王海蘭 譚洪文 楊志龍 李彩花 余雙

[摘要]目的 探討EBV-DNA定量檢測(cè)在鼻咽癌放療后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移患者中的臨床意義。方法 選取吉安市中心人民醫(yī)院2019年1～11月就診并經(jīng)治療后臨床緩解的60例鼻咽癌患者作為研究對(duì)象，按照放療后療效分為持續(xù)緩解組38例、局部復(fù)發(fā)組13例、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組9例。所有患者均采用EB病毒核酸擴(kuò)增（PCR）熒光定量檢測(cè)全血中EBV-DNA基因拷貝數(shù)，比較三組患者的EBV-DNA陽(yáng)性檢出率和EBV-DNA拷貝數(shù)，進(jìn)一步比較復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移者二次治療前后EBV-DNA拷貝數(shù)的變化情況。結(jié)果 局部復(fù)發(fā)組和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組EBV-DNA陽(yáng)性檢出率及EBV-DNA拷貝數(shù)均高于持續(xù)緩解組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;局部復(fù)發(fā)組和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組EBV-DNA陽(yáng)性檢出率及EBV-DNA拷貝數(shù)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;局部復(fù)發(fā)組和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組治療后EBV-DNA拷貝數(shù)均低于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;局部復(fù)發(fā)組和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組治療前后EBV-DNA拷貝數(shù)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 不同放療預(yù)后患者血漿EBV-DNA定量檢測(cè)結(jié)果存在顯著差異，血漿EBV-DNA定量檢測(cè)能夠作為監(jiān)測(cè)鼻咽癌放療后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的可靠腫瘤標(biāo)志物。

[關(guān)鍵詞]鼻咽癌;放療;復(fù)發(fā);轉(zhuǎn)移;EBV-DNA定量檢測(cè)

[中圖分類(lèi)號(hào)] R739.63? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-4721（2020）7（b）-0106-04

Exploration on the clinical significance of EBV-DNA quantitative detection in patients with recurrence and metastasis of nasopharyngeal carcinoma after radiotherapy

WANG Hai-lan1? ?TAN Hong-wen1? ?YANG Zhi-long2? ?LI Cai-hua1? ?YU Shuang3

1. Department of Oncology， Ji′an Central People′s Hospital， Jiangxi Province， Ji′an? ?343000， China; 2. Intensive Care Unit， Ji′an Hospital of Shanghai Oriental Hospital， Jiangxi Province， Ji′an? ?343000， China; 3. Department of Oncology， Yichun People′s Hospital， Jiangxi Province， Yichun? ?336000， China

[Abstract] Objective To explore the clinical significance of EBV-DNA quantitative detection in patients with recurrence and metastasis of nasopharyngeal carcinoma after radiotherapy. Methods A total of 60 patients with nasopharyngeal carcinoma treated in Ji′an Central People′s Hospital from January to November 2019 were selected as the research objects. According to the curative effect after radiotherapy， they were divided into three groups： continuous remission group （38 cases）， local recurrence group （13 cases） and distant metastasis group （9 cases）. EBV-DNA gene copies in whole blood were detected by PCR in all patients. The positive detection rate of EBV-DNA and the copy number of EBV-DNA were compared among the three groups， and the changes of EBV-DNA copies before and after the second treatment were further compared. Results The positive detection rate of EBV-DNA and the copy number of EBV-DNA in the local recurrence group and the distant metastasis group were higher than those in the continuous remission group， and the differences were statistically significant （P<0.05）; the positive detection rate of EBV-DNA and the copy number of EBV-DNA in the local recurrence group and the distant metastasis group were not significantly differents （P>0.05）; the copy number of EBV-DNA in the local recurrence group and the distant metastasis group after treatment were lower than those before treatment， the difference was statistically significant （P<0.05）. There were no significant differences in the number of EBV-DNA copies between local recurrence group and distant metastasis group before and after treatment （P>0.05）. Conclusion There are significant differences in the results of quantitative detection of plasma EBV-DNA in patients with different radiotherapy prognosis. Quantitative detection of plasma EBV-DNA can be used as a reliable tumor marker to monitor the recurrence and metastasis of nasopharyngeal carcinoma after radiotherapy.

