翟艷芳，岳 鋒 ，王選年

（1.新鄉(xiāng)學(xué)院生物技術(shù)研究中心/生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453000；2.鄭州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，河南 鄭州 450001）

食品安全是被定義為食物中有毒或有害物質(zhì)引起影響人體健康的公共衛(wèi)生問(wèn)題［1］。我國(guó)是飼料生產(chǎn)和消費(fèi)大國(guó)、動(dòng)物源食品（肉類(lèi)、雞蛋、牛奶、水產(chǎn)品）生產(chǎn)大國(guó)，是獸用化學(xué)制劑、農(nóng)藥使用量最大的國(guó)家之一。每年至少超過(guò)5萬(wàn)t抗菌藥物用于養(yǎng)殖業(yè)，超過(guò)50%為藥物飼料添加劑，霉菌毒素污染農(nóng)產(chǎn)品普遍存在，生態(tài)環(huán)境中重金屬污染嚴(yán)重，從農(nóng)場(chǎng)到餐桌食品安全的風(fēng)險(xiǎn)無(wú)處不在。發(fā)展靈敏、快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)技術(shù)是保障食品安全的最后一道防線。用于篩選成本較低、速度較快的生物分析，尤其是基于抗原-抗體特異性識(shí)別的免疫分析，是目前化學(xué)性危害因子快速檢測(cè)的主流技術(shù)?；蚬こ炭贵w是按人類(lèi)設(shè)計(jì)所重新組裝的新型抗體分子，可保留或增加天然抗體的特異性和主要生物學(xué)活性，去除或減少無(wú)關(guān)結(jié)構(gòu)（如Fc片段），從而克服單克隆抗體在應(yīng)用范圍方面的缺陷，具有廣闊的應(yīng)用前景［2］。研究表明，在駱駝科動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)的抗體能有效穿透腫瘤組織并快速消除。駱駝科動(dòng)物自然產(chǎn)生僅由重鏈組成的抗體，其中靶抗原識(shí)別部分由單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域組成，重鏈抗體可變區(qū)也被稱(chēng)為納米抗體，屬于基因工程抗體，具有高溶解度、高穩(wěn)定性、高特異性、親和力。納米抗體由于其優(yōu)越的性能，在各種領(lǐng)域有著廣闊的應(yīng)用前景，包括食品安全檢測(cè)、體內(nèi)和體外疾病診斷、靶向治療、靶向給藥等［3-4］。本文就納米抗體生物學(xué)特征、納米抗體展示技術(shù)以及在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)行闡述。

1 納米抗體生物學(xué)特征

1.1 納米抗體結(jié)構(gòu)特征

完整常規(guī)抗體形似字母Y，基礎(chǔ)單元結(jié)構(gòu)由兩條完全相同的重鏈和兩條完全相同的輕鏈通過(guò)二硫鍵連接組成，具有12個(gè)蛋白域和完整的Fc段，組成駱駝科重鏈抗體的兩條完全相同的重鏈由鉸鏈區(qū)形成的鏈間二硫鍵連接，每條重鏈分子由一個(gè)鉸鏈區(qū)和兩個(gè)恒定區(qū)（CH2、CH3）及重鏈可變區(qū)（VHH）組成，具有6個(gè)蛋白域以及完整Fc片段。駱駝科重鏈抗體與之相比，缺乏輕鏈與恒定區(qū)CH1，CH1是與輕鏈經(jīng)鏈間二硫鍵相連的部位。單域抗體可變結(jié)構(gòu)域（VHH）僅具有1個(gè)蛋白域，無(wú)Fc片段，分子量小，僅為常規(guī)抗體的1/10，約為15 ku，具有增加其溶解度的結(jié)構(gòu)特征［5-8］。

