陳照生

[摘要]目的 探討血清抗M型磷脂酶A2受體（PLA2R）抗體、尿IgG4檢測在特發(fā)性膜性腎病診斷中的應(yīng)用價值。方法 選取2016年3月～2019年4月我院接收的86例膜性腎病患者，將腎活檢術(shù)病理檢查發(fā)現(xiàn)特發(fā)性膜性腎病的52例患者納為特發(fā)性組，將34例繼發(fā)性膜性腎病患者納為繼發(fā)性組。采集兩組患者的靜脈血和中段尿樣本進(jìn)行血清抗PLA2R抗體和尿IgG4指標(biāo)檢測。比較兩組患者血清抗PLA2R抗體檢測陽性率，分析其特異度、靈敏度、準(zhǔn)確率，同時比較兩組患者的尿IgG4指標(biāo)檢測結(jié)果并進(jìn)行ROC曲線分析。結(jié)果 特發(fā)性組的血清抗PLA2R抗體檢測陽性率（90.38%）高于繼發(fā)性組（5.88%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。血清抗PLA2R抗體診斷特發(fā)性膜性腎病的特異度、靈敏度、準(zhǔn)確率分別為94.12%（32/34）、90.38%（47/52）、91.86%（79/86）。特發(fā)性組患者的尿IgG4指標(biāo)為（0.79±0.12）g/L，高于繼發(fā)性組的（0.52±0.08）g/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。ROC曲線結(jié)果顯示，尿IgG4診斷特發(fā)性膜性腎病的曲線下面積為0.856（檢測結(jié)果>0.7），特異度、靈敏度分別為82.70%、50.00%，診斷價值相對理想。血清抗PLA2R抗體診斷特發(fā)性膜性腎病的特異度、靈敏度高于尿IgG4診斷，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 特發(fā)性膜性腎病患者的血清抗PLA2R抗體陽性率、尿IgG4指標(biāo)明顯大于繼發(fā)性膜性腎病患者，可以用作臨床診斷特發(fā)性膜性腎病的參考依據(jù)。

[關(guān)鍵詞]血清抗PLA2R抗體;尿IgG4;特發(fā)性膜性腎病;診斷價值

[中圖分類號] R446.11? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-4721（2020）7（c）-0148-04

Application value of serum anti-M-type phospholipase A2 receptor antibody and urine IgG4 detection in the diagnosis of idiopathic membranous nephropathy

CHEN Zhao-sheng

Department of Clinical Laboratory， Qingdao Third People′s Hospital， Shandong Province， Qingdao? ?266000， China

[Abstract] Objective To investigate the application value of serum anti-M-type phospholipase A2 receptor （PLA2R） antibody and urine IgG4 detection in the diagnosis of idiopathic membranous nephropathy. Methods From March 2016 to April 2019， 86 patients with membranous nephropathy in our hospital were selected， and 52 cases of idiopathic membranous nephropathy found by renal biopsy were included in the idiopathic group， 34 cases of secondary membranous nephropathy were included in the secondary group. The venous blood and mid-range urine samples were collected from two groups of patients for detecting serum PLA2R antibody and urine IgG4 indicators. The positive rate of serum anti PLA2R antibody was compared between the two groups， and the specificity， sensitivity and accuracy were analyzed. At the same time， the results of urine IgG4 of the two groups were compared and ROC curve was analyzed. Results The positive rate of serum anti-PLA2R antibody detection in the idiopathic group （90.38%） was higher than that in the secondary group （5.88%）， the difference was statistically significant （P<0.05）. The specificity， sensitivity and accuracy of serum anti PLA2R antibody in the diagnosis of idiopathic membranous nephropathy were 94.12% （32/34）， 90.38% （47/52） and 91.86% （79/86）， respectively. The urinary IgG4 in the idiopathic group was （0.79±0.12） g/L， which was higher than that in the secondary group （[0.52±0.08] g/L）， the difference was statistically significant （P<0.05）. The ROC curve showed that the area under the curve of urine IgG4 in the diagnosis of idiopathic membranous nephropathy was 0.856 （detection result >0.7）， the specificity and sensitivity were 82.70% and 50.00%， respectively. The diagnostic value was relatively ideal. The specificity and sensitivity of serum anti PLA2R antibody in the diagnosis of idiopathic membranous nephropathy were higher than those of urine IgG4， the differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion The positive rate of serum anti PLA2R antibody and urine IgG4 in patients with idiopathic membranous nephropathy are significantly higher than those in patients with secondary membranous nephropathy， which can be used as a reference for clinical diagnosis of idiopathic membranous nephropathy.

