王素琴，翁責(zé)茗，夏伊莉，戴張嶠，邱彬，章家青

（寧?？h第一醫(yī)院a.體檢中心；b.泌尿外科；c.急診科；d.腎內(nèi)科；e.檢驗(yàn)科，浙江 寧海315600）

研究表明隨機(jī)尿的蛋白濃度檢測(cè)結(jié)果不可靠[1]，目前在臨床上檢測(cè)24 h 尿蛋白對(duì)腎臟疾病診斷、治療和預(yù)后有著極其重要的意義[2-5]。 由于尿蛋白排出量不恒定，且理化性質(zhì)不穩(wěn)定，因此選擇正確的留取及存儲(chǔ)標(biāo)本顯得尤為重要。 存儲(chǔ)方法一般有冷藏法和化學(xué)防腐劑法，然而在實(shí)際存儲(chǔ)24 h 尿標(biāo)本過程中，應(yīng)用起來都不方便，且防腐劑均具有一定的腐蝕性和致癌性。 另外，有人認(rèn)為留取24 h 尿液對(duì)于疾病監(jiān)測(cè)而言并不便利[6]，所以，經(jīng)濟(jì)、方便、無害的尿液保鮮存儲(chǔ)法對(duì)慢性腎臟病的早期診斷和療效觀察顯得尤為重要。本研究通過用麝香草酚化學(xué)防腐法、2～8℃冷藏法、CO2物理保鮮法和常溫保存法保存尿標(biāo)本，尿液采取后放置24 h、48 h、72 h、96 h、192 h、384 h 時(shí)檢測(cè)尿蛋白濃度， 對(duì)同一患者的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較， 為臨床尋找一種更合適的尿液存儲(chǔ)方法和保存期限提供科學(xué)依據(jù)， 避免門診病人由于多種不便利造成尿標(biāo)本送檢時(shí)間的滯后， 從而延誤診斷和治療[5]。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本來源 選取2018 年5 月15 日—8 月22日在寧?？h第一醫(yī)院腎內(nèi)科和內(nèi)分泌科住院并行24 h 尿蛋白定量檢測(cè)患者的24 h 尿液標(biāo)本共109例，其中男性56 例，女性53 例，年齡（62.16±13.40）歲。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料 儀器為日立全自動(dòng)生化分析儀（008AS）， 試劑是美康生物科技股份有限公司生產(chǎn)的腦脊液與尿總蛋白檢測(cè)試劑盒 （產(chǎn)品批號(hào)：17080901；180127101），麝香草酚是國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)的 （產(chǎn)品批號(hào)：20161110）， 醫(yī)用CO2，便攜式氣體檢測(cè)儀（深圳市普利通電子科技有限公司），冷藏冰箱。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本留取 囑研究對(duì)象留取24 h 尿液， 收集后予以充分混勻，分裝置21 根試管中密封保存，其中1 管即時(shí)（24 h）進(jìn)行24 h 尿蛋白檢測(cè)；5 管加入麝香草酚（每100 mL 尿液加0.1 g）后保存于室溫（晝夜溫差15～37℃）內(nèi)，簡(jiǎn)稱防腐劑保存；5 管充滿CO2氣體，并測(cè)量CO2濃度為10%以上后保存于室溫（晝夜溫差15～37℃）內(nèi)，簡(jiǎn)稱CO2保存；5 管保存于冷藏冰箱（2～8℃）內(nèi)，簡(jiǎn)稱冷藏保存；5 管不做任何處理保存于室溫（晝夜溫差15～37℃）內(nèi)，簡(jiǎn)稱常溫保存。

1.3.2 檢測(cè)方法分別對(duì)收集到24 h 尿標(biāo)本和4種保存法的尿標(biāo)本于24 h、48 h、72 h、96 h、192 h、384 h 時(shí)進(jìn)行尿蛋白濃度檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法統(tǒng)計(jì)軟件采用SAS 10.1，計(jì)量資料分析采用±S 表示，兩組間均數(shù)比較采用配對(duì)樣本t 檢驗(yàn)，多組間均數(shù)比較采用方差分析，其中，重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)多組間均數(shù)比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析，組間兩兩比較采用LSD 法。 P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 同種存儲(chǔ)方法下不同時(shí)間點(diǎn)尿蛋白濃度比較重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)方差分析結(jié)果顯示，尿蛋白濃度4組保存方法比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F組間=0.025，P=0.995），不同時(shí)間點(diǎn)尿蛋白濃度比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F時(shí)間=4.867，P＜0.05），時(shí)間與組間不存在交互作用（F交互=1.286，P=0.203）。 進(jìn)一步單獨(dú)效應(yīng)分析，僅CO2保存組不同時(shí)間點(diǎn)尿蛋白濃度差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（FCO2=2.630，P=0.029），其他保存方法不同時(shí)間點(diǎn)尿蛋白濃度差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明長(zhǎng)時(shí)間保存時(shí)，冷藏保存、常溫保存和防腐劑保存優(yōu)于CO2保存，詳見表1。 由于研究目的為時(shí)間對(duì)尿蛋白濃度的影響，可認(rèn)定為尿蛋白濃度24 h測(cè)量數(shù)據(jù)為基準(zhǔn)數(shù)據(jù)，進(jìn)一步對(duì)不同時(shí)間點(diǎn)分別與基準(zhǔn)測(cè)量數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，結(jié)果顯示，CO2保存方法192 h 和384 h 與基準(zhǔn)測(cè)量數(shù)據(jù)差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.167、3.053，P=0.033、0.003）。 說明如果尿標(biāo)本保存96 h 內(nèi)可選用CO2保存方法，一旦保存時(shí)間超過192 h 時(shí)不宜選用CO2保存方法。 如果保存時(shí)間不超過384 h 時(shí)，可選用冷藏保存、防腐劑保存和常溫保存。

