王新紅
(廣州醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院 廣州口腔疾病研究所 口腔醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東 廣州 510140)
復(fù)方硼砂含漱液是口腔科非處方用藥,含硼砂、苯酚等成分,多用于口腔黏膜潰瘍類(lèi)及感染類(lèi)疾病的輔助治療。該含漱液既有一定的消毒防腐作用,又有一定保護(hù)口腔黏膜的作用,且對(duì)患者口腔刺激弱,是常用口腔護(hù)理藥物[1-2]。復(fù)方硼砂含漱液在口腔臨床中廣泛使用,但其抑制細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖作用少見(jiàn)報(bào)道。實(shí)驗(yàn)選擇了金黃色葡萄球菌等5種標(biāo)準(zhǔn)菌株及5株臨床分離MRSA菌株,檢測(cè)了復(fù)方硼砂含漱液對(duì)上述各菌的抑制效果,結(jié)果顯示,該含漱液在2倍稀釋度下,可有效抑制各實(shí)驗(yàn)菌株的生長(zhǎng),4倍稀釋亦有一定抑制效果。
1.1.1 試劑
復(fù)方硼砂含漱液(上海運(yùn)佳黃浦,批號(hào)190804),0.9%氯化鈉注射液(廣東怡翔,批號(hào):190125201 C5)、硫酸慶大霉素注射液(欣辰藥業(yè),批號(hào):190126301),營(yíng)養(yǎng)瓊脂(北京奧博星,批號(hào)20190607),MH(B)肉湯(北京奧博星,批號(hào)20190512)。
1.1.2 菌株
金黃色葡萄球菌ATCC25923標(biāo)準(zhǔn)株及耐甲氧西林臨床分離株(5株),表皮葡萄球菌ATCC12228,銅綠假單胞菌ATCC27853標(biāo)準(zhǔn)株、大腸埃希菌ATCC25922標(biāo)準(zhǔn)株、肺炎克雷伯菌CMCC(B)46117標(biāo)準(zhǔn)株,總計(jì)共10株細(xì)菌,均由山東中醫(yī)藥大學(xué)微生物教研室提供。
1.1.3 主要儀器設(shè)備
麥?zhǔn)媳葷峁?自行配制),96孔無(wú)菌培養(yǎng)板(Corning)、90 mm一次性無(wú)菌培養(yǎng)皿(NEST),電子天平(上海立辰FA-1004),HH-2電熱恒溫水浴鍋(杭州恒儀),DNP-9300-BS-11恒溫培養(yǎng)箱(上海和勤),DNM-9602普朗酶標(biāo)儀(北京普朗),移液器(Dragon Lab)等。
MH(B)肉湯和營(yíng)養(yǎng)瓊脂按照說(shuō)明書(shū)配置后,121℃15min滅菌,營(yíng)養(yǎng)瓊脂制成無(wú)菌營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板,MH(B)肉湯以無(wú)菌錐形瓶?jī)?chǔ)存,均于4℃冷藏備用。
將上述細(xì)菌以營(yíng)養(yǎng)瓊脂接種培養(yǎng),37℃24h后待其生長(zhǎng)良好,挑取細(xì)菌,用MH肉湯洗脫,以麥?zhǔn)媳葷峁芘渲瞥?×106cfu/ml濃度的菌液備用。
