǔ)（TTB）、HE 瓊脂、木糖賴氨酸脫氧酸鹽瓊脂（XLD）、沙門氏菌干制生化鑒定試劑盒、沙門氏菌顯色培養(yǎng)基、0.1%煌綠溶液、碘液等，北京陸橋技術(shù)股份有限公司提供；沙門氏菌屬診斷血清，寧波天潤生物藥業(yè)有限公司提供；沙門氏菌乳膠凝集試劑盒，廣東環(huán)凱微生物科技有限公司提供。

（2） 儀器。BagMixer 400CC 型均質(zhì)器，法國Interscience 產(chǎn)品；BSC-1360ⅡA2 型生物安全柜，北京東聯(lián)哈爾產(chǎn)品；IGS400 型微生物培養(yǎng)箱，美國賽默飛產(chǎn)品；MLS-3751L-PC 型壓力蒸汽滅菌器，松下健康醫(yī)療器械株式會(huì)社產(chǎn)品。

1.2 檢測(cè)步驟

1.2.1 待測(cè)菌株的復(fù)蘇

將實(shí)驗(yàn)室保藏的沙門氏菌、大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌接種于25mL BHI 中，于36 ℃下培養(yǎng)24 h 備用。將上述BHI 培養(yǎng)物作為待測(cè)樣品。

1.2.2 檢測(cè)

取待測(cè)樣品加入到BPW 增菌液中培養(yǎng)，移取1 mL 培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種于10 mL TTB 和SC 增菌，分別取增菌液1 環(huán)，劃線接種于選擇性培養(yǎng)基，自選擇性培養(yǎng)基上選取菌落分別做沙門氏菌乳膠凝集試驗(yàn)、生理生化鑒定及血清學(xué)鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 常規(guī)方法試驗(yàn)結(jié)果

不同種類菌種在沙門氏菌顯色培養(yǎng)基上菌落形態(tài)見表1。

表1 不同種類菌種在沙門氏菌顯色培養(yǎng)基上菌落形

沙門氏菌顯色培養(yǎng)基說明書上沙門氏菌典型菌落為紫紅色，銅綠假單胞菌也呈紫紅色，其他菌落為藍(lán)綠色、無色或不生長(zhǎng)。由表1 可知，沙門氏菌在沙門氏菌顯色培養(yǎng)基上呈紫色，而大腸埃希氏菌和金黃色葡萄球菌均為藍(lán)色菌落，試驗(yàn)結(jié)果與說明書相符。

按照GB 4789.4—2016[6]，選取沙門氏菌選擇培養(yǎng)基上的紫紅色菌落接種三糖鐵瓊脂、賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基、蛋白胨水、尿素瓊脂、氰化鉀培養(yǎng)基和營養(yǎng)瓊脂平板。

不同種類菌種在沙門氏菌顯色培養(yǎng)基上菌落形態(tài)見表2。

表2 不同種類菌種在沙門氏菌顯色培養(yǎng)基上菌落形

由表2 可知，賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)中對(duì)照管為黃色、試驗(yàn)管為紫色，賴氨酸脫羧酶判斷為陽性；靛基質(zhì)和尿素酶試驗(yàn)均為黃色，判斷均為陰性；氰化鉀試驗(yàn)中試驗(yàn)管不生長(zhǎng)、對(duì)照管生長(zhǎng)，氰化鉀試驗(yàn)判斷為陰性；結(jié)合三糖鐵瓊脂試驗(yàn)結(jié)果符合GB 4789.4—2016 中反應(yīng)序號(hào)A1，生理生化試驗(yàn)鑒定為沙門氏菌。挑取營養(yǎng)瓊脂平板的培養(yǎng)物做血清學(xué)鑒定，血清凝集，結(jié)果與生理生化試驗(yàn)鑒定一致，整個(gè)檢測(cè)過程一共5 d。

2.2 乳膠凝集試驗(yàn)結(jié)果

不同種類菌種乳膠凝集試驗(yàn)結(jié)果見表3。

表3 不同種類菌種乳膠凝集試驗(yàn)結(jié)果

由表3 可知，在沙門氏菌乳膠凝集試驗(yàn)中，沙門氏菌和金黃色葡萄球菌能觀察到凝集現(xiàn)象，而大腸埃希氏菌沒有出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，試驗(yàn)結(jié)果與說明書相符。雖然沙門氏菌和金黃色葡萄球菌能觀察到凝集現(xiàn)象，但結(jié)合選擇性平板上的典型特征，可以區(qū)分沙門氏菌和金黃色葡萄球菌。整個(gè)檢測(cè)過程一共3 d。

3 結(jié)論

沙門氏菌是腸桿菌科的重要菌屬，在檢測(cè)沙門氏菌的過程中常常受到腸桿菌科菌的干擾[7]。沙門氏菌顯色培養(yǎng)基因其能更方便有效地將目標(biāo)菌和雜菌區(qū)分開，常常作為沙門氏菌檢測(cè)的首選培養(yǎng)基。沙門氏菌、大腸埃希氏菌和金黃色葡萄球菌在沙門氏菌顯色培養(yǎng)基上呈現(xiàn)不同的顏色，能清晰區(qū)分開。

沙門氏菌乳膠凝集試劑是乳膠顆粒表面包被與沙門氏菌特異性抗原具有特異性的復(fù)合多價(jià)抗血清。有文獻(xiàn)記載，乳膠凝集試劑可直接用于選擇性增菌液篩選，但在乳膠凝集試驗(yàn)中，沙門氏菌和金黃色葡萄球菌都會(huì)出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。因此，不能直接用選擇性增菌液做乳膠凝集試驗(yàn)，而是先通過選擇性平板分離可疑菌落，再做乳膠凝集試驗(yàn)。

因沙門氏菌顯色培養(yǎng)基上有沙門氏菌典型形態(tài)，通過生理生化試驗(yàn)初步鑒定就判斷為沙門氏菌，檢測(cè)一共用時(shí)5 d，如果在沙門氏菌顯色培養(yǎng)基上沒有典型形態(tài)菌落，而在BS 培養(yǎng)基上有典型形態(tài)，并且需要補(bǔ)做甘露醇、山梨醇和ONPG 試驗(yàn)的需要7 d，操作步驟繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)、工作量大。而從選擇性平板上挑取疑似菌落進(jìn)行沙門氏菌乳膠凝集試驗(yàn)，通過有無凝集現(xiàn)象判斷是否為沙門氏菌，檢測(cè)過程需要3～4 d，與常規(guī)方法相比縮短了檢測(cè)時(shí)間。根據(jù)HKM沙門氏菌乳膠凝集試劑盒說明書，試劑盒可檢測(cè)99%以上有動(dòng)力的沙門氏菌和特定的無動(dòng)力沙門氏菌，對(duì)于有些沙門氏菌無法檢測(cè)出，因此只能作為沙門氏菌檢測(cè)的輔助方法。