人抗體重鏈的VH與駱駝重鏈抗體的VHH結(jié)構(gòu)存在約75%的同源性，兩者含有雖小但十分重要的差異，差異主要在于FR2和互補(bǔ)決定區(qū)（CDR）中。在VH的FR2內(nèi)，4個(gè)高度保守的疏水性氨基酸（V37、G44、L45、W47）與VL結(jié)構(gòu)域相互作用，在VHH中被4種親水性氨基酸（F37、E44、R45、G47）取代，這些氨基酸的取代也解釋了納米抗體的溶解度增加現(xiàn)象。在VHH中，抗原僅被3個(gè)環(huán)識(shí)別而不是6個(gè)環(huán)，然而VHH中的環(huán)與常規(guī)mAb相比，缺少3個(gè)CDRs區(qū)，且環(huán)更長(zhǎng)。目前已有研究提出通過(guò)CDR的延伸擴(kuò)大VHH互補(bǔ)決定區(qū)，尤其是CDR3。VHH中較長(zhǎng)的CDR3允許其形成指狀結(jié)構(gòu)，呈暴露的凸環(huán)，能夠延伸到靶蛋白上的空腔中，使VHH能夠識(shí)別結(jié)合獨(dú)特的抗原表位，而凸環(huán)中的半胱氨酸可與CDR1或FR2的45位點(diǎn)的半胱氨酸形成環(huán)間二硫鍵，使得抗體結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定。VHH較長(zhǎng)的CDR將加大抗原結(jié)合位點(diǎn)的實(shí)際表面，補(bǔ)償VL結(jié)構(gòu)域提供的抗原結(jié)合表面區(qū)域的缺失，可以解釋VHH在單域形式中的抗原結(jié)合能力［9-10］。

1.2 納米抗體獨(dú)特優(yōu)勢(shì)

納米抗體相比常規(guī)抗體來(lái)說(shuō)有許多獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，包括：（1）結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，缺乏輕鏈，僅由單個(gè)重鏈可變區(qū)組成；分子量小，是常規(guī)抗體的1/10，約為15 ku［11］，穿透性好；性質(zhì)穩(wěn)定，在非常嚴(yán)苛的條件（強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、高溫等）下仍能保持其生物活性，且適于進(jìn)行基因工程抗體改造進(jìn)化，具有優(yōu)異的穩(wěn)定性；（2）特異性強(qiáng)，親和力高，F(xiàn)R2結(jié)構(gòu)中存在氨基酸取代，使納米抗體比常規(guī)抗體片段更易溶，CDR3使Nbs能識(shí)別常規(guī)抗體不能識(shí)別的抗原位點(diǎn)或是不易接近的抗原位點(diǎn)，如酶活性位點(diǎn)和隱性病毒表位；（3）制備過(guò)程簡(jiǎn)便，可以在大腸桿菌及酵母菌等生物中高效表達(dá)，處于高溫和酸堿溶劑中更穩(wěn)定，明顯縮短研發(fā)周期、降低生產(chǎn)成本，有效解決抗體規(guī)?；苽涞碾y題；（4）組織滲透能力強(qiáng)，能夠更快地被正常組織清除，可與半衰期較短的放射性核素結(jié)合在體內(nèi)成像，應(yīng)用于分子顯像及靶向治療［12-13］。

2 納米抗體庫(kù)的分類(lèi)

納米抗體庫(kù)根據(jù)構(gòu)建方式不同分為天然納米抗體庫(kù)、免疫納米抗體庫(kù)、半合成/合成納米抗體庫(kù)。

2.1 天然納米抗體庫(kù)

