毛 新

（吉林省藥品檢驗(yàn)所化學(xué)室，吉林 長(zhǎng)春 130033）

牛黃解毒片具有良好的清熱解毒功效，被廣泛應(yīng)用于治療咽喉腫痛、目赤腫痛、牙齦腫痛、口舌生瘡等疾病[1]。但是由于生產(chǎn)廠家眾多，也沒有形成更準(zhǔn)確完善的藥品質(zhì)量監(jiān)控標(biāo)準(zhǔn)。其中甘草有補(bǔ)脾益氣、清熱解毒、調(diào)和諸藥的功效，而甘草酸是其主要的活性成分之一。測(cè)定甘草酸的含量可作為評(píng)價(jià)甘草品質(zhì)和質(zhì)量控制的依據(jù)。本次研究中采用HPLC測(cè)定牛黃解毒片中的甘草酸含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

美國(guó)沃特士的Waters 2695高效液相色譜儀、2998檢測(cè)器以及Empower色譜數(shù)據(jù)工作站，北京賽多利斯的Sartorius BP211D電子天平，USC-7O2超聲波清洗機(jī)。

1.2 試藥

牛黃解毒片由太極集團(tuán)四川綿陽制藥有限公司提供，批號(hào)：20180325、20180721、20180916。甘草酸銨對(duì)照品由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，批號(hào)：110731—201813。醋酸銨和冰醋酸為分析純，甲醇為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

選擇Kromasil Eternity 5-C18(4.6 mm×250 mm×5 μm)色譜柱,流動(dòng)相選擇63：37的甲醇-磷酸水溶液，流速為1 mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)250 nm，柱溫設(shè)定30℃。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液制備

精密稱取11.76 mg的甘草酸銨對(duì)照品加入50 mL量瓶。用67：33：1的甲醇-醋酸銨溶液-冰醋酸溶解進(jìn)行溶解對(duì)照品并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品儲(chǔ)備液(每1 mL儲(chǔ)備液含甘草酸0.2145 mg)。

2.2.2 供試品溶液制備

取牛黃解毒片樣品10片，除去包衣后研碎。稱取1 g樣品，加入50 mL量瓶中，并加入同樣溶劑進(jìn)行溶解。采用超聲處理30 min后放置3 h，再加入溶劑進(jìn)行定容。離心過濾后即得供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液制備

按牛黃解毒片的處方比例精密稱取除了甘草以外的藥材，并按正常制法制成牛黃解毒片的陰性對(duì)照樣品，并按2.2.2中的方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.3 線性關(guān)系考察

分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5、1、2、4、6、8 mL加至10 ml量瓶中，加入溶劑稀釋至刻度并搖勻。分別取樣20 μL注入色譜儀，按照2.1中色譜條件測(cè)定甘草酸。以峰面積為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線經(jīng)計(jì)算甘草酸的線性回歸方程為Y=1780876.92X-96445.61，在0.0102～0.1665 mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.99996）。

2.4 專屬性考察

分別吸取20 μL的對(duì)照品溶液、供試品溶液以及陰性樣品溶液，以同樣色譜條件進(jìn)行進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果顯示供試品溶液中的甘草酸主峰分離良好，陰性樣品溶液中在相應(yīng)保留時(shí)間處未見明顯干擾峰，表明陰性樣品無干擾。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

在供試品溶液制成的0、2、4、6、8、12 h分別精密稱取20 μL加入色譜儀并測(cè)定峰面積。經(jīng)計(jì)算甘草酸峰面積的RSD為1.26%，表明12 h內(nèi)的穩(wěn)定性較好。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密量取甘草酸對(duì)照品溶液20 μL，在相同色譜條件下進(jìn)行連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次峰面積，經(jīng)計(jì)算得到甘草酸峰面積的RSD為1.19%，表明儀器的精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取6份20180721批號(hào)的牛黃解毒片供試品1 g，制備成供試品溶液，在相同色譜條件分別進(jìn)行測(cè)定峰面積。甘草酸峰面積的RSD為1.24%，重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收實(shí)驗(yàn)

精密稱取6份1 g 20180721批號(hào)的牛黃解毒片供試品，分別加入0.2145 mg的甘草酸對(duì)照品，制備成加樣回收試驗(yàn)的供試品溶液并進(jìn)行加樣測(cè)定，計(jì)算甘草酸回收率，結(jié)果加樣平均回收率為97.62%(RSD=0.96%）。

2.9 樣品含量測(cè)定

分別精密稱取1 g三個(gè)不同批號(hào)的牛黃解毒片供試品，制備成供試品溶液各三份，分別進(jìn)樣測(cè)定三批牛黃解毒片供試品中的甘草酸含量，結(jié)果見表1。

表1 三個(gè)批號(hào)供試品中甘草酸含量

3 討 論

牛黃解毒片是常用的清熱解毒制劑。其中含有的甘草是一種補(bǔ)益中草藥，具有補(bǔ)脾益氣,中和藥性的功效。甘草酸是甘草的中藥成分，易溶于熱醇溶液，可采用超聲波處理促進(jìn)其提取。對(duì)于流動(dòng)相的選擇，經(jīng)過考察了甲醇-磷酸水溶液、甲醇-2%醋酸溶液、乙腈-乙酸溶液，發(fā)現(xiàn)甲醇-磷酸水溶液（63:37）的樣本分離效果較佳。本次實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用HPLC法測(cè)定牛黃解毒片中甘草酸含量，結(jié)果顯示線性關(guān)系良好，專屬性佳，且具有較好的穩(wěn)定性和重復(fù)性，是一種理想的甘草酸測(cè)定和質(zhì)量控制方法。