藍(lán)國(guó)兵 ，何自福 于 琳 湯亞飛 李正剛 鄧銘光 佘小漫

（1.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，廣東 廣州 510640；2.廣東省植物保護(hù)新技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510640）

【研究意義】由新暗色柱節(jié)孢菌（Neoscytalidium dimidiatum）侵染引起的火龍果褐腐病（又稱潰瘍?。腔瘕埞a(chǎn)上最具毀滅性的真菌病害［1-2］。該病害已在以色列、馬來西亞、美國(guó)等多個(gè)國(guó)家為害［3-5］，輕則造成果皮“麻點(diǎn)”降低商品價(jià)值，重則導(dǎo)致整條莖稈和果實(shí)腐爛死亡，所造成的產(chǎn)量損失一般在20%～30%，嚴(yán)重時(shí)達(dá)50%以上，甚至毀園［6］。華南地區(qū)常年高溫高濕的氣候特點(diǎn)有利于火龍果褐腐病的暴發(fā)和流行，火龍果整個(gè)生長(zhǎng)季均可受到該病為害，生產(chǎn)上亟需有效的防控技術(shù)?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】戊唑醇（tebuconazole）是一種高效、低毒、廣譜、內(nèi)吸性的三唑類殺菌劑，具有保護(hù)、治療、鏟除三大功能，是一種麥角甾醇脫甲基化抑制劑，殺菌譜廣，活性高，且持效期長(zhǎng)，對(duì)很多作物都比較安全，應(yīng)用前景廣闊，因而受到廣泛關(guān)注［7］。戊唑醇藥劑在生產(chǎn)上防治火龍果褐腐病已表現(xiàn)有良好的防治效果［8］?？┚妫╢ludioxonil）是一種結(jié)構(gòu)新穎的非內(nèi)吸性吡咯類殺菌劑，通過抑制葡萄糖磷酰化有關(guān)的轉(zhuǎn)移，并抑制真菌菌絲體的生長(zhǎng)，最終導(dǎo)致病菌死亡［9］?？┚婢哂懈咝АV譜、持效期長(zhǎng)、用量少等特點(diǎn)，其作用機(jī)理獨(dú)特，與現(xiàn)有多數(shù)殺菌劑無(wú)交互抗性，因其良好的藥效一直被國(guó)內(nèi)外廣泛應(yīng)用［10-12］?？┚嫠巹?duì)火龍果褐腐病菌表現(xiàn)出較高的抑菌活性和較長(zhǎng)的抑菌持效期，但田間防治效果相對(duì)較差［8］。將作用機(jī)理不同的農(nóng)藥進(jìn)行復(fù)配混用可提高殺菌活性、減少用藥量、延緩有害生物抗藥性等，從而減少農(nóng)藥對(duì)生態(tài)環(huán)境的污染?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】化學(xué)防治是目前火龍果生產(chǎn)上防治褐腐病的主要方法，以具有內(nèi)吸性的三唑類殺菌劑如戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、氟硅唑等為主［13-17］。然而，單一化學(xué)農(nóng)藥長(zhǎng)期大面積使用易導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生抗藥性，而農(nóng)藥混配則具有擴(kuò)大防治譜、降低成本、提高防治效果及延緩抗藥性產(chǎn)生等特點(diǎn)，因此利用現(xiàn)有農(nóng)藥進(jìn)行混配已成為目前農(nóng)藥開發(fā)應(yīng)用的一個(gè)重要方面［18］?！緮M解決的關(guān)鍵問題】本研究擬采用生長(zhǎng)速率法，測(cè)定戊唑醇與咯菌腈不同配比下對(duì)火龍果褐腐病菌的混配增效作用，繼而評(píng)價(jià)其最佳配比下的制劑在田間的防效，以期為生產(chǎn)上火龍果褐腐病的防治提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試菌株：火龍果褐腐病菌株（N.dimidiatum）采自廣州市從化區(qū)（編號(hào)：DFCH8），由廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所分離、鑒定和保存。