天然納米抗體文庫(kù)通常通過(guò)對(duì)非免疫羊駝外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行mRNA提取，克隆可變區(qū)基因庫(kù)并通過(guò)噬菌體展示及其他技術(shù)獲得納米抗體。從該類(lèi)型的納米文庫(kù)中分離抗體的質(zhì)量取決于庫(kù)容大小及多樣性，天然抗體庫(kù)的多樣性取決于最初收集不同個(gè)體的淋巴細(xì)胞數(shù)量，還可以通過(guò)混合從不同個(gè)體動(dòng)物收集的血樣以確保文庫(kù)的多樣性，從而增加最終文庫(kù)大小。天然納米抗體文庫(kù)無(wú)抗原偏好性，可以為任何潛在的抗原鑒定更廣泛的結(jié)合物，例如可用于毒性抗原、免疫原性較弱抗原以及自身物質(zhì)的篩選，但由于未經(jīng)免疫刺激體細(xì)胞成熟的過(guò)程，所以只有從庫(kù)容大、多樣高的文庫(kù)中篩選時(shí)才能篩選出高特異性和親和力的抗體［14］。

2.2 免疫納米抗體庫(kù)

免疫納米抗體文庫(kù)的構(gòu)建通過(guò)免疫羊駝建立免疫抗體庫(kù)，構(gòu)建過(guò)程與天然庫(kù)相同。免疫抗體庫(kù)的制備首先需對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫，通過(guò)免疫抗原，體內(nèi)刺激特異性HCAbs在體內(nèi)進(jìn)行親和力成熟。通過(guò)克隆外周血淋巴細(xì)胞中的可變區(qū)基因庫(kù)，構(gòu)建庫(kù)容約107CFU/mL的抗體庫(kù)，并通過(guò)噬菌體展示或其他技術(shù)進(jìn)行篩選，所抽取的血液樣品代表免疫動(dòng)物血流中存在的淋巴細(xì)胞的免疫抗體文庫(kù)。該方法在很大程度上受到抗原天然抗原性的限制，當(dāng)抗原具有高致病性（傳染病劑）和毒性或?yàn)榉敲庖咴孕》肿訒r(shí)，通過(guò)免疫動(dòng)物獲取抗體是不可行的。此外，在駱駝科動(dòng)物身上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)必須確保沒(méi)有染病和動(dòng)物死亡的風(fēng)險(xiǎn)，也沒(méi)有個(gè)體間免疫的自然差異，所以該方法在實(shí)施過(guò)程中的實(shí)際效果受動(dòng)物個(gè)體差異性、血流穩(wěn)定性、靶標(biāo)抗原性以及毒性等影響［15］。

2.3 半合成/合成納米文庫(kù)

庫(kù)容大小和多樣性是影響免疫文庫(kù)甚至天然文庫(kù)的抗體篩選效率的關(guān)鍵問(wèn)題。體內(nèi)抗體親和力成熟在較大程度上依賴于體細(xì)胞超突變［16］，半合成/合成文庫(kù)正是模擬這個(gè)過(guò)程。通過(guò)確定抗原特異性的高變序列的CDR，以及保守的框架區(qū)（FR），保存納米抗體的結(jié)構(gòu)完整性。隨機(jī)化CDR的氨基酸長(zhǎng)度和堿基序列，特別是CDR3區(qū)，該區(qū)域?yàn)榭乖?抗體的主要結(jié)合位點(diǎn)［17］。Yan等［18］基于CABCII10保守的美洲駝單結(jié)構(gòu)域抗體片段（VHH）框架［19］，通過(guò)隨機(jī)化CDR3區(qū)引入多樣性，構(gòu)建合成噬菌體展示納米體文庫(kù)，成功地篩選出針對(duì)PA或NGAL的納米抗體。Chen等［20］基于單一框架，通過(guò)使用精確設(shè)計(jì)的簡(jiǎn)并堿基，將多樣性限制在4個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)，設(shè)計(jì)和生成噬菌體展示的合成抗體文庫(kù)。Moutel等［21］基于穩(wěn)健的納米抗體支架hs2dAb，創(chuàng)建了具有高度多樣性的非免疫重組納米抗體庫(kù)，成功篩選及鑒定出針對(duì)高度多樣化靶標(biāo)的高功能性結(jié)合物。

3 納米抗體技術(shù)

