葛京城

摘 要 高效液相色譜法（HPLC）是一種以液體或者液化物質(zhì)作為流動(dòng)相，經(jīng)過固定相后被分離的色譜分析方法，目前它是一種快速、高效的新型快速分析分離技術(shù)。本文概述了手性藥物及手性藥物拆分的意義及方法，著重分析了高效液相色譜法（HPLC）在手性藥物分析領(lǐng)域的最新應(yīng)用情況和拆分手性藥物的方法，分析了HPLC手性藥物分析方法的選擇，最后對(duì)高效液相色譜法在手性藥物分析領(lǐng)域的發(fā)展方向和應(yīng)用趨勢(shì)進(jìn)行展望和預(yù)測(cè)。

關(guān)鍵詞 高效液相色譜（HPLC）;手性藥物拆分;CSP;CMPA;CDR

高效液相色譜（HPLC）是一種在近年來被廣泛應(yīng)用的色譜分析方法，其與傳統(tǒng)色譜法相比，具有效率高、靈敏性高和分析分離速度快等優(yōu)點(diǎn)。高效液相色譜法原理上可對(duì)所有的熱穩(wěn)定性差、沸點(diǎn)高和相對(duì)分子質(zhì)量大的有機(jī)物進(jìn)行分離和分析，其不僅可用于對(duì)手性藥物的定量分析，而且可用于制備分離，在手性藥物分析領(lǐng)域具有較為廣泛的應(yīng)用。

1手性藥物及手性藥物拆分的意義及方法

目前手性藥物在藥品市場(chǎng)上占據(jù)較大比重，據(jù)調(diào)查幾乎所有的半合成藥物以及天然藥物都具有手性特征，手性藥物在全合成藥物中的占比也達(dá)到了百分之四十以上，目前超過三分之一的市售的藥品都具有手性結(jié)構(gòu)。手性特征也在人體內(nèi)的很多大分子物質(zhì)如受體蛋白、載體蛋白、酶、血漿蛋白等一些大分子蛋白質(zhì)中有所體現(xiàn)，手性藥物進(jìn)入以內(nèi)后與體內(nèi)的大分子物質(zhì)進(jìn)行相互識(shí)別后發(fā)生反應(yīng)，在代謝過程中產(chǎn)生的藥理作用并不相同，因此對(duì)手性藥物進(jìn)行拆分并測(cè)定手性藥物的藥理、藥學(xué)反應(yīng)過程和機(jī)制對(duì)提高藥物的效果、降低藥物的毒性等都有重要的意義[1]。

過去常使用酶消化法、分布結(jié)晶法等非色譜方法對(duì)手性藥物進(jìn)行拆分，拆分過程耗時(shí)、煩瑣，具有較大的不可控性，近年來隨著色譜技術(shù)的不斷發(fā)展，在對(duì)手性藥物進(jìn)行拆分方面有了較為廣泛的應(yīng)用[2]。 目前在手性藥物進(jìn)行拆分時(shí)較為常用的方法有氣象色譜、毛細(xì)管電泳和毛細(xì)管色譜以及高效液相色譜法等，其中高效液相色譜法（HPLC）以其反應(yīng)速度快、效率高、準(zhǔn)確性強(qiáng)等特點(diǎn)被廣泛應(yīng)用。

2高效液相色譜（HPLC）拆分手性藥物的方法

當(dāng)前直接法和間接法是高效液相色譜（HPLC）拆分手性藥物較為常用的方法，其中直接法中較為常用的方法是手性流動(dòng)性添加劑法（CMPA）以及手性固定相法（CSP），其原理是通過使用手性固定相來提供手性中心，進(jìn)行拆分藥物;間接法中較為常用的方法是手性衍生化試劑法（CDR），其原理是通過將另一個(gè)手性中心引入對(duì)映體分子中形成份對(duì)映體，然后使用正相液相法分離。

2.1 手性固定相法（CSP）

CSP法是將手性固定相的表面的手性試劑與手性藥物直接發(fā)生反應(yīng)后，形成非對(duì)映體，根據(jù)穩(wěn)定性的差異和復(fù)合物的相對(duì)強(qiáng)度將非對(duì)映體對(duì)進(jìn)行分離。但是CSP法對(duì)于體內(nèi)手性物的分析時(shí)無法排除內(nèi)源物質(zhì)的影響，且手性柱成本較高，采用和非手性柱聯(lián)合使用的方式，將其與非手性柱相連[3]，讓目標(biāo)手性藥物隨流動(dòng)相依次通過非手性柱和手性柱，分別進(jìn)行拆分，增加了手性固定相法的適用范圍。

