李汝卓，潘韜文，李 斌，李 坤*

(1.遼寧師范大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，遼寧 大連 116029；2.大連醫(yī)科大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合研究院，遼寧 大連 116044；3.大連醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，遼寧 大連 116044)

瘀血痹片是傳統(tǒng)中藥復(fù)方，由乳香、沒藥、紅花、威靈仙、川牛膝、香附、姜黃、當(dāng)歸、丹參、川芎和黃芪11味中藥材構(gòu)成，主治瘀血阻絡(luò)所致的痹癥[1]。復(fù)方中每種藥材均具有廣泛的藥理活性，其中威靈仙、香附具有良好的抗炎活性[2-3]。目前，國(guó)內(nèi)并無對(duì)于瘀血痹片抗炎作用的相關(guān)報(bào)道，因此本實(shí)驗(yàn)以瘀血痹片為主要研究對(duì)象，通過建立二甲苯耳腫脹小鼠模型及冰醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性實(shí)驗(yàn)，研究瘀血痹片的抗炎活性；通過扭體法和熱板法研究瘀血痹片鎮(zhèn)痛作用。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與材料

SPF級(jí)昆明種小鼠，雄性和雌性，體重(20±2)g，均由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)所使用動(dòng)物嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物保護(hù)指導(dǎo)原則進(jìn)行，所使用動(dòng)物征得大連醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)同意。

瘀血痹片(本溪國(guó)藥中成藥工程技術(shù)研究中心有限公司)，羧甲基纖維素鈉(天津市大茂化學(xué)試劑廠)，地塞米松(大連凱美化工工程有限公司)，二甲苯(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)，冰醋酸(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)，灌胃針(大連凱美化工工程有限公司)，7 mm打孔器(大連凱美化工工程有限公司)。

1.2 給藥設(shè)計(jì)

瘀血痹片成人臨床推薦用量為一次5片，一日3次。根據(jù)人和動(dòng)物間按體表面積等效劑量換算，動(dòng)物的劑量=等劑量比值×(藥量/成人標(biāo)準(zhǔn)體重)，設(shè)置成人標(biāo)準(zhǔn)體重為70 kg。根據(jù)推薦劑量，設(shè)定本實(shí)驗(yàn)的低劑量組為正常給藥劑量，中劑量組為正常給藥劑量的2倍，高劑量組為正常給藥劑量的3倍。即低劑量1.25 g/kg，中劑量2.50 g/kg，高劑量3.75 g/kg。

1.3 二甲苯致小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)

40只雄性SPF級(jí)昆明小鼠隨機(jī)分為5組(8只/組)，分別為陰性對(duì)照組(模型組，給予等劑量的0.5% CMC-Na溶液),陽性對(duì)照組(地塞米松組，2 mg/kg),瘀血痹片低、中、高劑量組。各組小鼠每日上午固定時(shí)間灌胃給藥1次，連續(xù)給藥7 d。末次給藥后30 min，將30 μL二甲苯涂于小鼠右耳廓兩面，左耳不涂作為對(duì)照。1 h后小鼠頸椎脫臼處死，剪下小鼠雙耳廓，用直徑7 mm的打孔器在兩耳對(duì)稱位置取下左右耳片，稱重。以左右耳片重量差作為耳廓腫脹度表示藥物抗炎效應(yīng)，計(jì)算抑制率[4]。

1.4 冰醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加實(shí)驗(yàn)

40只雄性SPF級(jí)昆明小鼠同上隨機(jī)分為5組(8只/組)，各組小鼠每日上午固定時(shí)間灌胃給藥1次，連續(xù)給藥7 d。末次給藥后1.5 h，尾靜脈注射0.5%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液(10 μL/g)，10 min后腹腔注射0.6%冰醋酸生理鹽水溶液(10 μL/g)，20 min后脫頸椎處死。每只腹腔注射5 mL生理鹽水，并輕揉腹部3 min，然后從腹腔內(nèi)吸出3 mL左右腹腔沖洗液(沖洗液如被血液污染，則棄去不用)，1000 r/min離心5 min，用分光光度計(jì)于590 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度(A)值[5]。

1.5 醋酸致小鼠扭體反應(yīng)實(shí)驗(yàn)

