曹 亮

（燕山大學體育學院，河北 秦皇島 066004）

近年來，隨著食用菌相關研究不斷深入，人們利用的食用菌已存有350多種[1]。食用菌主要是指可食用的子實體較大的真菌，主要包括木耳（Auricularia auricula）、松茸 （Tricholoma matsutake）、松露（Tuber spp.）等，羊肚菌（Morchella esculenta）作為食用菌當中較為珍貴的菌類，其外形與羊肚形狀較為接近，因此而得名羊肚菌[2]。羊肚菌生長環(huán)境較為特殊，大多生長在火山附近，產(chǎn)量較為稀少且珍貴[3]。現(xiàn)階段，針對羊肚菌的研究不斷深入，作為公認的珍稀食用菌種類，一方面需要通過深層發(fā)酵技術來獲取羊肚菌的菌絲體[4]。根據(jù)相關調(diào)查研究顯示，羊肚菌具有一定的藥用功效，對于人體喘咳、食積氣滯等具有良好的治療效果[5]。食用羊肚菌不僅能夠有效增強人體免疫力，同時還具備抗疲勞、抗衰老的作用，在保健方面發(fā)揮著良好功效?，F(xiàn)代社會隨著人們生活壓力的不斷增加，日常工作的壓力和疲勞度大大提高，長期處于亞健康狀態(tài)下，導致健康狀況受到影響，而對抗疲勞的相關藥物的需求不斷提高。通過抗疲勞試驗，實現(xiàn)對羊肚菌多糖成分的有效提取，并測定小鼠服用多糖后對運動功能所起到的有效促進作用，進而分析多糖在對抗疲勞和增強機體運動能力方面的效果。

1 材料

1.1 試驗動物

ICR小鼠共選取60只雄性，將重量控制在28 g左右，所購入小鼠均由中國農(nóng)業(yè)大學動物中心所提供，并具有相應的合格證號SCXK2016-0013[6]。

1.2 主要材料與試劑

羊肚菌菌株由雪開野生靈芝銷售有限公司所提供，所購入羊肚菌均符合研究標準；試驗中所用的血乳酸試劑盒以及檢測試劑盒，均由上海依科賽生物制品有效公司提供，符合試驗所需要使用的材料與試劑標準。

1.3 主要儀器

便攜式血乳酸測定儀，德國EKF lactate scout公司；超微粉碎機，康和機械制造有效公司。試驗主要儀器有可見光光度計、旋轉蒸發(fā)儀、電熱恒溫水浴鍋以及離心機等。

2 方法

2.1 羊肚菌多糖的制備

胞外多糖的提?。禾崛⊙蚨蔷囵B(yǎng)液300 mL，過濾，并在50℃恒溫水中進行攪拌從而使體積濃縮；為去除蛋白，采用Sevage方法，將去蛋白后的培養(yǎng)液加入其3倍體積的95%乙醇在-20℃沉降24 h，析出絮狀白色物質，以4 000 r·min-1離心20 min得到白色沉淀，加入50 mL蒸餾水溶解后，50℃水浴除去樣品中殘留的乙醇，得到胞外多糖，備用經(jīng)過相關操作后，最終得出胞外多糖留著后續(xù)試驗操作備用[7]。

胞內(nèi)多糖的提?。簽楂@取菌絲沉淀物，采用蒸餾水離心洗滌的方式進行，通過將水浴溫度控制在85℃恒溫條件下，按照50∶1的比例增加去離子水，整個浸提時間控制在120 min，在經(jīng)過離心去除菌絲、離心去沉淀等操作后，最終得到胞內(nèi)多糖[8]。

采用乙醇對羊肚菌內(nèi)的多糖進行相應的提取，得知羊肚菌多糖主要是由摩爾比1∶1.059的甘露糖與半乳糖組成。將提取得到的羊肚菌多糖調(diào)制成一定的濃度，作為試驗的主要材料。

2.2 試驗動物分組與給藥

試驗中，將每組小鼠15只，分4個組進行試驗，各小組需要保持在正常飼養(yǎng)的情況下，對照組小鼠給予去離子水（10 mg·kg-1）灌胃，低劑量、中劑量、高劑量組分別灌胃羊肚菌多糖10 mg·kg-1、20 mg·kg-1、30 mg·kg-1，灌胃持續(xù)時間為 30 d[10]，所有試驗均在小鼠灌胃羊肚菌多糖30 min后進行相關操作。

2.3 負重游泳時間測定試驗

小鼠負重游泳測試放置在水溫28℃的水中，并讓各個小組分別進行負重游泳試驗，游泳箱內(nèi)的水深控制在35 cm左右。在試驗過程當中，對小鼠進行鉛絲捆綁負重，詳細記錄小鼠負重游泳的時間。

