柳 林 王麗哲 張永慶 李如江 莊寶祥

1 濰坊市人民醫(yī)院內(nèi)分泌科，261041 山東 濰坊; 2 濰坊醫(yī)學(xué)院內(nèi)科學(xué)教研室，261053 山東 濰坊;3 濰坊市人民醫(yī)院甲狀腺外科，261041 山東 濰坊; 4 濰坊醫(yī)學(xué)院組織與胚胎學(xué)教研室，261053 山東 濰坊;5 濰坊醫(yī)學(xué)院形態(tài)學(xué)教研室，261053 山東 濰坊

甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)占所有甲狀腺惡性腫瘤的80%左右[1]，不同甲狀腺組織表達(dá)的TSHR不同，TTF-1、Pax-8作為TSHR的特異性轉(zhuǎn)錄因子，對(duì)TSHR的表達(dá)起關(guān)鍵作用[2]。橋本氏病(Hashimoto thyroiditis，HT)是一種器官特異性甲狀腺自身免疫性疾病，常合并甲狀腺乳頭狀癌[3]。本文探討上述目標(biāo)蛋白在不同甲狀腺組織中的表達(dá)及其相關(guān)關(guān)系，揭示甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生發(fā)展規(guī)律，并為治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年9月至2019年6月在某院內(nèi)分泌科確診、并在甲狀腺外科行手術(shù)治療的單純PTC組織16例(A組)、HT合并PTC組織24例(B組)、癌旁正常甲狀腺組織40例(C組)，以及同期確診并接受手術(shù)的結(jié)節(jié)性甲狀腺腫(NG)組織32例(D組)。全部甲狀腺乳頭狀癌病例中，男性8例，女性32例；年齡>45歲的29例，≤45歲的11例，平均(49.6±11.34)歲；腫瘤直徑>1 cm的10例，≤1 cm的30例，平均(0.73±0.66)cm；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的17例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的23例；單純PTC 16例，合并HT的PTC 24例。在NG組中，男性7例，女性26例；年齡>45歲的22例，≤45歲的10例，平均(48.72±10.28)歲；合并HT的12例，單純NG 20例。4組患者的年齡、性別、種族等基本情況無(wú)差異。手術(shù)指征依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)《甲狀腺結(jié)節(jié)和分化型甲狀腺癌診療指南》[4]，本實(shí)驗(yàn)獲該醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)臨床病理資料不完善者；(2)其他類型的甲狀腺癌，如甲狀腺髓樣癌、未分化癌等；(3)合并其他惡性腫瘤；(4)術(shù)前行其他治療的患者。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

術(shù)中取得甲狀腺組織后，半小時(shí)內(nèi)置入10%福爾馬林溶液中，并在3日內(nèi)行脫水、透明、包埋處理。將石蠟包埋后的標(biāo)本進(jìn)行切片，每例切6張石蠟切片，4張分別行TSHR、TTF-1、Pax-8的免疫組織化學(xué)染色，1張行HE染色，1張滴加PBS溶液進(jìn)行陰性對(duì)照，在顯微鏡下觀察染色結(jié)果。

1.3 結(jié)果判讀

TSHR判讀采用Tanaka定量積分法[5]，TTF-1與 Pax-8判讀參考文獻(xiàn)[6]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 21.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，定性資料采用χ2檢驗(yàn)及Fisher確切概率法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 TSHR與TTF-1、Pax-8在PTC組、HT合并PTC組、癌旁正常組織組、NG組中的表達(dá)情況

研究發(fā)現(xiàn)，TSHR、TTF-1、Pax-8在甲狀腺組織的陽(yáng)性表達(dá)4組間差別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。TSHR、TTF-1在甲狀腺組織的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)在4組間的差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001,P=0.004)；Pax-8強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)在4組間的差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.642)，見表1。

表1 TSHR、TTF-1、Pax-8在4組甲狀腺組織的表達(dá)

對(duì)TSHR、TTF-1進(jìn)一步兩兩比較見表2，結(jié)果表明：TSHR在PTC組的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)低于NG組與癌旁正常組織(P<0.001，P=0.002)，在HT合并PTC組的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)低于在NG組(P=0.001)；TTF-1在HT合并PTC組的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)低于在NG組(P=0.002)；其他組兩兩比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.008)。

表2 TSHR、TTF-1在4組甲狀腺組織中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)的兩兩比較P值

2.2 PTC組織中TSHR、TTF-1、Pax-8的表達(dá)與PTC患者的臨床參數(shù)之間的關(guān)系

研究發(fā)現(xiàn)，在全部PTC組織中，TSHR、TTF-1的陽(yáng)性表達(dá)與性別、年齡、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況均無(wú)關(guān)；Pax-8的陽(yáng)性表達(dá)與性別、年齡、腫瘤直徑無(wú)關(guān)，而在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者表達(dá)低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P=0.030)。見表3。