供試藥劑：95%戊唑醇原藥，江蘇常隆農(nóng)化有限公司生產(chǎn)；99%咯菌腈原藥，浙江博仕達(dá)作物科技有限公司生產(chǎn)；50%咯菌腈可濕性粉劑，瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司市售產(chǎn)品；430 g/L戊唑醇懸浮劑，拜耳股份公司市售產(chǎn)品。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 室內(nèi)毒力測(cè)定 采用菌絲生長(zhǎng)速率法進(jìn)行單劑藥劑的毒力測(cè)定［19］。用電子天平分別稱取戊唑醇和咯菌腈原藥，用丙酮稀釋成有效成分為1 000 mg/L的母液，備用。通過預(yù)備試驗(yàn)，獲得2種藥劑對(duì)供試菌株菌絲抑菌率約10%～90%范圍內(nèi)的濃度區(qū)間，分別設(shè)置5個(gè)系列梯度濃度（戊唑醇 0.025、0.05、0.10、0.20、0.40 mg/L，咯菌腈 0.00625、0.0125、0.025、0.05、0.10 mg/L）。配制一系列梯度濃度的含藥PDA平板，然后在平板中央放置直徑為0.5 cm的供試菌株菌餅（供試菌株25 ℃活化4 d，取同一邊緣菌絲塊），以不含藥劑的PDA平板為空白對(duì)照。每個(gè)濃度3次重復(fù)，置于20 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，4 d后，采用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，計(jì)算相對(duì)抑菌率：

應(yīng)用DPS軟件（版本7.05）求回歸方程y=bx+a、EC50值、相關(guān)系數(shù)等。戊唑醇和咯菌腈以有效成分質(zhì)量比9:1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、3∶7、2∶8和1∶9復(fù)配，其毒力測(cè)定和計(jì)算方法同單劑。

采用Wadley法［20］計(jì)算復(fù)配藥劑增效系數(shù)（synergistic ratio, SR），評(píng)價(jià)復(fù)配藥劑的增效作用：SR＞1.5表示具有增效作用，0.5≤SR≤1.5表示具有相加作用，SR＜0.5表示具有拮抗作用。

式中，EC50（ob）（A）、EC50（ob）（B）分別表示復(fù)配劑中戊唑醇和咯菌腈的 EC50實(shí)測(cè)值，EC50（ob）、EC50（th）分別表示復(fù)配劑的EC50實(shí)測(cè)值和理論值，a、b分別表示戊唑醇和咯菌腈在復(fù)配劑中的百分含量（%），SR為增效系數(shù)。

1.2.2 田間藥效試驗(yàn) 試驗(yàn)地點(diǎn)及火龍果品種：試驗(yàn)于2018年7—8月在廣東省紫金縣鳳安鎮(zhèn)回龍村進(jìn)行，試驗(yàn)地果園為平地，果園管理水平較差，火龍果褐腐病發(fā)生嚴(yán)重，果園病情壓力比較大。果園采用柱式栽培，每個(gè)水泥柱種植4株火龍果，每667 m2約120個(gè)水泥柱子。供試火龍果品種為紅肉紅皮火龍果，種植已有3年。

試驗(yàn)設(shè)計(jì)及施藥方法：試驗(yàn)設(shè)50%咯菌腈可濕性粉劑100、500 mg/kg，430 g/L戊唑醇懸浮劑100、500 mg/kg，45%戊唑醇和咯菌腈復(fù)配藥劑（戊唑醇和咯菌腈質(zhì)量比8∶2復(fù)配）100、500 mg/kg，以及清水對(duì)照7個(gè)處理。每個(gè)處理3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20株火龍果（5個(gè)水泥柱），隨機(jī)區(qū)組排列。在火龍果嫩莖剛抽出時(shí)開始施藥，間隔10～13 d施1次藥，連續(xù)施藥3次。采用背負(fù)式電動(dòng)噴霧器噴霧，每小區(qū)噴藥液量為4 L，對(duì)照噴施等量清水，全株噴霧均勻。

調(diào)查方法：于第3次施藥后7、15 d調(diào)查防效，主要調(diào)查嫩莖的發(fā)病情況，并對(duì)藥劑的安全性進(jìn)行觀察。每小區(qū)調(diào)查全部水泥柱火龍果，每株火龍果調(diào)查5個(gè)嫩莖。調(diào)查時(shí)按病莖面積所占比例進(jìn)行分級(jí)，統(tǒng)計(jì)病情指數(shù)和計(jì)算防效［8］。