2.2 手性流動(dòng)性添加劑法（CMPA）

金屬配合物、蛋白質(zhì)、環(huán)糊精等都是常見的手性流動(dòng)性添加劑。在HPLC的流動(dòng)相中添加金屬配合物制成三元非對(duì)映體配合物，根據(jù)配合物會(huì)和固定相發(fā)生排斥或吸引反應(yīng)的原理將對(duì)映體進(jìn)行分離。銅和鋅等都是常用的配位金屬。氨基酸及衍生物、多巴胺、氧氟沙星等均可用此類方法分離[4]。由于目前為止還未發(fā)現(xiàn)任何一種試劑可以作為通用型試劑，所以在選擇手性試劑時(shí)可能會(huì)經(jīng)過多次嘗試，選擇分離效果最好的手性添加劑。

2.3 手性衍生化試劑法（CDR）

當(dāng)滿足以下條件時(shí)可以使用手性衍生化試劑法：①手性化合物對(duì)映體中有氨基、羥基或羧基等基團(tuán)，其容易發(fā)生衍生作用;②反應(yīng)產(chǎn)物具有穩(wěn)定的化學(xué)性質(zhì)，手性試劑具有穩(wěn)定的手性性質(zhì)，以及較高的光學(xué)純度，不易發(fā)生變化，不會(huì)在色譜條件下發(fā)生消旋化反應(yīng)[5]。根據(jù)手性化合物對(duì)映體中有氨基、羥基或羧基等基團(tuán)以及分離效率之間的差別，將反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行分離。胺類試劑、?；噭┞燃姿狨ヮ惖染悄壳俺Ｓ玫难苌噭Ｒ?yàn)樵擃惙椒ㄊ鞘褂闷胀ㄉV柱，因此成本較低，分離的靈敏度較高。

3HPLC手性藥物分析方法的選擇

當(dāng)研究目的是只對(duì)手性藥物進(jìn)行分析時(shí)，可選擇手性流動(dòng)性添加劑法（CMPA）和手性衍生化試劑法（CDR），當(dāng)不僅只對(duì)于手性藥物進(jìn)行分析，而且用于手性藥物的制備時(shí)，要選擇分離手性固定相法（CSP）。CDR法時(shí)可在普通光柱上實(shí)現(xiàn)，成本較低，要求手性化合物對(duì)映體中有容易發(fā)生衍生作用的基團(tuán)。CMPA法是針對(duì)不同對(duì)映體使用不同的添加劑，使CMPA法時(shí)用注意到手性選擇劑和其他添加劑的濃度、溫度、pH等條件對(duì)于拆分效果的影響[6]。CSP法作為目前手性藥物分離領(lǐng)域最重要的一種分離方法，具有靈敏度高、反應(yīng)速度快、效果突出等優(yōu)點(diǎn)。

4結(jié)束語

高效液相色譜法不僅可用于對(duì)手性藥物的定量分析，而且可用于制備分離，未來隨著色譜技術(shù)的不斷發(fā)展和新材料的不斷應(yīng)用，HPLC法可不斷改善臨床應(yīng)用的弊端提高應(yīng)用范圍，另外隨著其與其他新技術(shù)的聯(lián)合應(yīng)用，將為新藥物研發(fā)和提高藥物作用提供技術(shù)保障。

參考文獻(xiàn)

[1] 王轉(zhuǎn)，尹東東，王杏林，等.高效液相色譜法在手性藥物分析中的研究進(jìn)展[J].藥物分析雜志，2015，35（7）：1127-1133.

[2] 劉麗敏.高效液相色譜在中草藥和抗生素類藥物分析中的應(yīng)用[D].成都：西南大學(xué)，2008.

[3] 潘永玉.手性藥物的對(duì)映體分離方法與藥物動(dòng)力學(xué)研究[D].沈陽：沈陽藥科大學(xué)，2007.

[4] 康自華，陽小成，陳婷.高效液相色譜法在藥物分析中的應(yīng)用[J].廣東微量元素科學(xué)，2006（8）：18-22.

[5] 張瑋，尚平，姚軍.手性藥物與手性藥物的分離分析技術(shù)[J].河北化工，2004，27（5）：12-14.

[6] 陸亞男，劉大有，孫永旭，等.手性藥物的高效液相色譜拆分方法[J].長(zhǎng)春中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，20（3）：34-35.