張永剛

（重慶郵電大學(xué)移通學(xué)院體育部，重慶 401520）

色釘菇（Chroogomphus rutilus） 又稱血紅鉚釘菇，俗稱紅蘑、肉蘑、松樹(shù)傘、松蘑等，隸屬于擔(dān)子菌亞門 （Basidiomycotina） 層菌綱 （Hymenomycetes） 傘菌目 （Agaricales） 鉚釘菇科 （Gomphidiaceae） 色釘菇屬（Chroogomphus）；其肉質(zhì)肥嫩且鮮美可口，是一種名貴的野生食用菌，但無(wú)法人工栽培。色釘菇富含氨基酸、蛋白質(zhì)、多糖、內(nèi)酯等多種化學(xué)成分，具有抗氧化、增強(qiáng)免疫功能、抗運(yùn)動(dòng)病的作用。研究表明，植物神經(jīng)功能紊亂而引發(fā)的惡心、眩暈等是導(dǎo)致患者產(chǎn)生運(yùn)動(dòng)病的主要原因[1]。隨著交通出行的不斷便捷，運(yùn)動(dòng)病的發(fā)病率呈不斷遞增的趨勢(shì)。對(duì)于一般患者而言，其造成的影響主要體現(xiàn)在影響生活質(zhì)量和身心健康方面，但對(duì)于航天飛行員來(lái)說(shuō)，患病造成的影響較為嚴(yán)重。因此，對(duì)于運(yùn)動(dòng)病的研究重點(diǎn)在于如何提高藥物的適用性，降低毒副作用[2]。此外，對(duì)于運(yùn)動(dòng)病的行為檢測(cè)指標(biāo)則體現(xiàn)在條件性味覺(jué)厭惡，主要利用復(fù)制運(yùn)動(dòng)病前予以大鼠糖精水喂養(yǎng)建立起的條件性味覺(jué)厭惡反射，使大鼠的糖精水?dāng)z取量減少，以作為檢測(cè)運(yùn)動(dòng)病程度的主要指標(biāo)。為更好的發(fā)揮色釘菇的藥理活性，通過(guò)行為學(xué)和生化等檢測(cè)方法，探討色釘菇多糖對(duì)大鼠抗運(yùn)動(dòng)病的防治效果，為抗運(yùn)病藥物的研制提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)動(dòng)物為成年雄性SD大鼠20只，平均體重為210 g～240 g。色釘菇、食用糖精、氯化鈉、戊巴比妥鈉、大鼠胃動(dòng)素ELISA試劑盒、大鼠5-HT ELISA試劑盒。偏離垂直軸旋轉(zhuǎn)儀、冷凍離心機(jī)、磁力加熱攪拌器、電子分析天平。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 色釘菇多糖的制備

采用試驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)蒸餾水對(duì)所選色釘菇子實(shí)體進(jìn)行洗滌，完全洗滌干凈后于45℃的烘箱恒溫烘干，后予以粉碎稱重。用1∶10的比例混合色釘菇子實(shí)體粉末與蒸餾水，并放入水浴鍋內(nèi)80℃水浴加熱，輔以電動(dòng)攪拌棒充分?jǐn)嚢?，浸? h，3 000 r·min-1離心處理15 min后提取上清液，并將子實(shí)體進(jìn)行回收處理，水浴離心浸提3次，將3次離心提取的上清液混合并蒸發(fā)濃縮，后加入95%的3倍體積乙醇，4℃過(guò)夜沉淀，直至產(chǎn)生色釘菇多糖絮狀物，用無(wú)水乙醇反復(fù)沖洗后采用真空冷凍方式獲取色釘菇多糖。

1.2.2 試驗(yàn)分組處理

將20只大鼠采用隨機(jī)分配的方式分為試驗(yàn)組和對(duì)照組，每組10只，每組中的5只用于行為學(xué)檢測(cè)，另外5只用于血清5-羥色胺（5-HT）和胃動(dòng)素水平含量檢測(cè)。大鼠購(gòu)入后飼養(yǎng)3 d以適應(yīng)環(huán)境，禁水24 h后使大鼠自由飲用0.15%糖精水45 min。

1.2.3 血清5-HT和胃動(dòng)素含量檢測(cè)試驗(yàn)