40只雄性SPF級(jí)昆明小鼠同上隨機(jī)分為5組(8只/組)，各組小鼠每日上午固定時(shí)間灌胃給藥1次，連續(xù)給藥7 d。末次給藥后30 min，每只小鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液10 mL/kg，隨即將小鼠單只放入塑料飼養(yǎng)盒中，觀察注射醋酸后小鼠第一次出現(xiàn)扭體的時(shí)間(潛伏期)和15 min內(nèi)的扭體次數(shù)[6]。

1.6 熱板法實(shí)驗(yàn)

40只雄性SPF級(jí)昆明小鼠同上隨機(jī)分為5組(8只/組)，各組小鼠每日上午固定時(shí)間灌胃給藥1次，連續(xù)給藥3 d。分別于末次給藥后30、60、120 min觀測(cè)藥物對(duì)小鼠熱板痛閾的影響[7]。

2 結(jié) 果

2.1 瘀血痹片對(duì)小鼠耳腫脹度的影響及抑制率

從表1可以看出，與模型組相比，瘀血痹片低、中、高劑量組都有抑制炎癥的作用(與模型組相比，P<0.05)，以瘀血痹片中、高劑量藥效為好。

表 1 各組小鼠耳腫脹度及抑制率(n=8)

與模型組比較:*:P<0.05,**:P<0.01

2.2 瘀血痹片對(duì)小鼠腹腔沖洗液吸光度值的影響

結(jié)果顯示，空白組，瘀血痹片低、中、高劑量組及地塞米松組吸光度值分別為0.147±0.011、0.114±0.025、0.095±0.021、0.085±0.029和0.068±0.016。與空白組相比,瘀血痹片低、中、高劑量組均表現(xiàn)出抑制毛細(xì)血管通透性的作用，且具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，并呈量效關(guān)系。

2.3 瘀血痹片對(duì)小鼠扭體潛伏期及次數(shù)的影響

扭體法通過腹腔注射醋酸引起腹部產(chǎn)生持久性的急痛，使小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)，表現(xiàn)出腹部向內(nèi)凹、臀部不自然歪扭同時(shí)后肢伸張，呈現(xiàn)出極為特殊的姿勢(shì)。從表2中可以看出，給藥組與模型組相比潛伏期時(shí)間均有明顯增加，15 min內(nèi)扭體次數(shù)明顯減少，均具有抑制疼痛的作用，瘀血痹片中、高劑量組兩組抑制率較高，具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

表 2 各組小鼠潛伏期、15 min內(nèi)扭體次數(shù)(n=8)

與模型組比較:*:P<0.05,**:P<0.01

2.4 瘀血痹片對(duì)小鼠給藥后不同時(shí)間痛閾的影響

熱板法借助外界熱刺激，以物理致痛的方式評(píng)價(jià)藥物的鎮(zhèn)痛效果。實(shí)驗(yàn)中小鼠會(huì)表現(xiàn)出不安、舉前足、舔后足等應(yīng)激反應(yīng)，本實(shí)驗(yàn)以舔后足為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。從表3中可以看出，隨著時(shí)間的增加，各給藥組小鼠的痛域值呈上升趨勢(shì)，且具量效關(guān)系。以給藥后30～60 min呈現(xiàn)最大耐受力，具顯著性差異。

表 3 各組小鼠不同時(shí)間痛域值

與空白組比較，*:P<0.05

3 討 論

瘀血痹片中包含多種中藥材，可對(duì)風(fēng)濕類疾病進(jìn)行全面治療，通過消炎、鎮(zhèn)痛達(dá)到標(biāo)本兼治的療效，即可在治病的同時(shí)緩解病患的不適感[8]。通過實(shí)驗(yàn)表明，瘀血痹片可以有效抑制二甲苯造成的小鼠耳腫脹，降低毛細(xì)血管通透性，具有良好的抗炎活性；鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)結(jié)果則表明，無論是化學(xué)刺激帶來的內(nèi)部疼痛還是物理刺激帶來的外部疼痛，瘀血痹片都能有效地進(jìn)行緩解。隨著科技的不斷進(jìn)步，傳統(tǒng)中藥的價(jià)值逐漸被發(fā)掘。通過與現(xiàn)代分析手段相結(jié)合，瘀血痹片良好的抗炎、鎮(zhèn)痛效果被證實(shí)，為疾病的治療提供理論研究依據(jù)。且在現(xiàn)代科技的支持下，研究復(fù)方中藥必將更具發(fā)展空間。