納米抗體技術(shù)主要包括噬菌體展示技術(shù)、核糖體展示技術(shù)以及在此基礎(chǔ)上的納米抗體改造技術(shù)等。

3.1 噬菌體展示技術(shù)

噬菌體展示技術(shù)（phage display technology）于1985年首次被George P. Smith提出。該技術(shù)基于外源肽或蛋白質(zhì)與噬菌體表面上的外源蛋白融合表達(dá)，依賴于待選蛋白質(zhì)與其基因之間的物理聯(lián)系。目的基因與絲狀噬菌體M13的p3基因的5’末端融合，導(dǎo)致顆粒在其尖端表達(dá)［22］。利用抗原抗體特異性結(jié)合的特點(diǎn)對(duì)噬菌體庫(kù)中大量抗體基因進(jìn)行篩選，與雜交瘤技術(shù)相比，噬菌體展示技術(shù)可以快速篩選出針對(duì)生物體內(nèi)任何靶蛋白的抗體，且繞開(kāi)了雜交瘤免疫動(dòng)物等過(guò)程。通過(guò)將整個(gè)文庫(kù)與靶抗原一起孵育，可以對(duì)多種抗原包括純化的抗原、裂解物、完整細(xì)胞或組織切片等進(jìn)行篩選，但純化靶抗原仍是最簡(jiǎn)單、最有效的方法。洗脫的噬菌體可用于感染大腸桿菌、富集噬菌體，并用之后的輪次篩選［23-24］。ELISA篩選單個(gè)克隆以產(chǎn)生抗原特異性抗體，對(duì)ELISE陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序以推析出抗體的氨基酸［25］。

3.2 核糖體展示技術(shù)

核糖體展示技術(shù)（Ribosome Display Technology，RDT）已被證明是一種強(qiáng)大的體外選擇和體外分子定向進(jìn)化方法。核糖體展示最初是由Mat等提出［26］，用于從具有高度多樣性的天然文庫(kù)中選擇和進(jìn)化蛋白質(zhì)或肽，以結(jié)合任何選擇的目標(biāo)靶標(biāo)用于從折疊蛋白質(zhì)文庫(kù)中產(chǎn)生高親和力結(jié)合物。完整的核糖體展示步驟：制備大型DNA文庫(kù)，體外轉(zhuǎn)錄翻譯，親和篩選，體外分子定向進(jìn)化［27］。首先通過(guò)RT-PCR構(gòu)建scFv基因，使其作為抗體蛋白體外表達(dá)模板，然后在體外進(jìn)行轉(zhuǎn)錄和翻譯表達(dá)，形成核糖體－mRNA－scFv復(fù)合物，隨后以固相化的抗原分子親和篩選出高親和力scFv，不需要克隆和轉(zhuǎn)化文庫(kù)。因此通過(guò)基于PCR的方法在文庫(kù)中引入隨機(jī)突變并選擇改進(jìn)的結(jié)合物是非常方便的，可以方便地進(jìn)行真正的定向進(jìn)化［28］。核糖體展示的抗體庫(kù)大小上限可達(dá)1015拷貝。通過(guò)核糖體展示技術(shù)，可分離抗小分子半抗原抗體。因此，這項(xiàng)技術(shù)可有效獲得所需抗體，且不需要?jiǎng)游锩庖?；能夠檢測(cè)農(nóng)業(yè)和食品工業(yè)中的小型半抗原，如殺蟲(chóng)劑、環(huán)境污染物或有毒物質(zhì)。Guerfal等［29］將針對(duì)綠色熒光蛋白的駱駝科納米抗體的免疫文庫(kù)融合到釀酒酵母凝集素基因（SAGI）的C未端部分，核糖體展示已成功應(yīng)用于抗體單鏈Fv片段（ScFv），不僅可以選擇特異性而且可以選擇穩(wěn)定性和催化活性。Roth等［30］描述了從免疫的羊駝中構(gòu)建VHH抗體酵母表面展示文庫(kù)，以及在基于熒光激活細(xì)胞分選（FACS）的篩選過(guò)程中完成抗原特異性分子的簡(jiǎn)便分離。