對(duì)照組大鼠灌胃2 mL 0.9%的10 mL·kg-1氯化鈉溶液，試驗(yàn)組大鼠灌胃2 mL 200 mg·kg-1的色釘菇多糖溶液，30 min后對(duì)2組大鼠進(jìn)行OVAR旋轉(zhuǎn)刺激（偏離垂直軸10°、旋轉(zhuǎn)頻率1.5 Hz、持續(xù)旋轉(zhuǎn)時(shí)間1.5 h） 誘發(fā)運(yùn)動(dòng)病，然后進(jìn)行試驗(yàn)指標(biāo)檢測(cè)，并檢測(cè)大鼠血清5-羥色胺及胃動(dòng)素含量水平。

1.2.4 行為學(xué)檢測(cè)試驗(yàn)

1）糖精水條件性味覺(jué)厭惡試驗(yàn)

將空白對(duì)照組與試驗(yàn)組進(jìn)行OVAR旋轉(zhuǎn)刺激（方法參照1.2.3）。旋轉(zhuǎn)結(jié)束后，各組大鼠均即刻進(jìn)行曠場(chǎng)試驗(yàn)檢測(cè)，并在第2天8:00自由飲用0.15%糖精水45 min，記錄2組糖精水的飲用量，連續(xù)記錄3 d。

2） 曠場(chǎng)試驗(yàn)

將大鼠放入曠場(chǎng)中央格內(nèi)，用錄像機(jī)記錄大鼠10 min在曠場(chǎng)內(nèi)的活動(dòng)情況。每次試驗(yàn)結(jié)束后用消毒酒精擦拭箱底和四壁，以去除上只大鼠尿液、糞便的影響。統(tǒng)計(jì)大鼠潛伏期（曠場(chǎng)底面中央的9個(gè)格為中央?yún)^(qū)域，在中央?yún)^(qū)域的停留時(shí)間）、修飾行為（舔毛、舔足、兩前肢理毛、撫嘴等）。

1.3 數(shù)據(jù)處理

將所有研究數(shù)據(jù)使用SPSS 20.0軟件處理，其中計(jì)量資料對(duì)比通過(guò)（±s） 表示，t值檢驗(yàn)；最后，判定統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的標(biāo)準(zhǔn)為P＜0.05。

2 結(jié)果

2.1 兩組大鼠血清中神經(jīng)遞質(zhì)和激素含量的試驗(yàn)結(jié)果對(duì)比

2組大鼠血清5-HT和胃動(dòng)素含量的試驗(yàn)對(duì)比結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 血清神經(jīng)遞質(zhì)和激素含量的試驗(yàn)結(jié)果對(duì)比Tab.1 Comparison of experimental results of serum neurotransmitters and hormones

如表1所示，對(duì)照組大鼠5-HT水平含量顯著增加，試驗(yàn)組大鼠5-HT水平含量顯著降低P＜0.05；對(duì)照組大鼠胃動(dòng)素水平含量降低，試驗(yàn)組大鼠胃動(dòng)素水平含量增高，P＜0.05。

2.2 兩組大鼠糖精水條件性味覺(jué)厭惡檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

2組大鼠糖精水條件性味覺(jué)厭惡檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 2組大鼠糖精水條件性味覺(jué)厭惡檢測(cè)結(jié)果對(duì)比Tab.2 Comparison of test results of conditional taste aversion in saccharin water between two groups of rats

如表2所示，對(duì)照組大鼠與OVAR旋轉(zhuǎn)刺激轉(zhuǎn)后相比，糖精水?dāng)z入量顯著減少P＜0.05，直至轉(zhuǎn)后第3天攝入量才開(kāi)始恢復(fù)增加，與轉(zhuǎn)前相比，仍差距顯著P＜0.05。試驗(yàn)組大鼠與OVAR旋轉(zhuǎn)刺激轉(zhuǎn)前相比，糖精水?dāng)z入量無(wú)明顯差異P＞0.05。

2.3 兩組大鼠潛伏期及修飾時(shí)間對(duì)比

試驗(yàn)組大鼠行為表現(xiàn)正常，意識(shí)清楚、行動(dòng)正常、肢體活動(dòng)靈敏，探索行為正常，飲食行為與飲水狀態(tài)均處于正常水平。對(duì)照組大鼠在經(jīng)過(guò)OVAR旋轉(zhuǎn)刺激后表現(xiàn)為顯著的運(yùn)動(dòng)病狀態(tài)，行為遲緩、呼吸急促、顫抖炸毛、自主行為活動(dòng)減少，存在大小便失禁等癥，修飾行為增加。2組大鼠潛伏期及修飾時(shí)間對(duì)比見(jiàn)表3。

