岳玉妍

（吉林工程職業(yè)學(xué)院，吉林四平 136001）

禽球蟲病是造成家禽死亡、營(yíng)養(yǎng)吸收不良、飼料利用效率低下、肉雞生長(zhǎng)速度下降、蛋雞產(chǎn)蛋量下降的主要寄生蟲病。該病對(duì)家禽業(yè)具有巨大的經(jīng)濟(jì)影響，每年全世界因該病損失超過(guò)30億美元。目前，藥物和疫苗是該病的兩種主要控制措施。但由于藥物使用時(shí)間延長(zhǎng)和疫苗成本高的問(wèn)題日益增多，需要采取其他策略來(lái)更有效和更安全地控制雞球蟲病的發(fā)生。Klaenhammer（1993）報(bào)道了一種由嗜酸性乳桿菌組成的復(fù)合益生菌，其屬于同質(zhì)發(fā)酵革蘭氏陽(yáng)性菌，能在廣泛的pH、溫度和滲透壓范圍下生長(zhǎng)，因此能在消化道中定植、棲息。目前一些商業(yè)益生菌具有可以促進(jìn)腸道上皮和胃腸道淋巴系統(tǒng)發(fā)育的功能。平衡的微生物種群可以支持健康腸道的固有防御機(jī)制，從而更好地控制腸道病原體（Pollmann等，2005）。Guerra等（2006）認(rèn)為，嗜酸乳桿菌可以誘導(dǎo)豬腸道健康。我們推測(cè)，含有嗜酸乳桿菌的復(fù)合益生菌可能會(huì)干擾病原菌的感染，產(chǎn)生抗菌肽或誘導(dǎo)宿主免疫應(yīng)答，從而增強(qiáng)其對(duì)艾美爾球蟲等腸道致病菌的抗性。在本研究中我們進(jìn)行了兩項(xiàng)試驗(yàn)來(lái)研究益生菌對(duì)實(shí)驗(yàn)性感染艾美爾球蟲病肉雞的潛在保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)1試驗(yàn)選擇70只1日齡肉雞來(lái)評(píng)估復(fù)合益生菌對(duì)艾美爾球蟲的保護(hù)作用，將肉雞隨機(jī)分為7個(gè)平行，每個(gè)平行10只。試驗(yàn)肉雞飼喂不添加藥物或抗生素的正常對(duì)照日糧或添加0.1%、0.2%的益生菌日糧組。試驗(yàn)第10天每組10只肉雞通過(guò)注射接種5000或10000個(gè)艾美爾球蟲卵囊，而飼喂正常對(duì)照日糧的10只肉雞作為陰性對(duì)照，將其飼喂在5個(gè)籠子中（2只/籠）。分別于接種后0、10 d稱量肉雞體重，并于接種后6～9 d收集5個(gè)籠子中雞的糞便樣本。

1.2 試驗(yàn)2試驗(yàn)選擇120只1日齡肉雞，隨機(jī)分為12個(gè)平行（10只/平行），分別飼喂正常日糧、0.1%或0.2%益生菌日糧（每組4個(gè)平行）。在12 d時(shí)每個(gè)處理組的一半雞只（20只）口服接種5000個(gè)艾美爾球蟲卵，其中10只雞在5個(gè)籠子中飼養(yǎng)（2只/籠）。分別在接種后6～10 d對(duì)肉雞稱重，并統(tǒng)計(jì)糞中卵囊脫落數(shù)及收集血清樣品測(cè)定抗體免疫應(yīng)答。試驗(yàn)日糧按照商品肉雞營(yíng)養(yǎng)需要配制，試驗(yàn)期間雞只自由采食和飲水。

1.3 卵囊脫落計(jì)數(shù)及抗體滴度參考Dalloul等（2002）的研究方法評(píng)估卵囊脫落。簡(jiǎn)單地說(shuō)，從接種球蟲卵囊6 d開始，在5個(gè)籠子（2只/籠）中收集10只肉雞的糞便4～5 d，將糞便勻漿后取兩份35 mL的樣本稀釋，顯微鏡下計(jì)數(shù)卵囊，卵囊脫落總數(shù)計(jì)算公式如下：

每只雞的卵囊脫落總數(shù)=卵囊數(shù)×稀釋倍數(shù)×（糞樣體積/計(jì)數(shù)室體積）/雞只數(shù)；

接種球蟲10 d后，每組分別選擇3只雞進(jìn)行采血，在4℃條件下凝血4～5 h，收集血清。使用ELISA試劑盒檢測(cè)血清樣本的艾美爾球蟲特異性抗體水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS軟件采用單因素方差分析（ANOVA），用Tukey-Kramer對(duì)試驗(yàn)指標(biāo)進(jìn)行多重比較，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 益生菌對(duì)感染球蟲病肉雞日增重的影響由表1可知，與未感染組相比，感染5000或10000球蟲組添加0.2%益生菌顯著降低了日增重（P＜0.05），分別降低了10.44%和26.64%。此外，感染5000球蟲組添加0.1%益生菌較0.2%益生菌組日增重顯著提高13.71%和38.82%（P＜0.05）。但無(wú)論感染劑量如何，感染后12 d各組日增重?zé)o顯著差異（P＞0.05）。