2.4 爬桿時間測定試驗

將小鼠放置在長30 cm的玻璃棒上，玻璃棒的直徑控制在10 mm左右，從而使小鼠身體各部位肌肉保持緊張感覺。在整個試驗過程當中，注意記錄小鼠攀爬玻璃棒的疲勞時間，詳細記錄爬桿時間。

2.5 常壓耐缺氧時間測定試驗

將小鼠放置在放有15 g石灰的大瓶中，在小鼠進入大瓶后及時進行瓶口的密封，根據(jù)實際情況詳細記錄小鼠耐缺氧時間。

2.6 生化指標的測定方法

2.6.1 血清尿素氮含量

對小鼠進行末次灌胃羊肚菌多糖30 min后，將小鼠放于試驗用游泳池中進行游泳，泳池溫度約為35℃，游泳90 min后，對小鼠進行采血，同時分離血清，測其中尿素氮含量.

2.6.2 肝糖原含量

對小鼠進行末次灌胃羊肚菌多糖30 min后，將小鼠放于試驗用游泳池中進行游泳，泳池溫度約為35℃，游泳90 min后，處死后進行取小鼠肝組織200 mg，將其勻漿，檢測肝糖原含量[11]。

2.6.3 血乳酸含量

對小鼠進行末次灌胃30 min后，將小鼠尾部系上鉛絲，重量為其身體重量的5%，進行負重游泳，泳池水溫約為35℃，游泳90 min后，休息20 min，從小鼠眼球位置取血，測血乳酸含量。

2.6.4 TNF-α和IL-6含量檢測

根據(jù)ELISA試劑盒的相關說明書進行血清含量的檢測。

3 結果與分析

3.1 羊肚菌多糖對小鼠負重游泳、爬桿及常壓耐缺氧時間的影響

羊肚菌多糖對小鼠負重游泳、爬桿、耐缺氧時間的影響情況見表1。

表1 羊肚菌多糖對小鼠負重游泳、爬桿、耐缺氧時間的影響Tab.1 Effects of Morchella esculenta polysaccharides on weightbearing swimming,climbing pole and hypoxia tolerance time in mice

根據(jù)表1相關數(shù)據(jù)可知，在經(jīng)過灌胃羊肚菌多糖后的小鼠，其各項運動指標都發(fā)生了顯著變化，游泳時間得到了明顯增加，由對照組的（13.25±3.05） min，提高到高劑量組的（53.52±3.02） min，同時小鼠負重游泳的時間也將隨著劑量的提升而得到延長，充分說明羊肚菌多糖劑量的用量越大，小鼠耐缺氧時間則延長越久[12]。充分證明羊肚菌多糖增強小鼠運動能力的積極作用，在抗疲勞和耐缺氧方面具有良好效果。

3.2 羊肚菌多糖對小鼠生化指標的影響

羊肚菌多糖對小鼠各項生化指標的影響情況見表2。

表2 羊肚菌多糖對小鼠各項生化指標的影響Tab.2 Effect of Morchella esculenta polysaccharides on biochemical indexes in mice

根據(jù)表2結果顯示，經(jīng)過灌胃羊肚菌多糖后的小鼠，其生化指標得到了明顯提高，隨著灌胃劑量的不斷增加，其體內(nèi)生化指標的數(shù)據(jù)也有相應變化。其中，最明顯的變化特征為小鼠體內(nèi)血清尿素氮的含量，隨著羊肚菌劑量的增加而出現(xiàn)了顯著降低，對照組尿素氮含量為 (8.76±0.21)mmol·L-1；低劑量、中劑量、高劑量組尿素氮含量分別為（7.24±0.44） mmol·L-1、 （5.93 ± 0.15） mmol·L-1、 （4.49 ±0.36） mmol·L-1，尤其是在羊肚菌多糖劑量達到20 mg·kg-1時，其體內(nèi)血清尿素氮含量顯著下降[13]。小鼠的運動能力，將隨著羊肚菌多糖劑量的增加得到明顯增強，不僅有效提高小鼠運動后疲勞的有效恢復，同時也使得恢復速度得到提高。因此，試驗結果表明，灌胃羊肚菌多糖的小鼠抗疲勞能力得到了有效增強。

4 結論

試驗中，經(jīng)過灌胃羊肚菌多糖的小鼠其運動能力以及抗疲勞能力得到有效增強，根據(jù)研究結果顯示小鼠的各項生理生化指標都得到了提高。隨著灌胃劑量的增加，小鼠在參與負重游泳時的游泳時間得到了顯著延長，小鼠的耐缺氧時間也得到了顯著的提高。除此之外，經(jīng)過灌胃羊肚菌多糖后的小鼠，其體內(nèi)血乳酸以及血清尿素含量都出現(xiàn)了顯著下降的特征，小鼠體內(nèi)的肝糖原含量則得到了顯著增加。因此，試驗結果表明，羊肚菌多糖能夠有效增強小鼠運動能力，提高運動后疲勞恢復效果，并有效增強小鼠的抗疲勞性。