表3 試驗(yàn)結(jié)果對(duì)比Tab.3 Comparison of test results

如表3所示，對(duì)照組大鼠自主活動(dòng)顯著減少，多呈靜臥的狀態(tài)，試驗(yàn)組大鼠活動(dòng)正常，自主探究行為較多，對(duì)照組的潛伏期顯著高于試驗(yàn)組，P＜0.05。對(duì)照組大鼠轉(zhuǎn)后，自主探究活動(dòng)減少，為顯著的運(yùn)動(dòng)病狀態(tài)，行為遲緩、呼吸急促、顫抖炸毛、存在大小便失禁等癥，修飾時(shí)間長(zhǎng)；試驗(yàn)組大鼠轉(zhuǎn)后自主活動(dòng)正常，修飾行為正常，意識(shí)清楚、肢體活動(dòng)靈敏，探索行為正常，飲食行為與飲水狀態(tài)均處于正常水平。修飾時(shí)間短于對(duì)照組P＜0.05。

3 討論

目前，對(duì)于運(yùn)動(dòng)病的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行了較多研究并存在多種假說(shuō)，主要以中樞神經(jīng)遞質(zhì)失衡、內(nèi)分泌功能異常為主要原因，且抗運(yùn)動(dòng)病藥物研制多以檢測(cè)血液內(nèi)激素變化，并輔以觀察動(dòng)物行為變化，以確定藥效。目前廣泛使用的抗運(yùn)動(dòng)病藥物均具有良好的減輕癥狀效果，但大多都存在一定的副作用，如視力模糊、注意力下降等，無(wú)法滿足航空領(lǐng)域人員的專業(yè)需求[3]。通過(guò)采取偏離垂直軸旋轉(zhuǎn)復(fù)制運(yùn)動(dòng)病模型的方式對(duì)成年雄性SD大鼠進(jìn)行抗運(yùn)動(dòng)病藥物的研究，運(yùn)動(dòng)病模型復(fù)制成功的大鼠主要表現(xiàn)為自主活動(dòng)減少，鼠類修飾行為增多，修飾時(shí)間增加，且顫抖、炸毛情況增多。研究表明，在對(duì)大鼠進(jìn)行復(fù)制運(yùn)動(dòng)病前予以灌胃色釘菇多糖可有效改善大鼠的運(yùn)動(dòng)病癥狀。5-HT與胃動(dòng)素是調(diào)節(jié)胃腸激素分泌的關(guān)鍵因素，而運(yùn)動(dòng)病的主要臨床表現(xiàn)為患者出現(xiàn)惡心嘔吐、胃腸功能紊亂，主要體現(xiàn)在胃動(dòng)素含量的降低與5-HT分泌的增加[4]。相關(guān)研究表明[5]，運(yùn)動(dòng)病患者普遍存在胃腸道5-HT分泌增加，導(dǎo)致無(wú)法通過(guò)血腦屏障在血液中充分內(nèi)擴(kuò)散，進(jìn)而使得腸壁內(nèi)迷走神經(jīng)被激活而傳入末梢，導(dǎo)致信號(hào)傳至孤束核而引發(fā)反射。抑制5-HT的分泌是治療運(yùn)動(dòng)病的關(guān)鍵所在，且目前臨床研究將抗運(yùn)動(dòng)病的藥物治療方向轉(zhuǎn)移到了5-HT受體拮抗劑方向，并取得了一定的研究成果[6]。此外，胃動(dòng)素的水平含量也是影響運(yùn)動(dòng)病的主要指標(biāo)之一。通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，大鼠服用色釘菇多糖后，可有效降低運(yùn)動(dòng)病的臨床癥狀，降低大鼠血清中的神經(jīng)遞質(zhì)含量，促進(jìn)胃動(dòng)素的分泌。不僅表明了抗運(yùn)動(dòng)病的治療關(guān)鍵與5-HT與胃動(dòng)素有關(guān)，還證實(shí)了色釘菇多糖具有良好的抗運(yùn)動(dòng)病作用[7]；對(duì)比2組大鼠的行為表現(xiàn)、潛伏期時(shí)間、糖精水條件性味覺(jué)厭惡檢測(cè)結(jié)果、修飾時(shí)間與血清中神經(jīng)遞質(zhì)和激素含量等試驗(yàn)結(jié)果，皆體現(xiàn)出色釘菇多糖具有顯著的抗運(yùn)動(dòng)病療效，促進(jìn)大鼠胃動(dòng)素分泌且抑制其5-HT分泌，該結(jié)果可作為臨床醫(yī)學(xué)的研究依據(jù)，為防止和開(kāi)發(fā)與選擇抗運(yùn)動(dòng)病藥物提供新方向。