（湖南省動物疫病預(yù)防控制中心，湖南長沙 410014）

繁殖障礙性疫病是以母豬流產(chǎn)，產(chǎn)死胎、弱胎、木乃伊胎，以及不孕不育為主要特征的一類疫病，常見的有豬瘟（CSF）、豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）、豬偽狂犬?。≒R）、豬圓環(huán)病毒?。≒CVD）、豬細(xì)小病毒?。≒PI）等。這幾種病的病原臨床多表現(xiàn)為混合感染[1-2]，也可通過種豬垂直傳播至下一代，造成更大范圍的感染[3]，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。自非洲豬瘟在我國暴發(fā)以來，種豬已成為當(dāng)前養(yǎng)豬業(yè)的稀缺資源，如何防控非洲豬瘟和主要繁殖障礙性疫病，提高母豬健康水平和生產(chǎn)性能，是種豬場急需解決的問題。當(dāng)前，湖南省共有原種豬場17個，一級擴(kuò)繁場131個，其他類型種豬場300 余個。為了解湖南省原種豬場主要繁殖障礙性疫病流行情況，結(jié)合我國原種豬場的監(jiān)測要求，自2015年開始，對省內(nèi)5個原種場進(jìn)行了CSF、PRRS、PR、PCVD、PPI 等主要繁殖障礙性疫病的病原和抗體監(jiān)測，以期為全省種豬主要繁殖障礙性疫病防控及凈化策略制定提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 待檢樣品 根據(jù)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部畜牧獸醫(yī)局關(guān)于《種畜禽場主要動物疫病監(jiān)測實施方案》要求，并結(jié)合湖南省原種豬場自身情況，自2015 起，在湖南省原種豬場，選擇存欄量在5 000 頭以上的5個大型原種場（A、B、C、D、E），每年6—8 月進(jìn)行一次采樣檢測。樣品來源原則上每個原種豬場不少于3 棟豬舍的豬只，其中種公豬5 頭、經(jīng)產(chǎn)母豬25 頭（1～2 胎5 頭、3～4 胎10 頭、5～6 胎10 頭）、后備母豬10 頭（40～60 kg 5 頭、90～110 kg 5 頭）。每個原種豬場共計采集40 份豬血清及相對應(yīng)的40份扁桃體樣本。截至2019年，共在5個原種豬場，采集豬血清及扁桃體樣品各1 000 份，-20 ℃以下保存待檢。

1.1.2 病原學(xué)檢測試劑 豬瘟病毒（CSFV）通用型實時熒光RT-PCR 檢測試劑盒（50 頭份），豬圓環(huán)病毒Ⅱ型（PCV2）實時熒光PCR 檢測試劑盒（50 頭份），豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）通用型RT-PCR 檢測試劑盒（50 頭份），PRRSV Nsp1594-1680 變異株RT-PCR 檢測試劑盒（50 頭份），豬細(xì)小病毒（PPV）實時熒光PCR 檢測試劑盒（50 頭份）：均購自于北京世紀(jì)元亨動物防疫技術(shù)有限公司。

1.1.3 血清學(xué)檢測試劑 CSFV 抗體檢ELISA 測試劑盒、PRV-gB 抗體ELISA 試劑盒、PRV-gE 抗體ELISA 試劑盒，均為美國IDEXX 公司生產(chǎn)；PRRSV 抗體ELISA 試劑盒，法國LSI 公司生產(chǎn)。

1.1.4 主要儀器設(shè)備 核酸提取儀、PCR 儀、熒光PCR 儀、組織研磨儀、酶標(biāo)儀、離心機(jī)等。

1.2 方法

1.2.1 病原學(xué)檢測 將采集的扁桃體樣本搗碎，提取病毒核酸。采用實時熒光定量方法，檢測組織樣本中CSFV、PCV2、PPV 核酸。體系配置、反應(yīng)條件及判定標(biāo)準(zhǔn)，參照試劑盒說明書進(jìn)行。對病毒核酸先使用通用型RT-PCR 擴(kuò)增PRRSV，對陽性樣品再用RT-PCR 進(jìn)行HP-PRRSV（變異株）擴(kuò)增，根據(jù)結(jié)果判定感染類型；在用PRVgE基因缺失疫苗免疫的豬場，檢測PRV-gE 抗體，若呈陽性，則判定為PRV 野毒感染，即病原陽性。試驗操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.2 血清學(xué)檢測 所有采集的血清樣本，利用ELISA 方法檢測血清中CSFV、PRRSV、PRV-gB抗體，參照各試劑盒說明書進(jìn)行操作及判定標(biāo)準(zhǔn)。本調(diào)查未進(jìn)行PPV、PCV2 免疫抗體檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原學(xué)監(jiān)測