3.3 抗體改造技術(shù)

體外展示方法篩選抗體受限于文庫(kù)的庫(kù)容及多樣性，從抗體庫(kù)中篩選得到的抗體通常親和力較低，此外通過(guò)免疫方法獲取特異性抗體，或者是展示方法鑒定過(guò)的抗體在免疫過(guò)程中，免疫原皮下注射的高濃度抗體具有潛在的可變性或難以預(yù)測(cè)的溶解度和粘度，抗體異常聚集而引發(fā)的抗體皮下傳送被阻止［31］。體外進(jìn)行抗體親和力成熟的方法有錯(cuò)配PCR法（error-prone PCR）、DNA改組法（DNA shuffling）和鏈置換法（chain shuffling）、分子模擬和計(jì)算機(jī)輔助抗體進(jìn)化。其中后者是當(dāng)前計(jì)算機(jī)科學(xué)與生物學(xué)相結(jié)合研究的重要體現(xiàn)。通過(guò)物理、化學(xué)和分子生物學(xué)以及計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)的手段進(jìn)行抗體修飾，對(duì)現(xiàn)有抗體進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造來(lái)改進(jìn)其特性［32］。這些特性包括結(jié)合親和力和特異性、折疊穩(wěn)定性、溶解度、藥代動(dòng)力學(xué)、效應(yīng)子功能，以及與雙特異性抗體和抗體-藥物偶聯(lián)物的附著相容性。Kurella等［33］使用同源模型引導(dǎo)的抗體人源化，用分子動(dòng)力學(xué)對(duì)抗體進(jìn)行動(dòng)態(tài)模擬，分析預(yù)測(cè)抗體的三維結(jié)構(gòu)以及動(dòng)力學(xué)特征，計(jì)算抗原抗體在結(jié)合過(guò)程中的能量變化，能量最小化應(yīng)用于該人源化模型。通過(guò)對(duì)關(guān)鍵位點(diǎn)的氨基酸的調(diào)整，重新引入關(guān)鍵構(gòu)象殘基。該方法不僅消除了空間沖突，還可以恢復(fù)與其抗原的結(jié)合親和力相關(guān)的功能，從而降低其免疫原性、交叉反應(yīng)率，甚至提高親和力與特異性等，可篩選出更加合理的抗體構(gòu)象，增強(qiáng)抗體屬性。改造后的抗體特性更適合在臨床和食品安全檢測(cè)中應(yīng)用。

4 納米抗體在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用

納米抗體技術(shù)最初應(yīng)用于診斷和治療領(lǐng)域。目前，大多納米抗體生物技術(shù)應(yīng)用是指蛋白質(zhì)或其他大分子抗原，而少見(jiàn)報(bào)道涉及針對(duì)小半抗原（分子量≥1 500 u）使用的納米抗體。但越來(lái)越多研究表明，可以從高親和力納米抗體庫(kù)中篩選出高敏感性納米抗體。由于納米抗體識(shí)別抗原能力較強(qiáng)，可將其作為檢測(cè)探針用于檢測(cè)各種基體的小分子。通過(guò)從噬菌體展示抗體庫(kù)中篩選得到針對(duì)有害物質(zhì)的抗體，用于食品真菌毒素、小分子有毒物質(zhì)或農(nóng)藥殘留等有機(jī)小分子化合物的免疫學(xué)檢測(cè)中。

