1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110；2.內(nèi)蒙古煤炭生態(tài)環(huán)境研究院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110

蒙藥材阿給，即菊科蒿屬多年生小半灌木冷蒿(ArtemisiafrigidaWilld.)，又名小白蒿、菟毛蒿，在中國(guó)集中分布在內(nèi)蒙古[1]。阿給全草入蒙藥，味苦，性涼、澀、燥、有止血、祛風(fēng)、消腫的功效，主治各種出血、關(guān)節(jié)腫脹、腎熱、月經(jīng)不調(diào)、瘡癰[2]。冷蒿也可全草入中藥，主要治療治黃疸型肝炎、膽囊炎、小便不利、皮膚瘙癢、濕疹、蛔蟲(chóng)病和蟯蟲(chóng)病。然而，文獻(xiàn)中沒(méi)有記載阿給的鎮(zhèn)痛作用，其機(jī)制尚不清楚，為更科學(xué)地開(kāi)發(fā)冷蒿的藥用價(jià)值，本實(shí)驗(yàn)對(duì)阿給水提取濃縮后，得到阿給提取物，然后采用乙酸致小鼠扭體反應(yīng)和電熱板法急性疼痛模型對(duì)提取物進(jìn)行鎮(zhèn)痛作用的研究。

1 材料

1.1 試驗(yàn)藥物、試劑 蒙藥材阿給采自內(nèi)蒙古烏蘭察布市四子王旗(地理位置為41°52′39″N，111°07′25″E，海拔1370m)。地上部分采回后于室外曬干，室溫下貯藏備用。

阿司匹林片(石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司，批號(hào):017150275)。乙酸為分析純。

1.2 動(dòng)物 健康昆明種小白鼠，體重(18±2)g，由內(nèi)蒙古大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，清潔級(jí)，許可證號(hào)：SCXK(蒙)2002-0001。

1.3 儀器 電子天平(精密科學(xué)儀器有限公司)，智能熱板儀(成都泰盟軟件公司)。

2 試驗(yàn)方法

2.1 阿給提取物的制備 將冷蒿的地上部分粉碎成粗粉。稱取粗粉10.0g，置于250mL量瓶中，加入100mL蒸餾水，煎煮1.5h，共2次，趁熱抽濾并用蒸餾水清洗濾渣及容器2～3次，合并濾液，減壓濃縮至約5mL，用蒸餾水轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中并定容至刻度，得1∶1藥液，濃度為1g生藥/mL(即100g/kg)的阿給水提物供試品。

2.2 小鼠乙酸扭體實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)小鼠50只，隨機(jī)分為5組，分別為模型對(duì)照組、阿司匹林組(0.04g/kg)、阿給水提取物高、中、低劑量組(生藥60.0、30.0、15.0g/kg)。灌胃給藥1次/d，連續(xù)給藥7 d，末次給藥后30 min，腹腔注射0.6%冰乙酸溶液(現(xiàn)配現(xiàn)用)0.2 mL/只致痛，觀察并記錄各組小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的潛伏期及15 min 內(nèi)各小鼠扭體(扭體表現(xiàn)為腹部收縮內(nèi)凹，同時(shí)伴有軀干扭曲、臀部抬高和后肢伸展等特征)的次數(shù)，計(jì)算鎮(zhèn)痛率。

鎮(zhèn)痛率(%)=(模型組平均扭體次數(shù)-給藥組平均扭體次數(shù))/模型組平均扭體次數(shù)×100%

2.3 小鼠電熱板法實(shí)驗(yàn) 用智能熱板儀[(溫度55±0.5)℃]篩選兩次痛閥平均值大于5s而低于30s的雌性小鼠50只，分組、給藥同2.2，每天灌胃給藥1次，連續(xù)7次。于末次給藥后第15、30、60、90min記錄其被放入熱板至出現(xiàn)舔后足的反應(yīng)時(shí)間(s)作為痛閾值，觀察各組間藥物對(duì)動(dòng)物痛閾值的影響。