表1 尿蛋白濃度不同保存方法下不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)量值比較（±S，mg/L）

表1 尿蛋白濃度不同保存方法下不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)量值比較（±S，mg/L）

注：#表示主效應(yīng)，*表示交互效應(yīng)

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3 討論

3.1 檢測(cè)24 h 尿蛋白濃度時(shí)，尿液標(biāo)本可不用防腐劑、冷藏和CO2保存方法，用常溫保存法即可，保存時(shí)間不宜超過384 h 李艷、薛雄燕、馮綺玲、鄧敬儀等[7-10]研究表明，防腐劑對(duì)24 h 尿蛋白定量檢測(cè)結(jié)果有影響,王修全、楊柳等[11-12]研究表明，尿液在常溫條件下保存24 h， 尿蛋白定量檢測(cè)結(jié)果顯著升高。本研究探討了同一患者的尿標(biāo)本分別用麝香草酚化學(xué)防腐法、 冷藏法、CO2物理保鮮法和常溫保存法保存，尿蛋白濃度4 組保存方法比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F組間=0.025，P=0.995），再對(duì)其不同時(shí)間尿蛋白檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較， 結(jié)果提示，4 種保存法保存尿標(biāo)本96 h 前， 尿蛋白濃度檢測(cè)結(jié)果與基準(zhǔn)測(cè)量結(jié)果比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， 說明防腐劑、冷藏法、CO2物理保鮮法和常溫條件下保存96 h 對(duì)尿蛋白定量檢測(cè)結(jié)果沒有影響， 這與國內(nèi)黃燕青[13]、劉倩等[14]、胡金川等[15]研究結(jié)果相似。 Feres 等[16]研究也表明，無論尿液中是否添加防腐劑，尿蛋白以及微量白蛋白的檢測(cè)結(jié)果與即時(shí)測(cè)定結(jié)果比較，均無明顯變化。

3.2 檢測(cè)24 h 尿蛋白濃度時(shí)，用常溫保存法保存時(shí)間不宜超過384 h Lo 等[17]發(fā)現(xiàn)通過CO2的處理，可以抑制原奶中的細(xì)菌繁殖， 從而延長(zhǎng)原奶的保存時(shí)間；Yang 等[18]研究表明CO2氣調(diào)法貯藏，可以延長(zhǎng)冷藏牛排的保質(zhì)時(shí)間；李浪花等[19]介紹了CO2在乳制品及農(nóng)產(chǎn)品保鮮中的技術(shù)應(yīng)用和研究進(jìn)展； 張燕等[20]對(duì)氣調(diào)貯藏對(duì)松茸保鮮品質(zhì)的影響進(jìn)行了研究； 然而都未涉及到CO2氣調(diào)法貯藏對(duì)尿標(biāo)本保鮮的相關(guān)研究。以往有針對(duì)保存24 h 時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行尿蛋白總量對(duì)比分析的研究[15,21-23]，但缺少對(duì)最佳存儲(chǔ)期限的探討。本研究探討了用麝香草酚化學(xué)防腐法、冷藏法、CO2物理保鮮法和常溫保存法保存尿標(biāo)本，在放置24 h、48 h、72 h、96 h、192 h、384 h 后， 分別檢測(cè)尿蛋白濃度， 并對(duì)同一患者檢測(cè)結(jié)果前后進(jìn)行比較，統(tǒng)計(jì)分析4 種保存方法存儲(chǔ)尿標(biāo)本的時(shí)間對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響， 并確定最佳保存方法和存儲(chǔ)期限。本研究發(fā)現(xiàn)CO2保存在192 h 和384 h 時(shí)間點(diǎn)與基準(zhǔn)測(cè)量比較時(shí)差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， 而其他保存方法各時(shí)間點(diǎn)尿蛋白濃度差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見表1）。 本研究結(jié)果提示，檢測(cè)24 h 尿蛋白濃度時(shí)， 尿液標(biāo)本可不用防腐劑、 冷藏和CO2保存方法， 在室溫下放陰涼處即可， 但保存時(shí)間不宜超過384 h。

3.3 研究的局限性 由于本次研究尿標(biāo)本保存96 h后時(shí)間跨度較大， 因此不能確切得出CO2保存具體時(shí)長(zhǎng)。另外，本次研究只涉及到CO2在保存尿液標(biāo)本中的應(yīng)用，但筆者通過閱讀文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，CO2的保鮮效果的影響因素包括氧氣分壓、CO2分壓、 儲(chǔ)存材料、溫度、濕度等[17-20，24-25]，本次研究均未涉及。 關(guān)于CO2保鮮效果的影響因素，在尿液標(biāo)本保鮮中的具體運(yùn)用以及存在的相關(guān)問題有待進(jìn)一步研究。

[致謝]感謝沈陽醫(yī)學(xué)院的黃啟風(fēng)老師對(duì)本文統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)的指導(dǎo)和把關(guān)。