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        牛黃解毒片中甘草酸含量的測(cè)定研究

        2020-06-20 09:34:22
        關(guān)鍵詞:解毒片牛黃甘草酸

        毛 新

        (吉林省藥品檢驗(yàn)所化學(xué)室,吉林 長(zhǎng)春 130033)

        牛黃解毒片具有良好的清熱解毒功效,被廣泛應(yīng)用于治療咽喉腫痛、目赤腫痛、牙齦腫痛、口舌生瘡等疾病[1]。但是由于生產(chǎn)廠家眾多,也沒有形成更準(zhǔn)確完善的藥品質(zhì)量監(jiān)控標(biāo)準(zhǔn)。其中甘草有補(bǔ)脾益氣、清熱解毒、調(diào)和諸藥的功效,而甘草酸是其主要的活性成分之一。測(cè)定甘草酸的含量可作為評(píng)價(jià)甘草品質(zhì)和質(zhì)量控制的依據(jù)。本次研究中采用HPLC測(cè)定牛黃解毒片中的甘草酸含量,現(xiàn)報(bào)道如下。

        1 儀器與試藥

        1.1 儀器

        美國(guó)沃特士的Waters 2695高效液相色譜儀、2998檢測(cè)器以及Empower色譜數(shù)據(jù)工作站,北京賽多利斯的Sartorius BP211D電子天平,USC-7O2超聲波清洗機(jī)。

        1.2 試藥

        牛黃解毒片由太極集團(tuán)四川綿陽制藥有限公司提供,批號(hào):20180325、20180721、20180916。甘草酸銨對(duì)照品由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供,批號(hào):110731—201813。醋酸銨和冰醋酸為分析純,甲醇為色譜純,水為超純水。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 色譜條件

        選擇Kromasil Eternity 5-C18(4.6 mm×250 mm×5 μm)色譜柱,流動(dòng)相選擇63:37的甲醇-磷酸水溶液,流速為1 mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)250 nm,柱溫設(shè)定30℃。

        2.2 溶液制備

        2.2.1 對(duì)照品溶液制備

        精密稱取11.76 mg的甘草酸銨對(duì)照品加入50 mL量瓶。用67:33:1的甲醇-醋酸銨溶液-冰醋酸溶解進(jìn)行溶解對(duì)照品并稀釋至刻度,搖勻,即得對(duì)照品儲(chǔ)備液(每1 mL儲(chǔ)備液含甘草酸0.2145 mg)。

        2.2.2 供試品溶液制備

        取牛黃解毒片樣品10片,除去包衣后研碎。稱取1 g樣品,加入50 mL量瓶中,并加入同樣溶劑進(jìn)行溶解。采用超聲處理30 min后放置3 h,再加入溶劑進(jìn)行定容。離心過濾后即得供試品溶液。

        2.2.3 陰性對(duì)照溶液制備

        按牛黃解毒片的處方比例精密稱取除了甘草以外的藥材,并按正常制法制成牛黃解毒片的陰性對(duì)照樣品,并按2.2.2中的方法制成陰性對(duì)照溶液。

        2.3 線性關(guān)系考察

        分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5、1、2、4、6、8 mL加至10 ml量瓶中,加入溶劑稀釋至刻度并搖勻。分別取樣20 μL注入色譜儀,按照2.1中色譜條件測(cè)定甘草酸。以峰面積為縱坐標(biāo),以濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線經(jīng)計(jì)算甘草酸的線性回歸方程為Y=1780876.92X-96445.61,在0.0102~0.1665 mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.99996)。

        2.4 專屬性考察

        分別吸取20 μL的對(duì)照品溶液、供試品溶液以及陰性樣品溶液,以同樣色譜條件進(jìn)行進(jìn)樣測(cè)定,結(jié)果顯示供試品溶液中的甘草酸主峰分離良好,陰性樣品溶液中在相應(yīng)保留時(shí)間處未見明顯干擾峰,表明陰性樣品無干擾。

        2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

        在供試品溶液制成的0、2、4、6、8、12 h分別精密稱取20 μL加入色譜儀并測(cè)定峰面積。經(jīng)計(jì)算甘草酸峰面積的RSD為1.26%,表明12 h內(nèi)的穩(wěn)定性較好。

        2.6 精密度試驗(yàn)

        精密量取甘草酸對(duì)照品溶液20 μL,在相同色譜條件下進(jìn)行連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次峰面積,經(jīng)計(jì)算得到甘草酸峰面積的RSD為1.19%,表明儀器的精密度良好。

        2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

        精密稱取6份20180721批號(hào)的牛黃解毒片供試品1 g,制備成供試品溶液,在相同色譜條件分別進(jìn)行測(cè)定峰面積。甘草酸峰面積的RSD為1.24%,重復(fù)性良好。

        2.8 加樣回收實(shí)驗(yàn)

        精密稱取6份1 g 20180721批號(hào)的牛黃解毒片供試品,分別加入0.2145 mg的甘草酸對(duì)照品,制備成加樣回收試驗(yàn)的供試品溶液并進(jìn)行加樣測(cè)定,計(jì)算甘草酸回收率,結(jié)果加樣平均回收率為97.62%(RSD=0.96%)。

        2.9 樣品含量測(cè)定

        分別精密稱取1 g三個(gè)不同批號(hào)的牛黃解毒片供試品,制備成供試品溶液各三份,分別進(jìn)樣測(cè)定三批牛黃解毒片供試品中的甘草酸含量,結(jié)果見表1。

        表1 三個(gè)批號(hào)供試品中甘草酸含量

        3 討 論

        牛黃解毒片是常用的清熱解毒制劑。其中含有的甘草是一種補(bǔ)益中草藥,具有補(bǔ)脾益氣,中和藥性的功效。甘草酸是甘草的中藥成分,易溶于熱醇溶液,可采用超聲波處理促進(jìn)其提取。對(duì)于流動(dòng)相的選擇,經(jīng)過考察了甲醇-磷酸水溶液、甲醇-2%醋酸溶液、乙腈-乙酸溶液,發(fā)現(xiàn)甲醇-磷酸水溶液(63:37)的樣本分離效果較佳。本次實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用HPLC法測(cè)定牛黃解毒片中甘草酸含量,結(jié)果顯示線性關(guān)系良好,專屬性佳,且具有較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性,是一種理想的甘草酸測(cè)定和質(zhì)量控制方法。

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