[Key words] Nasopharyngeal carcinoma; Radiotherapy; Recurrence; Metastasis; Quantitative detection of EBV-DNA

[基金項(xiàng)目]江西省吉安市科學(xué)技術(shù)局項(xiàng)目（吉市科計(jì)字[2019]8號(hào)（19））

鼻咽癌是臨床發(fā)病率較高的一種頭頸部惡性腫瘤，其發(fā)病具有明顯的地域特色，中國(guó)南方、東南亞和北非等國(guó)家和地區(qū)是該病的高發(fā)區(qū)域[1]。放療是臨床治療鼻咽癌的主要手段，能有效控制患者病情進(jìn)展，但復(fù)發(fā)率仍較高。調(diào)查研究顯示，40%～50%的鼻咽癌完全緩解者放療后仍會(huì)出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的情況，導(dǎo)致治療失敗[2]。如何早期監(jiān)測(cè)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是采取治療干預(yù)、延長(zhǎng)患者生存時(shí)間的關(guān)鍵。影像學(xué)檢查是判斷鼻咽癌復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的常規(guī)手段，但檢查費(fèi)用較高，敏感性也略顯不足[3]。近幾年，越來(lái)越多的研究報(bào)道指出，采用EB病毒核酸擴(kuò)增（PCR）熒光定量技術(shù)進(jìn)行血漿EBV-DNA定量檢測(cè)在鼻咽癌的診斷和病情評(píng)估中具有一定指導(dǎo)價(jià)值，可作為預(yù)測(cè)患者放療預(yù)后的生化指標(biāo)[4-5]。部分專(zhuān)家也指出，血漿EBV-DNA定量檢測(cè)能夠較臨床或影像學(xué)檢查早3.5～6.0個(gè)月發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移，敏感性和可靠性均較好[6]。本研究即對(duì)不同放療預(yù)后患者EBV-DNA定量檢測(cè)結(jié)果的差異進(jìn)行比較分析，以期為及早發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移、開(kāi)展治療干預(yù)提供指導(dǎo)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取吉安市中心人民醫(yī)院2019年1～11月就診并經(jīng)治療后臨床緩解的60例鼻咽癌患者作為研究對(duì)象。所有患者中，男47例，女13例，年齡25～64歲，平均（50.22±5.45）歲。放療后按照治療預(yù)后分為持續(xù)緩解組38例、局部復(fù)發(fā)組13例、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組9例。其中，持續(xù)緩解組男30例，女8例，年齡25～61歲，平均（49.52±5.61）歲;局部復(fù)發(fā)組男10例，女3例，年齡26～63歲，平均（54.15±5.75）歲;遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組男7例，女2例，年齡26～64歲，平均（55.05±5.80）歲。三組患者的性別、年齡等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。所有患者均知情同意，本研究經(jīng)吉安市中心人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)手術(shù)病理檢查明確診斷為鼻咽癌低分化鱗癌或非角化性癌;臨床分期為cT1-4N0-3M0;調(diào)強(qiáng)適形放療前血漿EBV-DNA拷貝數(shù)較高，放療后血漿EBV-DNA拷貝數(shù)為0 copies/ml;影像學(xué)檢查證實(shí)臨床緩解;簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤者;有免疫系統(tǒng)或血液系統(tǒng)疾病者;隨訪失訪或因個(gè)人原因中途退出本研究者。

1.3方法

所有患者均抽取外周靜脈血2 ml外送至廣州金域第三方檢測(cè)中心，采用EB病毒PCR熒光定量檢測(cè)全血中EBV-DNA基因拷貝數(shù)，所用試劑盒購(gòu)自中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司，操作步驟按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。結(jié)果判定：增長(zhǎng)曲線不呈S型或Ct值=30時(shí)，判斷為EBV-DNA陰性，其余情況為陽(yáng)性。