表3 TSHR、TTF-1、Pax-8在PTC的表達(dá)與患者臨床參數(shù)之間的關(guān)系

3 討論

TSHR是一種甲狀腺特異性蛋白，主要位于甲狀腺濾泡細(xì)胞的基底細(xì)胞膜上，與TSH結(jié)合后調(diào)節(jié)甲狀腺細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化。對(duì)于TSHR在甲狀腺乳頭狀癌的表達(dá)特點(diǎn)，迄今學(xué)術(shù)界觀點(diǎn)不一，Biondi等[7]認(rèn)為TSHR在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)與正常組織中的表達(dá)無(wú)差異，也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)在甲狀腺乳頭狀癌中TSHR基因的啟動(dòng)子發(fā)生甲基化，導(dǎo)致其轉(zhuǎn)錄減少，表達(dá)亦隨之減少[8]。本研究發(fā)現(xiàn),TSHR在PTC組的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)低于NG組與癌旁正常組織，在HT合并PTC組的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)低于NG組。文獻(xiàn)顯示，TSHR參與AITD及甲狀腺腫的形成，并參與HT中甲狀腺濾泡的破壞與萎縮[9]，故HT患者易合并PTC。本研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)，在全部PTC組中，TSHR的陽(yáng)性表達(dá)與性別、年齡、腫瘤直徑、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移不存在相關(guān)關(guān)系。

TTF-1是在甲狀腺濾泡細(xì)胞細(xì)胞核細(xì)胞質(zhì)中共表達(dá)的一種特異性抗原，能激活多種甲狀腺特異性蛋白基因的轉(zhuǎn)錄[10]，對(duì)甲狀腺組織的分化、維持甲狀腺細(xì)胞的表型以及對(duì)上述蛋白靶基因的表達(dá)起重要調(diào)控作用[11]。Pelosi等[12]發(fā)現(xiàn)，TTF-1的失表達(dá)與甲狀腺癌的侵襲性密切相關(guān)，甲狀腺乳頭狀癌中TTF-1磷酸化和胞質(zhì)靶向性的改變，以及TTF-1核表達(dá)的丟失，可能是PTC去分化和不良預(yù)后的重要機(jī)制。本研究發(fā)現(xiàn)，TTF-1在HT合并PTC組的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)低于在NG組表達(dá)，其他兩兩比較均無(wú)差異。研究也發(fā)現(xiàn)，在PTC組的陽(yáng)性表達(dá)與性別、年齡、腫瘤直徑、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等均不存在相關(guān)關(guān)系。與Lopez-Campistrous等[13]研究一致。

Pax-8是腎系轉(zhuǎn)錄因子家族中的一員，在甲狀腺濾泡細(xì)胞細(xì)胞核細(xì)胞質(zhì)中共表達(dá)，也在多種正常組織、原發(fā)癌及其亞型、轉(zhuǎn)移癌及其亞型中被發(fā)現(xiàn)[2]，被認(rèn)為與腫瘤細(xì)胞的增殖分化有關(guān)；且在甲狀腺中Pax-8作為一種特異性轉(zhuǎn)錄因子，與TTF-1一起調(diào)控著甲狀腺濾泡細(xì)胞的終末分化并維持其功能。關(guān)于Pax-8在甲狀腺良惡性組織中的表達(dá)，既往研究觀點(diǎn)不一。本研究顯示，Pax-8在各組甲狀腺組織中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；進(jìn)一步在全部PTC中分析發(fā)現(xiàn)，Pax-8的陽(yáng)性表達(dá)在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者表達(dá)低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，與性別、年齡、腫瘤直徑無(wú)關(guān)。說明Pax-8的低表達(dá)可能與甲狀腺癌的侵襲性相關(guān)。Ozcan等[14]認(rèn)為Pax-8雖是TSHR的轉(zhuǎn)錄因子，但對(duì)TSHR基因的轉(zhuǎn)錄并不起主要作用。因本研究樣本量少，結(jié)論需要進(jìn)一步研究證實(shí)。

綜上所述，TSHR與TTF-1的失表達(dá)、Pax-8的低表達(dá)會(huì)導(dǎo)致甲狀腺組織發(fā)生病變和不良預(yù)后，甲狀腺病變組織分化越低，其表達(dá)越低；TSHR、TTF-1與其他因子結(jié)合可能會(huì)更可靠地判斷甲狀腺乳頭狀癌預(yù)后，互相彌補(bǔ)不足，以更準(zhǔn)確反映其生物學(xué)特性。

致謝：本文統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得到濰坊醫(yī)學(xué)院王素珍教授指導(dǎo)，特此致謝！