王新紅

(廣州醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院 廣州口腔疾病研究所 口腔醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510140)

復(fù)方硼砂含漱液是口腔科非處方用藥，含硼砂、苯酚等成分，多用于口腔黏膜潰瘍類(lèi)及感染類(lèi)疾病的輔助治療。該含漱液既有一定的消毒防腐作用，又有一定保護(hù)口腔黏膜的作用，且對(duì)患者口腔刺激弱，是常用口腔護(hù)理藥物[1-2]。復(fù)方硼砂含漱液在口腔臨床中廣泛使用，但其抑制細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖作用少見(jiàn)報(bào)道。實(shí)驗(yàn)選擇了金黃色葡萄球菌等5種標(biāo)準(zhǔn)菌株及5株臨床分離MRSA菌株，檢測(cè)了復(fù)方硼砂含漱液對(duì)上述各菌的抑制效果，結(jié)果顯示，該含漱液在2倍稀釋度下，可有效抑制各實(shí)驗(yàn)菌株的生長(zhǎng)，4倍稀釋亦有一定抑制效果。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 試劑

復(fù)方硼砂含漱液(上海運(yùn)佳黃浦，批號(hào)190804)，0.9%氯化鈉注射液(廣東怡翔，批號(hào)：190125201 C5)、硫酸慶大霉素注射液(欣辰藥業(yè)，批號(hào)：190126301)，營(yíng)養(yǎng)瓊脂(北京奧博星，批號(hào)20190607)，MH(B)肉湯(北京奧博星，批號(hào)20190512)。

1.1.2 菌株

金黃色葡萄球菌ATCC25923標(biāo)準(zhǔn)株及耐甲氧西林臨床分離株(5株)，表皮葡萄球菌ATCC12228，銅綠假單胞菌ATCC27853標(biāo)準(zhǔn)株、大腸埃希菌ATCC25922標(biāo)準(zhǔn)株、肺炎克雷伯菌CMCC(B)46117標(biāo)準(zhǔn)株，總計(jì)共10株細(xì)菌，均由山東中醫(yī)藥大學(xué)微生物教研室提供。

1.1.3 主要儀器設(shè)備

麥?zhǔn)媳葷峁?自行配制)，96孔無(wú)菌培養(yǎng)板(Corning)、90 mm一次性無(wú)菌培養(yǎng)皿(NEST)，電子天平(上海立辰FA-1004)，HH-2電熱恒溫水浴鍋(杭州恒儀)，DNP-9300-BS-11恒溫培養(yǎng)箱(上海和勤)，DNM-9602普朗酶標(biāo)儀(北京普朗)，移液器(Dragon Lab)等。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 培養(yǎng)基制備

MH(B)肉湯和營(yíng)養(yǎng)瓊脂按照說(shuō)明書(shū)配置后，121℃15min滅菌，營(yíng)養(yǎng)瓊脂制成無(wú)菌營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，MH(B)肉湯以無(wú)菌錐形瓶?jī)?chǔ)存，均于4℃冷藏備用。

2.2 細(xì)菌培養(yǎng)

將上述細(xì)菌以營(yíng)養(yǎng)瓊脂接種培養(yǎng)，37℃24h后待其生長(zhǎng)良好，挑取細(xì)菌，用MH肉湯洗脫，以麥?zhǔn)媳葷峁芘渲瞥?×106cfu/ml濃度的菌液備用。

2.3 藥液作用于細(xì)菌

依據(jù)NCCLS規(guī)定[3]，參照文獻(xiàn)方法[4-5]，各菌株的MIC用微量肉湯稀釋法進(jìn)行測(cè)定。96孔培養(yǎng)板每孔加入100uLMH(B)肉湯培養(yǎng)液，A行中加入含漱液藥液100uL，從A行中吸取混合液100uL加入第2行，按此操作進(jìn)行二倍稀釋至F行，依次得到藥液含量為2-64倍稀釋梯度，G行不加藥物作為空白對(duì)照，H行加入大慶霉素注射液10uL作為陽(yáng)性對(duì)照；1-12列各列的A-H行中分別加入配置好的菌液10uL，每株細(xì)菌重復(fù)3次。37℃下培育24h，將樣品與對(duì)照孔進(jìn)行對(duì)比，判斷MIC：若當(dāng)前孔中培養(yǎng)液清晰，而下一個(gè)濃度孔出現(xiàn)渾濁，則將當(dāng)前孔的藥物稀釋度作為MIC；如當(dāng)前孔與空白對(duì)照相同，均為渾濁狀態(tài)，說(shuō)明無(wú)抑菌作用。