表1 戊唑醇、咯菌腈對(duì)火龍果褐腐病菌室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果Table 1 Results of in vitro toxicity of tebuconazole and fludioxonil against N. dimidiatum on pitaya

2 結(jié)果與分析

2.1 戊唑醇與咯菌腈的混配增效作用測(cè)定

毒力測(cè)定結(jié)果（表1）表明，咯菌腈和戊唑醇對(duì)火龍果褐腐病菌均表現(xiàn)出良好的抑菌效果，EC50值分別為0.0045、0.0671 mg/L，咯菌腈抑菌活性比戊唑醇抑菌活性高，戊唑醇EC50值與咯菌腈EC50值比值達(dá)14.91。戊唑醇與咯菌腈按質(zhì)量比為9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、3∶7、2∶8和1∶9復(fù)配對(duì)火龍果褐腐病菌表現(xiàn)為加和作用，增效系數(shù)分別為0.97、1.15、1.15、1.03、1.08、0.97、0.84、0.86和0.89，其中戊唑醇與咯菌腈質(zhì)量比為8∶2和7∶3的增效系數(shù)值最大，增效系數(shù)均為1.15；戊唑醇與咯菌腈質(zhì)量比為3∶7的增效系數(shù)值最小，增效系數(shù)為0.84。

2.2 田間防治效果

病指調(diào)查結(jié)果（表2）顯示，清水對(duì)照第3次施藥后7 d火龍果嫩莖上褐腐病平均病情指數(shù)已達(dá)到24.89，第3次施藥后15 d平均病情指數(shù)達(dá)到34.37，均顯著高于藥劑處理的病情指數(shù)。噴施有效成分濃度為100 mg/kg和500 mg/kg的戊唑醇、咯菌腈及其復(fù)配藥劑均未觀察到對(duì)火龍果生長(zhǎng)及果實(shí)有影響，未見產(chǎn)生藥害現(xiàn)象，確定在火龍果作物上使用安全。

試驗(yàn)防效統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表2）顯示，第3次施藥后7 d，45%戊唑醇和咯菌腈復(fù)配藥劑、50%咯菌腈可濕性粉劑、430 g/L戊唑醇懸浮劑100 mg/kg濃度處理對(duì)火龍果褐腐病平均防效分別為80.31%、70.08%和80.24%；第3次施藥后15 d平均防效分別為76.80%、54.53%和74.63%；第3次施藥后7 d，45%戊唑醇和咯菌腈復(fù)配藥劑、50%咯菌腈可濕性粉劑、430 g/L戊唑醇懸浮劑500 mg/kg濃度處理對(duì)火龍果褐腐病平均防效分別為89.44%、76.29%和89.71%；第3次施藥后15 d平均防效分別為83.63%、65.24%和81.22%。戊唑醇、咯菌腈及其復(fù)配藥劑對(duì)火龍果褐腐病的防效隨施藥濃度升高，防效提高，隨調(diào)查時(shí)間延長(zhǎng)，防效下降，其中咯菌腈單劑100 mg/kg和500 mg/kg濃度處理末次藥后15 d的防效僅分別為54.53%和65.24%，防效下降明顯。戊唑醇和咯菌腈復(fù)配藥劑100 mg/kg和500 mg/kg濃度處理的防效略高于同等濃度戊唑醇單劑的防效，二者差異均不顯著，而戊唑醇和咯菌腈復(fù)配藥劑100 mg/kg和500 mg/kg濃度處理的防效均顯著高于同等濃度咯菌腈單劑的防效。

表2 戊唑醇和咯菌腈復(fù)配對(duì)火龍果褐腐病田間防效Table 2 Field control efficacy of tebuconazole and fludioxonil compound against N. dimidiatum on pitaya