局部復(fù)發(fā)者經(jīng)鼻咽鏡檢查結(jié)合病理活檢證實(shí)，頸部淋巴結(jié)復(fù)發(fā)經(jīng)包塊穿刺活檢證實(shí)，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移經(jīng)影像學(xué)檢查判定。復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移者視情況選擇局部姑息放療、姑息化療或靶向治療，并繼續(xù)監(jiān)測(cè)血漿EBV-DNA拷貝數(shù)。

1.4觀察指標(biāo)

比較三組患者的EBV-DNA陽(yáng)性檢出率和EBV-DNA拷貝數(shù)，進(jìn)一步比較復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移者二次治療前后EBV-DNA拷貝數(shù)變化情況。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1三組EBV-DNA陽(yáng)性檢出率及EBV-DNA拷貝數(shù)的比較

局部復(fù)發(fā)組和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組患者的EBV-DNA陽(yáng)性檢出率及EBV-DNA拷貝數(shù)均高于持續(xù)緩解組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;局部復(fù)發(fā)組和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組患者的EBV-DNA陽(yáng)性檢出率及EBV-DNA拷貝數(shù)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

2.2復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移者二次治療前后EBV-DNA拷貝數(shù)的比較

局部復(fù)發(fā)組和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組患者治療后的EBV-DNA拷貝數(shù)均低于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;局部復(fù)發(fā)組和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組患者治療前后的EBV-DNA拷貝數(shù)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表2）。

3討論

鼻咽癌是我國(guó)發(fā)病率較高的一種惡性腫瘤，局部侵襲力和淋巴轉(zhuǎn)移能力較強(qiáng)，由于其病理特征較為特殊，因此放療十分敏感，臨床上也多采取放療進(jìn)行治療。但調(diào)查研究顯示，鼻咽癌患者放療臨床緩解后容易出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等不良情況，嚴(yán)重影響患者的預(yù)后效果[7]。有專(zhuān)家指出，若能早期發(fā)現(xiàn)局部復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，并及時(shí)予以個(gè)體化二次治療則能夠進(jìn)一步改善患者的預(yù)后[8]。因此，對(duì)鼻咽癌放療后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的監(jiān)測(cè)工作十分重要。

影像學(xué)方法是監(jiān)測(cè)鼻咽癌放療后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的傳統(tǒng)手段，臨床開(kāi)展也較為廣泛，但頻繁的影像檢查會(huì)給患者帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，同時(shí)在診斷復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移方面敏感性也稍顯不足，漏診率難以令人滿意。分析原因主要為：CT、MRI等影像手段屬于局部顯像技術(shù)，無(wú)法完全檢測(cè)到所有可能發(fā)生轉(zhuǎn)移的部位;CT、MRI等影像手段在放療后腫瘤浸潤(rùn)與纖維化鑒別、發(fā)現(xiàn)較小的轉(zhuǎn)移灶、殘存腫瘤性質(zhì)判斷等方面存在一定局限性[9]。

EBV-DNA在初診鼻咽癌患者中的重要性已得到國(guó)內(nèi)外專(zhuān)家的一致認(rèn)可，國(guó)外大量研究報(bào)道指出，血漿中EBV-DNA拷貝數(shù)與鼻咽癌TNM臨床分期呈正相關(guān)，即隨著鼻咽癌TNM臨床分期的升高血漿EBV-DNA拷貝數(shù)水平越高[10-11]。因此，血漿中EBV-DNA拷貝數(shù)能夠在分子水平上反映鼻咽癌患者的病情程度，在鼻咽癌預(yù)后評(píng)估中有較高的應(yīng)用價(jià)值[12]。國(guó)內(nèi)部分專(zhuān)家也指出，能夠利用全血中EBV-DNA的陽(yáng)性檢出作為監(jiān)控鼻咽癌放療預(yù)后的腫瘤標(biāo)志物，放療后臨床緩解者EBV-DNA陽(yáng)性率與未緩解者存在極大差異[13-14]。陳佳等[15]的研究也認(rèn)為，利用EBV-DNA陽(yáng)性率和EBV-DNA拷貝數(shù)進(jìn)行鼻咽癌患者放療后臨床緩解者發(fā)生局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移監(jiān)測(cè)是可行的。