3 結(jié)果

3.1 阿給水提取物對(duì)乙酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響 腹腔注射乙酸后，小鼠呈現(xiàn)較明顯的扭體反應(yīng)，阿司匹林組痛組與模型對(duì)照組比較，扭體潛伏期延長(zhǎng)、扭體次數(shù)降低，差異顯著(P<0.01)；阿給水提取物組對(duì)扭體潛伏期也體現(xiàn)出良好的延長(zhǎng)作用，扭體次數(shù)明顯下降，且具有一定的量效關(guān)系，與模型對(duì)照組比較小鼠15 min內(nèi)扭體次數(shù)差異顯著(P<0.05、P<0.01)；扭體抑制率高、中劑量組較高。見(jiàn)表1。

組別劑量/g/kg扭體潛伏期/s扭體次數(shù)抑制率/%空白對(duì)照組—0.00.0—模型對(duì)照組—9.3±0.539.7±0.5—阿司匹林組0.049.5±0.2**7.3±0.5**81.4阿給水提取物60.07.0±0.3**14.5±0.7**63.430.05.2±0.4**20.6±0.3**48.115.03.2±0.7*28.7±0.6*27.7

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

3.2 阿給水提取物對(duì)小鼠電熱板刺激的鎮(zhèn)痛作用 給藥前，各組小鼠的痛閾值差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與正常對(duì)照組比較，陽(yáng)性藥物阿司匹林組給藥后能明顯延長(zhǎng)小鼠的痛閾值，差異顯著(P<0.01)。阿給水提取物低、中、高劑量組在給藥后均能不同程度地延長(zhǎng)小鼠對(duì)熱板刺激的疼痛反應(yīng)潛伏期閾值。給藥15、30 min后，各組小鼠痛閾值均明顯延長(zhǎng)，且高、中劑量阿給水提取物作用更明顯(P<0.01)；給藥60、90 min后，高、中劑量阿給水提取物能顯著延長(zhǎng)小鼠的痛閾值(P<0.05)。見(jiàn)表2。

組別劑量/g/kg痛閾值(sec)給藥前給藥后15min給藥后30min給藥后60min給藥后90min空白對(duì)照組—17.3±0.517.8±0.516.6±0.218.1±0.317.8±0.1阿司匹林組0.0417.8±0.221.1±0.3**22.8±0.6**21.0±0.4**19.6±0.2**阿給水提取物60.017.0±0.322.0±0.5**23.4±0.2**22.1±0.1**18.7±0.2**30.016.8±0.420.4±0.3**20.2±0.7**21.1±0.4**18.9±0.5*15.017.1±0.718.6±0.7*18.8±0.1*17.5±0.317.3±0.4

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

4 討論

疼痛是機(jī)體受到環(huán)境刺激后發(fā)生的一種病理、生理過(guò)程，其既是一種防御性反應(yīng)也是多種疾病的表現(xiàn)癥狀之一。阿司匹林是經(jīng)典的非甾體抗炎藥，也是目前世界上應(yīng)用最廣泛的鎮(zhèn)痛藥，通常認(rèn)為它是一種外周鎮(zhèn)痛藥[3-4]，也可作用于下視丘而產(chǎn)生中樞鎮(zhèn)痛作用[5]，故在考察阿給水提取物的鎮(zhèn)痛作用時(shí)以其作為陽(yáng)性對(duì)照藥。

本研究在鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)中選用物理刺激的熱板法和化學(xué)刺激的扭體法。乙酸扭體實(shí)驗(yàn)是經(jīng)典的鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，是篩選弱鎮(zhèn)痛藥的一種敏感、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好的方法，是評(píng)價(jià)和篩選鎮(zhèn)痛藥的常用模型[6]。小鼠在乙酸刺激下，腹痛過(guò)程扭體明顯，容易觀察，從實(shí)驗(yàn)計(jì)算所得抑制率顯示鎮(zhèn)痛作用明顯，阿給水提取物低、中、高3 種劑量均表明阿給水提取物良好的鎮(zhèn)痛效果。熱板法致痛是由于熱刺激足部的感覺(jué)神經(jīng)末梢而使機(jī)體產(chǎn)生痛覺(jué)，類似于急性銳痛[7]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 阿給水提取物減少扭體反應(yīng)次數(shù)，能延長(zhǎng)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的潛伏期，阿給水提取物低、中、高劑量組在給藥后均能不同程度地延長(zhǎng)小鼠對(duì)熱板刺激的痛閾值，說(shuō)明其具有良好的鎮(zhèn)痛作用，而其更深入的鎮(zhèn)痛機(jī)理有待進(jìn)一步研究。