[Key words] Serum anti-PLA2R antibody; Urine IgG4; Idiopathic membranous nephropathy; Diagnostic value

特發(fā)性膜性腎病是一種自身免疫性疾病，其在我國的發(fā)病率迅速增高，已受到醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注[1]。臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，特發(fā)性膜性腎病是成人腎病綜合征最常見的病理表現(xiàn)，高發(fā)于中老年人群，其中中老年男性的發(fā)病率較女性高，且近年來已表現(xiàn)出年輕化的趨勢。目前，臨床診斷特發(fā)性膜性腎病較為準(zhǔn)確的方法是腎活檢術(shù)病理檢，其被認(rèn)為是臨床診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但這種方式存在局部創(chuàng)傷，尤其針對合并心血管疾病患者，穿刺活檢存在局限性，且耗時長，花費(fèi)高，不能夠在門診篩查中廣泛推廣，因此需要尋找另外一種能夠滿足臨床廣泛篩查的診斷方法[2-3]。血清抗M型磷脂酶A2受體（PLA2R）抗體是自身特異性IgG4抗體的主要靶抗原，與IgG4抗體共同定位于腎小球免疫復(fù)合物沉積中。研究顯示，導(dǎo)致特發(fā)性膜性腎病的主要抗原就是抗PLA2R抗體，顯然血清抗PLA2R抗體與IgG4與特發(fā)性膜性腎病具有十分密切的關(guān)系[4-5]。本研究旨在探討血清抗PLA2R抗體、尿IgG4檢測在特發(fā)性膜性腎病診斷中的應(yīng)用價值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2016年3月～2019年4月我院接收的86例膜性腎病患者，將其中的52例特發(fā)性膜性腎病患者納為特發(fā)性組，將34例繼發(fā)性膜性腎病患者納為繼發(fā)性組。特發(fā)性組中，男33例，女19例;年齡38～58歲，平均（47.63±4.75）歲;病程1～3年，平均（1.63±0.47）年;清蛋白指標(biāo)（25.39±3.48）g/L;尿白蛋白總量（3.86±1.24）g/24 h;血肌酐（75.86±8.24）μmol/L;腎小球?yàn)V過率（97.45±11.28）ml/（min·1.73 m2）。繼發(fā)性組中，男22例，女12例;年齡36～59歲，平均（48.83±4.35）歲;病程1～3年，平均（1.57±0.53）年;清蛋白指標(biāo)（25.72±3.66）g/L;尿白蛋白總量（3.95±1.12）g/24 h;血肌酐（76.21±8.33）μmol/L;腎小球?yàn)V過率（95.84±10.72）ml/（min·1.73 m2）。兩組患者的性別、年齡、病程、清蛋白指標(biāo)、尿白蛋白總量、血肌酐、腎小球?yàn)V過率等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：兩組患者均按照《膜性腎病的診斷與治療——2012年KDIGO指南解讀》[6]診斷標(biāo)準(zhǔn)并經(jīng)腎活檢術(shù)病理檢查確診;年齡≤60歲患者;近期未接受激素、免疫抑制劑藥物治療患者;患者及家屬簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有感染性疾病（乙肝病毒感染、丙型病毒感染）患者;合并系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病患者;合并急性腎衰竭患者;合并血栓栓塞患者;合并腫瘤患者;存在腎毒性藥物服用史;合并免疫功能障礙患者;精神異常不配合患者。