放射治療是治療鼻咽癌的常用方法之一，但放射治療不僅會(huì)對(duì)癌細(xì)胞造成破壞，也會(huì)對(duì)機(jī)體的正常細(xì)胞產(chǎn)生較大的損傷，臨床治療副作用較大。鼻咽癌患者的放射治療會(huì)造成鼻黏膜干燥、口腔黏膜干燥等癥狀，還會(huì)造成患者的鼻腔出血以及引起不同程度的疼痛，其并發(fā)癥主要包括口干、干燥性的角膜炎、放射性腦病、張口困難、皮膚反應(yīng)等。因此，臨床需要做好必要的防護(hù)，以減少不良反應(yīng)的發(fā)生。本研究的技術(shù)關(guān)鍵是定量檢測(cè)經(jīng)放療治療后臨床緩解的鼻咽癌患者的EBV-DNA拷貝數(shù)，了解EBV-DNA拷貝數(shù)與鼻咽癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移之間的相關(guān)性，從而預(yù)測(cè)患者的預(yù)后情況。本研究結(jié)果顯示，局部復(fù)發(fā)組和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組患者的EBV-DNA陽(yáng)性檢出率及EBV-DNA拷貝數(shù)均高于持續(xù)緩解組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;局部復(fù)發(fā)組和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組患者治療后的EBV-DNA拷貝數(shù)均低于治療前，組內(nèi)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。提示復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移者存在EBV-DNA陽(yáng)性檢出率及EBV-DNA拷貝數(shù)升高的情況，且隨著二次治療又逐漸下降，與上述研究報(bào)道相符。這也與國(guó)內(nèi)相關(guān)研究中血漿EBV-DNA含量與腫瘤負(fù)荷有關(guān)的說(shuō)法是一致的[16]，說(shuō)明通過(guò)放療、化療等能夠減少腫瘤負(fù)荷，從而減少腫瘤細(xì)胞釋放入血的EBV-DNA，導(dǎo)致血漿中EBV-DNA拷貝數(shù)下降。由此可見(jiàn)，EBV-DNA定量檢測(cè)可作為早期預(yù)測(cè)局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的腫瘤標(biāo)志物，能夠?yàn)樵缙诓扇≈委煾深A(yù)、延長(zhǎng)患者總生存時(shí)間和生活質(zhì)量提供有利條件，也在一定程度上減輕了患者的經(jīng)濟(jì)壓力，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。但需要注意的是，本研究中局部復(fù)發(fā)組和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組患者的EBV-DNA陽(yáng)性檢出率及EBV-DNA拷貝數(shù)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;局部復(fù)發(fā)組和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組治療后的EBV-DNA拷貝數(shù)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。提示局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者EBV-DNA定量檢測(cè)結(jié)果未出現(xiàn)明顯差異，這可能與本研究樣本量較少，患者就診和EBV-DNA檢測(cè)時(shí)間存在波動(dòng)，導(dǎo)致數(shù)據(jù)存在一定限制，還需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行研究確認(rèn)。

綜上所述，不同放療預(yù)后患者血漿EBV-DNA定量檢測(cè)結(jié)果存在顯著差異，血漿EBV-DNA定量檢測(cè)能夠作為監(jiān)測(cè)鼻咽癌放療后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的可靠腫瘤標(biāo)志物。

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（收稿日期：2020-01-22）