2.1.1 不同年份感染情況 2015—2019年，5個原種豬場均未檢測到CSFV 核酸陽性，部分或全部豬場檢測到PRRSV、HP-PRRSV、PRV、PCV2、PPV 核酸陽性（表1），個體陽性率分別為2.1%、1.3%、9.5%、22.1%、28.9%（表2）。不同年份的病原感染情況存在一定差異，其中PRRSV 與HP-PRRSV 核酸陽性率整體呈下降趨勢，而PRV、PCV2、PPV 整體呈波動狀上升趨勢，且PCV2 和PPV 污染面廣，感染較嚴(yán)重。

表1 不同年份病原學(xué)陽性場統(tǒng)計結(jié)果

表2 不同年份病原學(xué)陽性率統(tǒng)計 %

2.1.2 不同病原感染情況 由表2 可見：5個種豬場連續(xù)5年未檢測到CSFV 核酸陽性，說明CSF基本達(dá)到了免疫無疫狀況。PRRSV 和HP-PRRSV感染反復(fù)出現(xiàn)，2017年和2019年核酸檢測均為陰性，其他年份均檢測到陽性。PRV 感染率呈波動狀變化，2015、2016 和2018年核酸陽性率在2.5%以下，而2017 和2019年核酸陽性率陡增至20%以上。PCV2 和PPV 核酸陽性率居高不下，在14.5%～41.0%之間波動。

2.1.3 不同豬場感染情況 5個原種豬場連續(xù)5年的病原學(xué)檢測結(jié)果（表3）顯示：A 場PRRSV 核酸和PRV-gE 抗體連續(xù)5年保持陰性，HP-PRRSV 偶有檢出，PCV2 和PPV 陽性率在0～32.5%之間波動；B 場病原陽性率整體較低，但個別年份高發(fā)，如2019年P(guān)RV-gE 陽性達(dá)到50.0%，PCV2陽性率達(dá)到52.5%，2016年P(guān)PV陽性率高達(dá)82.5%；C 場PRRSV 陽性率較低，但PRV、PCV2、PPV 核酸陽性率普遍較高；D 場PRRSV 連續(xù)5年檢測為陰性，PRV-gE 在2017 和2019年突然轉(zhuǎn)陽，陽性率在50%以上，PCV2 和PPV 陽性率高低起伏，2019年P(guān)PV 陽性率高達(dá)95.0%；E 場PRRSV 和PRV 連續(xù)5年檢測均為陰性，而PCV2 和PPV 陽性率在10.0%～57.5%之間波動。

表3 5個原種豬場連續(xù)5年的病原學(xué)陽性率統(tǒng)計 %

2.2 血清學(xué)監(jiān)測

對所有采集的1 000 份血清樣品進(jìn)行了CSFV、PRRSV、PRV-gB 免疫抗體檢測。結(jié)果（表4）顯示，CSFV、PRRSV、PRV-gB 抗體合格率分別為96.9%、99.7%、98.7%，均達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求的70%以上的標(biāo)準(zhǔn)，表明各豬場3種病原的抗體保護(hù)水平良好。

表4 不同年份原種豬場3種病原的免疫抗體陽性率統(tǒng)計 %

3 討論

3.1 CSF

近年來，我國實施CSF 強(qiáng)制免疫等一系列綜合防控措施，使得該病得到有效控制，CSF 凈化工作正逐步推進(jìn)。2011—2018年，王琴等[4]開展CSF 病原學(xué)監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)健康豬群帶毒率從9.26%下降到0.70%，全國發(fā)病率和死亡率一直處于下降狀態(tài)，表明我國CSFV C 株疫苗對我國現(xiàn)有的流行毒株提供了有效保護(hù)。本次監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，2015—2019年湖南省5個種豬場CSF 病原學(xué)檢測均為陰性，且每年免疫抗體水平均在96.0%以上，基本達(dá)到了免疫無疫狀態(tài)，可適時開展CSFV 凈化根除。

