劉宇超 陳雪 樊磊

【摘 要】目的：探討益生性唾液乳酸桿菌的篩選及其抑菌物質(zhì)特征。方法：經(jīng)口腔檢查符合《口腔健康調(diào)查基本方法》身體健康且無口腔疾病的20例18～30歲健康體檢者作為采樣對象，采用垂吐法采集唾液，經(jīng)培養(yǎng)、16srDNA基因測序鑒定篩選出與嗜酸乳桿菌菌種基因相似度≥97%以上的，且抑菌效果最強(qiáng)菌株作為益生性唾液乳酸桿菌，同時測定其不同濃度下的抑菌效果。結(jié)果：本次研究共篩選出5株益生性唾液乳酸桿菌，分別編號為W1、W2、W3、W4、W5，與標(biāo)準(zhǔn)菌種相似度分別為98%、99%、97%、98%、98%。益生性唾液乳桿菌培養(yǎng)原液濃縮2倍（6.16±1.03mm）、3倍（6.98±0.97mm）和4倍（8.56±1.13mm）后抑菌圈直徑均顯著高于原液（4.53±1.42mm），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）。結(jié)論：唾液中存在的益生性唾液乳酸桿菌具有抑制變形鏈球菌作用，且抑菌作用隨濃度增加而增加。

【關(guān)鍵詞】益生性唾液乳酸桿菌;篩選;抑菌物質(zhì);分析;研究

近年來，臨床領(lǐng)域關(guān)于益生菌的研究逐漸深入，而益生菌也成為臨床治療的重要藥物或輔助藥物。目前，臨床研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)口腔內(nèi)益生菌對于口腔內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的維持具有重要意義，但是仍需進(jìn)一步分析不同益生菌的具體抑菌（病原菌）效果[1]。為此，本次研究采集身體健康且無口腔疾病的20例18～30歲健康體檢者的唾液，進(jìn)行了益生性唾液乳酸桿菌的篩選，并對其抑菌情況進(jìn)行了分析，現(xiàn)總結(jié)報道如下。

1 材料與方法

1.1材料與試劑

選擇微生態(tài)技術(shù)中心保存的嗜酸乳桿菌ATCC4356;革蘭染色試劑盒（索萊寶）、細(xì)菌DNA提取試劑盒（TaKaRa ）、培養(yǎng)基LBS培養(yǎng)固體基、BHI培養(yǎng)基。

1.2方法

1.2.1篩選與培養(yǎng)

經(jīng)口腔檢查符合《口腔健康調(diào)查基本方法》身體健康且無口腔疾病的20例18～30歲健康體檢者作為采樣對象，采用垂吐法采集唾液，離心后取下層懸液種植于LBS固體培養(yǎng)基

靜置培養(yǎng)24h（37℃） [2]。隨后，選取乳白色菌落進(jìn)行劃線培養(yǎng)并重新編號，擴(kuò)增培養(yǎng)24 h（37℃）后，進(jìn)行常規(guī)處理、基因測序，對比測序結(jié)果。隨后以變形鏈球菌為指示菌，選出具有抑菌作用的乳酸桿菌，使用BHI雙層瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行抑菌，24 h后測量抑菌圈直徑。16srDNA基因測序鑒定后，與嗜酸乳桿菌ATCC4356基因相似度≥97%以上的，且抑菌效果最強(qiáng)菌株作為后續(xù)實驗菌，分別為其編號。

1.2.3抑菌濃度測定

實驗菌采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，分別進(jìn)行2倍、3倍、4倍的濃縮，BHI雙層瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行抑菌實驗;指示菌：變形鏈球菌。

1.3觀察指標(biāo)

統(tǒng)計本次研究篩選出的益生性唾液乳酸桿菌菌株，同時其不同濃度下的抑菌能力。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

本次研究采用SPSS20. 0 統(tǒng)計學(xué)軟件分析所有數(shù)據(jù)，計量資料采用t檢驗;采用χ2檢驗計數(shù)資料，P<0.05 認(rèn)為差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1篩選結(jié)果

本次研究共篩選出5株益生性唾液乳酸桿菌，分別編號為W1、W2、W3、W4、W5，與標(biāo)準(zhǔn)菌種相似度分別為98%、99%、97%、98%、98%。

2.2不同濃度益生性唾液乳桿菌抑菌效果比較

益生性唾液乳桿菌培養(yǎng)原液濃縮2倍、3倍和4倍后抑菌圈直徑均顯著高于原液，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05），見表1。

3 討論

益生菌是一類對宿主有益的活體微生物，其在人體內(nèi)發(fā)揮了重要的生物學(xué)效應(yīng)，其生物作用研究具有深刻的臨床價值[4-5]。乳酸桿菌是一種人體內(nèi)分布廣泛的益生菌，臨床研究也相對較多，目前臨床研究也發(fā)現(xiàn)健康人群口腔中也可分離出該菌種，抑菌特性顯著，但有待深入分析與研究。為此，本次研究對身體健康且無口腔疾病的受試者進(jìn)行益生性唾液乳酸桿菌篩選，共篩選出了5株唾液乳酸桿菌，具有抑制變形鏈球菌的作用。但是，目前益生性唾液乳酸桿菌抑菌物質(zhì)的特征研究相對較少;本次研究發(fā)現(xiàn) ，不同濃度的益生性唾液乳酸桿菌抑菌能力存在較大差異，益生性唾液乳桿菌培養(yǎng)原液濃縮2倍（6.16±1.03mm）、3倍（6.98±0.97mm）和4倍（8.56±1.13mm）后抑菌圈直徑均顯著高于原液（4.53±1.42mm），培養(yǎng)液濃度與抑菌呈正比，可知益生性唾液乳酸桿菌濃度越高，抑菌濃度越強(qiáng)。

綜上所述，唾液中存在的益生性唾液乳酸桿菌具有抑制變形鏈球菌作用，且抑菌作用隨濃度增加而增加。

參考文獻(xiàn)

[1] 宋昊芮，李彥，王樂，姚一帆.乳酸桿菌產(chǎn)胞外多糖培養(yǎng)條件的優(yōu)化[J].吉首大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2019，40（05）：59-62.

[2] 黃佳明，姜寧，張愛忠.乳酸菌作為基因工程菌的研究進(jìn)展[J].中國飼料，2019（13）：16-20.

[3] 黃思妺. 口腔乳酸桿菌的分離鑒定及其益生功能的研究[D].軍事科學(xué)院，2018：20-21.

[4] 薛龍，王立鶴，聶紅兵，等.唾液乳酸桿菌w22a和種植體周圍炎致病菌體外作用的初步研究[J].口腔醫(yī)學(xué)研究，2016，32（10）：1042-1046.

[5] 王立鶴，薛龍，聶紅兵，等.益生性唾液乳酸桿菌的篩選及其抑菌物質(zhì)的初步探究[J].口腔醫(yī)學(xué)研究，2016，32（08）：819-822.