依據(jù)NCCLS規(guī)定[3],參照文獻(xiàn)方法[4-5],各菌株的MIC用微量肉湯稀釋法進(jìn)行測(cè)定。96孔培養(yǎng)板每孔加入100uLMH(B)肉湯培養(yǎng)液,A行中加入含漱液藥液100uL,從A行中吸取混合液100uL加入第2行,按此操作進(jìn)行二倍稀釋至F行,依次得到藥液含量為2-64倍稀釋梯度,G行不加藥物作為空白對(duì)照,H行加入大慶霉素注射液10uL作為陽(yáng)性對(duì)照;1-12列各列的A-H行中分別加入配置好的菌液10uL,每株細(xì)菌重復(fù)3次。37℃下培育24h,將樣品與對(duì)照孔進(jìn)行對(duì)比,判斷MIC:若當(dāng)前孔中培養(yǎng)液清晰,而下一個(gè)濃度孔出現(xiàn)渾濁,則將當(dāng)前孔的藥物稀釋度作為MIC;如當(dāng)前孔與空白對(duì)照相同,均為渾濁狀態(tài),說(shuō)明無(wú)抑菌作用。
表1 復(fù)方硼砂含漱液對(duì)各菌株的MIC
表1結(jié)果顯示,復(fù)方硼砂含漱液在2-4倍稀釋度下對(duì)各菌株有一定抑制作用。在2倍稀釋濃度下,實(shí)驗(yàn)所用各菌的生長(zhǎng)均被復(fù)方硼砂含漱液所抑制;在4倍稀釋濃度下,復(fù)方硼砂含漱液只能抑制表皮葡萄球菌ATCC12228、MRSA臨床株2和4的生長(zhǎng)。
硼砂分子式為Na2B4O7·12H2O,是中國(guó)藥典記載的中藥之一。研究顯示,硼砂對(duì)金黃色葡萄球菌、結(jié)核分枝桿菌等細(xì)菌具有一定抑制作用,對(duì)真菌、病毒亦有抑制效果[6]。苯酚是人類(lèi)最早使用的消毒劑之一,其主要?dú)⒕饔玫臋C(jī)制是使蛋白質(zhì)變性,臨床常用2%~5%苯酚水溶液作為消毒劑。硼砂含漱液含0.3%(體積分?jǐn)?shù))的液化酚,由苯酚加熱后加入8%~10%的水制得。硼砂和苯酚均有一定的消毒作用,是復(fù)方硼砂含漱液抗菌作用的主要成分[7]。
金黃色葡萄球菌在人體口腔及鼻咽部均有分布,易產(chǎn)生耐藥性變異,是重要口腔感染細(xì)菌之一[8-9]。MRSA是臨床最常見(jiàn)的耐藥菌之一,常致院內(nèi)感染,亦屬口腔常見(jiàn)感染細(xì)菌,對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)和頭孢類(lèi)抗生素具有較強(qiáng)耐藥性[10-11]。表皮葡萄球菌是人體正常微生物群組成部分,在人體免疫力下降或侵入人體無(wú)菌部位等情況下也可引起感染。共生于人體皮膚和黏膜,可引起口腔感染[12]。大腸埃希菌主要引起腹腔感染、泌尿感染、呼吸系統(tǒng)以及皮膚感染等疾病,易發(fā)生耐藥性變異。隨著該菌耐藥性的不斷上升,其引起的感染問(wèn)題也日益嚴(yán)重,近年來(lái)亦有引起口腔感染的報(bào)道[13]。肺炎克雷伯菌能引起肺炎、敗血癥等感染,常出現(xiàn)耐藥性突變,在口腔感染者痰液標(biāo)本中經(jīng)常分離到,是口腔感染的常見(jiàn)病原菌之一[10-11]。銅綠假單胞菌在正常人體皮膚粘膜、呼吸道、消化道均有分布,屬機(jī)會(huì)致病菌,是醫(yī)源性感染的主要細(xì)菌之一,可引起口腔頜面外科患者術(shù)后感染[10-11]。該菌具有較強(qiáng)的天然耐藥性,對(duì)常用碳青霉烯類(lèi)抗生素抵抗力較強(qiáng)[14]。
臨床常將復(fù)方硼砂含漱液用于口腔黏膜潰瘍類(lèi)及感染類(lèi)疾病的治療。本研究顯示,復(fù)方硼砂含漱液2倍稀釋時(shí)可有效抑制實(shí)驗(yàn)中所選全部菌株的生長(zhǎng)繁殖;4倍稀釋時(shí)依然能夠有效抑制表皮葡萄球菌ATCC12228和部分MRSA臨床株的生長(zhǎng)。上述結(jié)果說(shuō)明,該含漱液在其正常工作濃度下,對(duì)常見(jiàn)部分口腔感染細(xì)菌有較好的抑制作用,有較好的消毒效果。