3.2 PRRS

我國目前對PRRS 的防控主要采取疫苗免疫。但由于PRRSV 變異快，不同地區(qū)流行毒株存在一定差異，防控效果不理想，病毒感染長期存在。宋玉慧[1]對2013—2016年河南省規(guī)模豬場采集樣本進(jìn)行病原學(xué)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)PRRSV 陽性率為20.6%；王倩等[5]對2015—2018年安徽省定點(diǎn)豬場主要疫病病原進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)PRRSV 平均陽性率為26.9%。本監(jiān)測從2015年開始對湖南省5個原種豬場開展連續(xù)5年的病原檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PRRSV與HP-PRRSV 陽性率分別為2.1%和1.3%，遠(yuǎn)低于前面二者的報道，表明湖南省種豬場通過免疫監(jiān)測等綜合控制措施，使PRRS 得到了有效控制。但本監(jiān)測也發(fā)現(xiàn)，不同年份均有豬場出現(xiàn)PRRS 疫情反彈現(xiàn)象，需引起重視。吳佳俊等[3]對我國種豬場主要垂直傳播疫病進(jìn)行動態(tài)監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，2015年P(guān)RRS 疫情出現(xiàn)了反彈，場陽性率與個體陽性率出現(xiàn)了大幅上升。

3.3 PR

PR 是我國目前豬群疫病優(yōu)先凈化的病種之一，且已取得了一定的防控成效。本次監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，湖南省原種豬場中，PRV-gE 抗體轉(zhuǎn)陽與野毒感染情況仍然存在。林琳等[6]對福建省不同規(guī)模豬場PRV 野毒感染調(diào)查發(fā)現(xiàn)，種豬場PRV-gE個體陽性率為30.2%；占松鶴等[7]對安徽省規(guī)模化種豬場開展PRV 血清學(xué)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)PRV-gE個體陽性率為18.9%；朱小甫等[8]對2013—2017年陜西省PRV的分子流行病學(xué)調(diào)查顯示，發(fā)病豬群中PRV 野毒感染率達(dá)到了72.3%。本監(jiān)測發(fā)現(xiàn)的PRV-gE個體陽性率為9.5%，遠(yuǎn)低于上述報道，但仍有3個種豬場反復(fù)出現(xiàn)gE 抗體陽性，部分場陽性率高達(dá)50%以上，因此需要加強(qiáng)生物安全控制，防止野毒感染。

3.4 PCVD

PCVD 已經(jīng)成為危害我國養(yǎng)豬業(yè)的主要疫病之一。其病原PCV2 污染面廣、感染率高，引起的危害最大。近年來，PCV3 在我國豬群中也開始出現(xiàn)，因而增加了該類疫病的防控難度，已引起了學(xué)者的廣泛關(guān)注。何長生等[9]對安徽省部分豬場健康豬群豬圓環(huán)病毒感染情況進(jìn)行調(diào)查發(fā)現(xiàn)，PCV2場陽性率與個體陽性率分別為91.7%和67.4%；蔣新華等[10]對2013—2017年江西省10個地區(qū)進(jìn)行PCV2 檢測，發(fā)現(xiàn)個體陽性率為56.4%。本次監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，湖南省5個種豬場普遍存在PCV2 感染，個體陽性率為22.1%，與其他地區(qū)相比雖然個體陽性率略低，但感染也很普遍，應(yīng)在生產(chǎn)過程中重視該病防控。

3.5 PPI

引起PPI 的病原PPV 主要感染初產(chǎn)母豬，引起流產(chǎn)、產(chǎn)死胎等繁殖障礙，但母豬本身無明顯臨診癥狀，容易被忽視。目前國內(nèi)豬場PPV 感染比較嚴(yán)重，污染面廣。孫泉云等[11]對2015—2017年上海市規(guī)模豬場開展PPV 病原監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)總陽性率為8.7%；吳佳俊等[3]對我國種豬場開展動態(tài)監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，PPV 場陽性率與個體陽性率分別為95.6%和33.6%。本監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，湖南省種豬場PPV 感染普遍，個體陽性率為28.9%，與全國檢測數(shù)據(jù)基本持平，但高于上海市規(guī)模豬場數(shù)據(jù)，表明種豬場的PPV 感染較嚴(yán)重，需加強(qiáng)控制與凈化。

4 結(jié)論

對湖南省5個大型原種豬場連續(xù)5年的監(jiān)測表明：各種豬場的CSF 得到了有效控制，基本達(dá)到了免疫凈化狀態(tài)。而部分原種豬場仍存在不同程度 的PRRSV、HP-PRRSV、PRV、PCV2、PPV 感染，其中PRRSV、HP-PRRSV、PRV 感染反復(fù)出現(xiàn)，PCV2 與PPV 感染率居高不下，病毒污染面較廣。因此，需通過免疫、監(jiān)測、生物安全控制等綜合措施，加強(qiáng)這些疫病的控制與凈化。