1.2方法

患者提前1 d禁酒，避免食用過度油膩性食物。檢測當(dāng)天采集患者清晨空腹靜脈血5 ml和中段尿液10 ml，立即進(jìn)行血清抗PLA2R抗體和尿IgG4指標(biāo)檢測。將采集的靜脈血經(jīng)離心機(jī)進(jìn)行離心處理，轉(zhuǎn)速3000 r/min，離心時間5 ml，靜置后取上層血清，使用德國歐蒙公司提供的血清抗PLA2R抗體試劑盒，采用間接免疫熒光法檢測患者血清抗PLA2R抗體，將患者血清按照1∶10的比例進(jìn)行稀釋，然后將稀釋后的血清與轉(zhuǎn)染PLA2R抗原的細(xì)胞共同進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，并與被熒光素FITC標(biāo)記的抗PLA2R抗體（IgG）結(jié)合，使用上海光學(xué)廠提供的DYF-680高品質(zhì)LED熒光顯微觀察結(jié)合結(jié)果。使用上海康朗生物科技有限公司提供的人IgG4酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測試劑盒，采用雙抗體夾心ELISA對采集的患者尿液樣本進(jìn)行尿IgG4指標(biāo)檢測。

1.3觀察指標(biāo)及評價標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1血清抗PLA2R抗體檢測結(jié)果及診斷效能分析? 比較兩組患者的血清抗PLA2R抗體檢測陽性率，分析其特異度、靈敏度、準(zhǔn)確率。陽性：轉(zhuǎn)染抗PLA2R抗體的細(xì)胞在熒光顯微鏡下顯色;陰性：轉(zhuǎn)染抗PLA2R抗體的細(xì)胞在熒光顯微鏡下不顯色。陽性率=陽性例數(shù)/總例數(shù)×100%，靈敏度=真陽性例數(shù)/（真陽性+假陰性）例數(shù)×100%，特異度=真陰性例數(shù)/（假陽性+真陰性）例數(shù)×100%，準(zhǔn)確率=（真陽性+真陰性）例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.3.2尿IgG4檢測結(jié)果及受試工作特征（ROC）分析? 比較兩組患者的尿IgG4指標(biāo)檢測結(jié)果并進(jìn)行ROC分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用百分率表示，采用χ2檢驗(yàn)，將特發(fā)性膜性腎病作為狀態(tài)變量，尿IgG4指標(biāo)作為自變量，繪制ROC曲線，觀察曲線下面積（AUC），檢驗(yàn)?zāi)騃gG4指標(biāo)診斷特發(fā)性膜性腎病的價值，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1血清抗PLA2R抗體檢測結(jié)果及診斷效能分析

特發(fā)性組血清抗PLA2R抗體檢測陽性47例，陽性率為90.38%;繼發(fā)性組血清抗PLA2R抗體檢測陽性2例，陽性率為5.88%（表1）;特發(fā)性組的血清抗PLA2R抗體檢測陽性率明顯高于繼發(fā)性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=59.885，P=0.000）;血清抗PLA2R抗體診斷特發(fā)性膜性腎病的特異度、靈敏度、準(zhǔn)確率分別為94.12%（32/34）、90.38%（47/52）、91.86%（79/86）。

2.2尿IgG4檢測結(jié)果及ROC曲線分析

2.2.1尿IgG4水平表達(dá)比較? 特發(fā)性組患者的尿IgG4指標(biāo)為（0.79±0.12）g/L，高于繼發(fā)性組的（0.52±0.08）g/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=11.538，P=0.000）。

2.2.2 ROC曲線結(jié)果? ROC曲線結(jié)果顯示，尿IgG4診斷特發(fā)性膜性腎病的曲線下面積為0.856，最佳截?cái)嘀禐?.585 g/L時，可以獲得最佳診斷效能，對應(yīng)的特異度、靈敏度分別為0.827、0.500，約登指數(shù)為0.327，診斷價值相對理想，具體見圖1（封三）。

2.3診斷價值比較

血清抗PLA2R抗體診斷特發(fā)性膜性腎病的特異度為94.12%，靈敏度為90.38%，高于尿IgG4診斷的82.70%、50.00%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3討論