3 結(jié)果

表1 復(fù)方硼砂含漱液對(duì)各菌株的MIC

表1結(jié)果顯示，復(fù)方硼砂含漱液在2-4倍稀釋度下對(duì)各菌株有一定抑制作用。在2倍稀釋濃度下，實(shí)驗(yàn)所用各菌的生長(zhǎng)均被復(fù)方硼砂含漱液所抑制；在4倍稀釋濃度下，復(fù)方硼砂含漱液只能抑制表皮葡萄球菌ATCC12228、MRSA臨床株2和4的生長(zhǎng)。

4 討論

硼砂分子式為Na2B4O7·12H2O，是中國(guó)藥典記載的中藥之一。研究顯示，硼砂對(duì)金黃色葡萄球菌、結(jié)核分枝桿菌等細(xì)菌具有一定抑制作用，對(duì)真菌、病毒亦有抑制效果[6]。苯酚是人類(lèi)最早使用的消毒劑之一，其主要?dú)⒕饔玫臋C(jī)制是使蛋白質(zhì)變性，臨床常用2%～5%苯酚水溶液作為消毒劑。硼砂含漱液含0.3%(體積分?jǐn)?shù))的液化酚，由苯酚加熱后加入8%～10%的水制得。硼砂和苯酚均有一定的消毒作用，是復(fù)方硼砂含漱液抗菌作用的主要成分[7]。

金黃色葡萄球菌在人體口腔及鼻咽部均有分布，易產(chǎn)生耐藥性變異，是重要口腔感染細(xì)菌之一[8-9]。MRSA是臨床最常見(jiàn)的耐藥菌之一，常致院內(nèi)感染，亦屬口腔常見(jiàn)感染細(xì)菌，對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)和頭孢類(lèi)抗生素具有較強(qiáng)耐藥性[10-11]。表皮葡萄球菌是人體正常微生物群組成部分，在人體免疫力下降或侵入人體無(wú)菌部位等情況下也可引起感染。共生于人體皮膚和黏膜，可引起口腔感染[12]。大腸埃希菌主要引起腹腔感染、泌尿感染、呼吸系統(tǒng)以及皮膚感染等疾病，易發(fā)生耐藥性變異。隨著該菌耐藥性的不斷上升，其引起的感染問(wèn)題也日益嚴(yán)重，近年來(lái)亦有引起口腔感染的報(bào)道[13]。肺炎克雷伯菌能引起肺炎、敗血癥等感染，常出現(xiàn)耐藥性突變，在口腔感染者痰液標(biāo)本中經(jīng)常分離到，是口腔感染的常見(jiàn)病原菌之一[10-11]。銅綠假單胞菌在正常人體皮膚粘膜、呼吸道、消化道均有分布，屬機(jī)會(huì)致病菌，是醫(yī)源性感染的主要細(xì)菌之一，可引起口腔頜面外科患者術(shù)后感染[10-11]。該菌具有較強(qiáng)的天然耐藥性，對(duì)常用碳青霉烯類(lèi)抗生素抵抗力較強(qiáng)[14]。

臨床常將復(fù)方硼砂含漱液用于口腔黏膜潰瘍類(lèi)及感染類(lèi)疾病的治療。本研究顯示，復(fù)方硼砂含漱液2倍稀釋時(shí)可有效抑制實(shí)驗(yàn)中所選全部菌株的生長(zhǎng)繁殖；4倍稀釋時(shí)依然能夠有效抑制表皮葡萄球菌ATCC12228和部分MRSA臨床株的生長(zhǎng)。上述結(jié)果說(shuō)明，該含漱液在其正常工作濃度下，對(duì)常見(jiàn)部分口腔感染細(xì)菌有較好的抑制作用，有較好的消毒效果。