3 討論

火龍果褐腐病是火龍果生產(chǎn)上的主要病害，在抗病品種缺乏的情況下，選擇適當(dāng)殺菌劑并進(jìn)行科學(xué)復(fù)配是防治火龍果褐腐病的重要措施之一。本研究聯(lián)合毒力測(cè)定顯示，咯菌腈和戊唑醇不同質(zhì)量比復(fù)配對(duì)火龍果褐腐病菌均表現(xiàn)為相加作用，沒有拮抗或增效作用，與胡偉群等［21］的研究結(jié)果不同，與劉青等［22］的研究結(jié)果部分相同。胡偉群等［21］將噻呋酰胺和咯菌腈復(fù)配后對(duì)水稻紋枯病菌均表現(xiàn)為增效作用。劉青等［22］將氟啶胺和咯菌腈以質(zhì)量比1∶5、3∶2復(fù)配時(shí)對(duì)草莓灰霉病菌表現(xiàn)為增效作用，質(zhì)量比1∶1、1∶3、2∶3、2∶1、3∶1、4∶1復(fù)配時(shí)對(duì)草莓灰霉病菌表現(xiàn)為相加作用，但以質(zhì)量比5∶1復(fù)配時(shí)表現(xiàn)為拮抗作用。這說明咯菌腈與不同藥劑復(fù)配具有拮抗、相加、增效等作用。

室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果表明，咯菌腈對(duì)火龍果褐腐病菌的抑菌活性非常高，比戊唑醇的抑菌活性高近15倍，但在田間藥效試驗(yàn)中防效比戊唑醇明顯要差，可能與以下因素相關(guān)：一是火龍果褐腐病菌具有主要為害幼嫩枝條和果實(shí)而很難侵染老熟枝條的特性；二是田間試驗(yàn)中果園的病情壓力大，試驗(yàn)主要調(diào)查藥劑對(duì)嫩莖的防效，而咯菌腈沒有內(nèi)吸活性，因此導(dǎo)致咯菌腈的田間防效比較差。戊唑醇具有能迅速被植物有生長(zhǎng)力的部分吸收并主要向頂部轉(zhuǎn)移的特性［18］，因而對(duì)火龍果嫩莖的防效比較明顯。同等使用濃度下，戊唑醇和咯菌腈復(fù)配的防效均比使用同等濃度單一藥劑的防效高，分析可能是咯菌腈高抑菌活性和長(zhǎng)殘效期起到了壓低病菌侵染基數(shù)，以及戊唑醇良好的內(nèi)吸性有效地保護(hù)嫩莖免受病菌侵染。

戊唑醇與咯菌腈具有不同的作用機(jī)制，二者復(fù)配對(duì)火龍果褐腐病菌未表現(xiàn)出拮抗作用，且戊唑醇的價(jià)格遠(yuǎn)低于咯菌腈，兩者的復(fù)配既能充分利用咯菌腈高抑菌活性和戊唑醇良好內(nèi)吸性的特點(diǎn)，又能降低田間用藥成本，有利于延緩抗藥性產(chǎn)生，達(dá)到有效控制火龍果褐腐病為害的目的。戊唑醇與咯菌腈復(fù)配在火龍果上的殘留情況有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

本研究通過生長(zhǎng)速率法測(cè)定了戊唑醇、咯菌腈及其復(fù)配藥劑對(duì)火龍果褐腐病菌的室內(nèi)毒力，結(jié)果表明戊唑醇和咯菌腈對(duì)火龍果褐腐病菌均具有很高的抑菌活性，EC50值分別僅為0.0045、0.0671 mg/L。二者不同質(zhì)量比的復(fù)配藥劑對(duì)火龍果褐腐病菌也具有很高的抑菌活性，表現(xiàn)為加和作用。田間藥效試驗(yàn)結(jié)果表明，戊唑醇對(duì)火龍果褐腐病具有良好的防治效果，平均防效最高達(dá)89.71%，顯著高于咯菌腈的防效，戊唑醇和咯菌腈復(fù)配藥劑對(duì)火龍果褐腐病的防效均比使用同等濃度單一藥劑的防效高。戊唑醇和咯菌腈在100 mg/kg和500 mg/kg有效成分使用濃度下在火龍果施用安全，未見產(chǎn)生藥害現(xiàn)象，二者復(fù)配藥劑在防治火龍果褐腐病上具有較好的應(yīng)用前景。