4.1 納米抗體檢測(cè)食品里的細(xì)菌及真菌毒素

毒素有的在食品中天然存在，有的在適合條件或在加工過(guò)程產(chǎn)生，其快速檢測(cè)方法是保障食品安全的重要措施。Wang等［34］通過(guò)噬菌體展示從免疫的羊駝納米抗體庫(kù)中分離出了一種對(duì)黃曲霉高度反應(yīng)性的納米抗體PO8-VHH，并開(kāi)發(fā)了一種基于納米抗體和多克隆抗體的夾心ELISA，作為早期檢測(cè)系統(tǒng)，適合快速檢測(cè)曲霉農(nóng)產(chǎn)品污染。駱駝科重鏈抗體的可變域也越來(lái)越多地適用于檢測(cè)各種基質(zhì)中的小分子。Xu等［35］通過(guò)生物淘選從天然羊駝噬菌體展示抗體文庫(kù)中獲得高活性微囊藻毒素-LR（Microcystin-LR，MC-LR）噬菌體納米抗體。King等［36］為表明VHH可作為預(yù)防李斯特菌病的新型療法的潛力，從天然噬菌體展示文庫(kù)中鑒定出幾個(gè)結(jié)合InlB的LRR結(jié)構(gòu)域的VHH，VHH在InlB的c-Met相互作用位點(diǎn)結(jié)合，從而成為防止細(xì)菌入侵的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，表明VHH有作為預(yù)防李斯特菌病的新型療法的潛力。He等［37］首次報(bào)道了針對(duì)腸炎沙門(mén)氏菌的納米抗體，開(kāi)發(fā)的納米抗體具有高的熱穩(wěn)定性和良好的特異性，并建立一種基于納米抗體的腸炎鏈球菌檢測(cè)方法，進(jìn)一步證明了基于納米抗體的試劑在生物分析化學(xué)中的實(shí)用性。

4.2 檢測(cè)食品中農(nóng)藥殘留及農(nóng)產(chǎn)品污染

隨著人們對(duì)食品安全性關(guān)注的不斷提高，對(duì)食品中農(nóng)藥殘留及農(nóng)產(chǎn)品污染的檢測(cè)研究也越來(lái)越多，食品中農(nóng)藥殘留及農(nóng)產(chǎn)品污染問(wèn)題主要是糧食、蔬菜、水果中的農(nóng)藥殘留超標(biāo)問(wèn)題。目前，常見(jiàn)農(nóng)藥主要分為有機(jī)氯類(lèi)、有機(jī)磷類(lèi)、擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)和氨基甲酸酯類(lèi)四大類(lèi)。殺蟲(chóng)劑西維因在農(nóng)業(yè)中被廣泛使用，但其殘留物對(duì)食品安全和人類(lèi)健康構(gòu)成威脅。Liu等［38］使用基于VHH的ELISA法測(cè)定食品中大麥和玉米中的西維因，能有效改善農(nóng)藥殘留檢測(cè)的靈敏度。苯氧基苯甲酸（3-PBA）是許多擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑的人類(lèi)尿代謝產(chǎn)物，可以用作生物標(biāo)志物。Zhang 等［39］檢測(cè)蔬菜和水果樣品中的呋喃丹時(shí)，通過(guò)從雙峰駝免疫文庫(kù)中分離出特異性識(shí)別呋喃丹的納米抗體；采用間接競(jìng)爭(zhēng)性ELISA方法，篩選出的納米抗體具有良好的熱穩(wěn)定性以及對(duì)甲醇和乙腈的高耐受性。Huo等［40］建立了一種基于納米抗體-堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase,AP）融合蛋白的快速靈敏的直接競(jìng)爭(zhēng)熒光酶免疫分析法（Direct competition-luciferase immunoassay,dc-FEIA），用于檢測(cè)3-PBA，對(duì)硫磷是一種廣泛使用的具有高毒性和持久性的有機(jī)磷農(nóng)藥。Zhang等［41］基于免疫的羊駝構(gòu)建了噬菌體VHH文庫(kù)，并通過(guò)與3-PBA競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合篩選納米抗體，構(gòu)建了VHH-AP融合物與dc-FEIA，通過(guò)對(duì)大白菜、黃瓜和生菜樣品進(jìn)行驗(yàn)證，進(jìn)一步證明了基于納米抗體在檢測(cè)食品中農(nóng)藥殘留及農(nóng)產(chǎn)品污染中的可實(shí)踐性，表明基于納米抗體的免疫分析方法簡(jiǎn)便，快速且具有成本效益，因此是檢測(cè)呋喃丹的理想篩選工具。