2.2 益生菌對(duì)感染球蟲病肉雞糞中球蟲數(shù)的影響由表1可知，未感染的對(duì)照組糞中未檢測(cè)出卵囊。感染5000球蟲組日糧添加0.1%益生菌顯著降低了糞中卵囊數(shù)量（P＜0.05）。在12 d時(shí)，0.1%益生菌組肉雞糞中卵磷排出量最低，但各組無(wú)顯著差異（P＜0.05）。

2.3 益生菌對(duì)感染球蟲病肉雞抗體反應(yīng)的影響由表1可知，所有未感染組的抗體反應(yīng)均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。但與感染5000球蟲飼喂對(duì)照組日糧組相比，在5000球蟲感染組及添加益生菌組中血清抗球蟲抗體水平顯著提高（P＜0.05）。

表1 益生菌對(duì)感染球蟲病肉雞日增重和糞中球蟲含量及抗體反應(yīng)影響

3 討論

本研究探討了以嗜酸性乳桿菌為基礎(chǔ)的益生菌對(duì)肉雞球蟲病易感性的影響。禽球蟲病最突出的癥狀是生長(zhǎng)遲緩，其特征是體重增加減少，嚴(yán)重時(shí)甚至體重下降，對(duì)家禽業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)影響。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與受感染的對(duì)照組相比，添加益生菌的日糧組可以提高肉雞日增重，說(shuō)明以嗜酸性乳桿菌為基礎(chǔ)的益生菌可以提高肉雞對(duì)艾美爾球蟲病的抵抗力，而這種保護(hù)作用進(jìn)一步體現(xiàn)在糞中卵囊數(shù)減少，特別是在感染5000個(gè)艾美爾球蟲的肉雞中。在感染艾美爾球蟲肉雞中，添加益生菌的日糧組肉雞日增重或卵囊脫落無(wú)顯著改善。雖然我們希望看到這兩個(gè)參數(shù)的積極影響，但在益生菌研究中，體重增加與卵囊排出數(shù)的降低之間的直接相關(guān)性并不總是存在（Dalloul等，2005）。當(dāng)日增重和卵囊排出之間沒有相關(guān)性時(shí)，這與Gabriel等（2006）的研究結(jié)果一致。

在早期研究中，Dalloul等（2003）報(bào)道了給予以乳酸菌為主的益生菌可誘導(dǎo)對(duì)艾美爾球蟲病的保護(hù)性免疫。一些嗜酸性乳桿菌可以產(chǎn)生抗菌肽，抑制其他革蘭氏陽(yáng)性腐敗菌和致病菌生長(zhǎng)，這些益生菌對(duì)李斯特菌有很強(qiáng)的抗菌活性（Ennahar等，2000）。嗜酸乳桿菌是一種非致病性和無(wú)毒的細(xì)菌，可改善豬腸道環(huán)境。本研究首次發(fā)現(xiàn)由活的嗜酸桿菌組成的益生菌對(duì)肉雞艾美爾球蟲感染有一定防御作用。

微環(huán)境蛋白EtMIC2克隆自艾美爾球蟲（Dalloul等，2005）。此外，EtMIC2代表了近30個(gè)已在分子水平上被克隆和鑒定的艾美爾球蟲基因中的1個(gè)。本研究試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以嗜酸乳桿菌為主的益生菌飼料飼喂的雞對(duì)EtMIC2抗原的特異性抗體顯著升高。寄生蟲特異性抗體在球蟲病中的作用已被廣泛研究（Dalloul等，2005）。盡管體液免疫球蟲病似乎扮演了一個(gè)次要功能，艾美球蟲屬感染引發(fā)的主要是血清抗體免疫反應(yīng)（Lillehoj和Trout，1996）。本研究發(fā)現(xiàn)，在飼喂益生菌、感染艾美爾球蟲的肉雞組血清中有更高水平的寄生蟲特異性抗體，這些抗體介導(dǎo)的反應(yīng)可能比單次接種更能保護(hù)肉雞免受艾美爾球蟲的繼發(fā)性感染。

4 結(jié)論

綜上所述，以嗜酸乳桿菌為基礎(chǔ)的益生菌增強(qiáng)了肉雞抗球蟲病力，并在一定程度上保護(hù)了肉雞感染球蟲病。但這種保護(hù)作用機(jī)制還需要進(jìn)一步研究，特別是鑒于益生菌激活的細(xì)胞免疫。特別是對(duì)益生菌誘導(dǎo)的不同細(xì)胞因子和趨化因子的分析，將為益生菌誘導(dǎo)的保護(hù)性免疫提供有價(jià)值的新信息。