膜性腎病是一種自身免疫性足細(xì)胞病，按照其發(fā)病原因分為特發(fā)性膜性腎病和繼發(fā)性膜性腎病兩種，繼發(fā)性膜性腎病繼發(fā)于多種系統(tǒng)性疾病，而特發(fā)性膜性腎病是免疫復(fù)合物介導(dǎo)的腎小球疾病，且有一定概率轉(zhuǎn)化成終末期腎臟病[7-8]。因此，臨床需要有效甄別特發(fā)性膜性腎病和繼發(fā)性膜性腎病，才能采取有效的治療方案。抗PLA2R抗體已被證實(shí)是特發(fā)性膜性腎病的自身抗原，可以作為特發(fā)性膜性腎病診斷的一種標(biāo)志物[8]。康郁林[9]的研究指出，IgG4指標(biāo)的變化與腎臟疾病的發(fā)生密切相關(guān)，腎臟疾病患者血清與尿液中均可檢出IgG4，研究其指標(biāo)變化對腎臟疾病的診斷具有重要意義。

本研究中，特發(fā)性組的血清抗PLA2R抗體檢測陽性率明顯高于繼發(fā)性組（P<0.05），血清抗PLA2R抗體診斷特發(fā)性膜性腎病的特異度、靈敏度、準(zhǔn)確率分別為94.12%、90.38%、91.86%;特發(fā)性組患者的尿IgG4指標(biāo)高于繼發(fā)性組（P<0.05）;ROC曲線結(jié)果顯示，尿IgG4診斷特發(fā)性膜性腎病的曲線下面積為0.856（檢測結(jié)果>0.7），特異度、靈敏度分別為0.827、0.500，診斷價值相對理想，提示特發(fā)性膜性腎病患者血清抗PLA2R抗體陽性率、尿IgG4指標(biāo)明顯優(yōu)于繼發(fā)性膜性腎病患者，特異度較好，可以用作臨床診斷特發(fā)性膜性腎病的參考依據(jù)。PLA2R是一種Ⅰ型跨膜受體蛋白，是腎小球足細(xì)胞上的一種主要靶抗原，血清中IgG4會與PLA2R抗體結(jié)合，形成原位免疫復(fù)合物并沉積于上皮下，使機(jī)體分泌出抗PLA2R抗體，激活補(bǔ)體C5b-9，而補(bǔ)體C5b-9會釋放蛋白酶，產(chǎn)生氧自由基，改變細(xì)胞結(jié)構(gòu)，造成足細(xì)胞受損、凋亡，進(jìn)一步使得患者腎小球基底膜發(fā)生病理改變，導(dǎo)致腎過濾系統(tǒng)出現(xiàn)功能障礙，最終患者出現(xiàn)尿蛋白[10-12]。張藝等[13]的研究顯示，血清抗PLA2R抗體在特發(fā)性膜性腎病診斷中具有特異性，使用熒免疫法檢測血清抗PLA2R抗體效果較好，可以提高特發(fā)性膜性腎病陽性診斷率。IgG4是免疫球蛋白的主要成分，是腎小球沉積物中的一種主要免疫球蛋白亞型，與抗PLA2R抗體可以形成優(yōu)勢沉積，且IgG4指標(biāo)越高，這種優(yōu)勢沉積的作用越大，腎臟中免疫復(fù)合物的沉積程度越大，對患者腎功能的損害也就越大[14]。計(jì)蕾等[15]的研究也同樣指出，特發(fā)性膜性腎病患者的血清抗PLA2R抗體、尿IgG4與患者病情及遠(yuǎn)期結(jié)局有關(guān)，血清抗PLA2R抗體、尿IgG4水平越高，患者尿蛋白越嚴(yán)重，且治療復(fù)發(fā)率以及遠(yuǎn)期死亡率也會相對增高。從上述討論中可以看出，抗PLA2R抗體在特發(fā)性膜性腎病的發(fā)病過程中伴有重要角色，將來可以探索針對抗PLA2R抗體的靶向治療方案，通過免疫吸附快速清除血清中的抗PLA2R抗體來減輕特發(fā)性膜性腎病病情。

綜上所述，特發(fā)性膜性腎病患者血清抗PLA2R抗體陽性率、尿IgG4指標(biāo)明顯大于繼發(fā)性膜性腎病患者，可以用作臨床診斷特發(fā)性膜性腎病的參考依據(jù)。

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（收稿日期：2019-11-20）