5 納米抗體其他方面的應(yīng)用

5.1 在流行性傳染病的應(yīng)用

病毒感染容易引起流行性傳染病，一旦感染流感病毒、冠狀病毒等呼吸道病毒疾病會(huì)嚴(yán)重危害人類(lèi)的健康和生命，Nbs具有作為抗病毒治療劑的優(yōu)勢(shì)［42-43］。Zhao等［44］成功篩選出專(zhuān)門(mén)針對(duì)MERS-CoV刺突蛋白的受體結(jié)合域。通過(guò)在體內(nèi)對(duì)C末端人Fc標(biāo)簽進(jìn)行改造Nbs的半衰期顯著延長(zhǎng)，Nbs可以有效地交叉中和從人和駱駝中分離出來(lái)的多種MERS-CoV株的感染。說(shuō)明Nbs可以作為成本低、有效且廣譜的抗MERSCoV治療劑。Stalin等［45］指出Nbs不僅可以針對(duì)MERS-CoV，而且可以針對(duì)其他新興病原體開(kāi)發(fā)新的干預(yù)措施。De等［46］開(kāi)發(fā)了一種新型的抗甲型流感病毒方法，該方法可選擇性地將先天免疫細(xì)胞募集到病毒部位復(fù)制。針對(duì)暴露于表面的病毒抗原的VHH可以很容易地配備效應(yīng)器功能，這些功能可以觸發(fā)保護(hù)性抗病毒活性，而不是直接中和病毒。

5.2 在分子成像的應(yīng)用

在腫瘤成像方面，納米抗體與光學(xué)成像、PET、超聲成像及SPECT技術(shù)結(jié)合用于臨床疾病快速檢測(cè)診斷，由于納米抗體的分子量小，沒(méi)有Fc片段，可以高特異性地結(jié)合到靶標(biāo)，且可在體內(nèi)快速消除，使納米抗體在成像方面具有很強(qiáng)優(yōu)勢(shì)。

6 展望

納米抗體在食品安全檢測(cè)方面還需要進(jìn)一步深入研究及應(yīng)用，它雖克服了小分子功能性抗體的缺點(diǎn)，但仍有不足之處，如親和力低、穩(wěn)定性差等。體外改善納米抗體性能的方法：（1）確保半抗原-蛋白結(jié)合物的免疫原性，提高庫(kù)容量及多樣性，通過(guò)體外篩選，優(yōu)化的篩選策略，進(jìn)行抗體親和力成熟，提高抗體的表達(dá)量和表達(dá)效率［48］。（2）優(yōu)化幾個(gè)關(guān)鍵屬性：親和力、特異性、折疊穩(wěn)定性、溶解度以及與雙特異性納米抗體和納米抗體-藥物偶聯(lián)物的彼此間相容性，主要通過(guò)設(shè)計(jì)支架、互補(bǔ)決定區(qū)（CDR）、改變特定的氨基酸等。而單一屬性進(jìn)行抗體改造時(shí)，可能會(huì)引起別的關(guān)鍵屬性發(fā)生質(zhì)的變化，從而使抗體改造效果不佳。所以，在進(jìn)行抗體設(shè)計(jì)時(shí)需要進(jìn)行系統(tǒng)的設(shè)計(jì)方法。隨著納米抗體改造技術(shù)不斷完善，納米抗體特有的優(yōu)勢(shì)也必將在食品安全檢測(cè)技術(shù)上發(fā)揮重要作用。