冼觀秀，陳 聰，馬燕妮，卜丹霞，黃樹通

湛江中心人民醫(yī)院，廣東 湛江 324000

乙肝是一種由乙型肝炎病毒（HBV）感染所致的傳染病，在全球范圍內(nèi)廣泛流行，我國屬于HBV感染流行較為嚴(yán)重的地區(qū)，有約9 300萬人為慢性HBV感染者，其中約3 000萬人被確診為慢性乙型肝炎（CHB），其中有10%～20%可進(jìn)一步發(fā)展為肝硬化、肝癌等嚴(yán)重疾病，對人類生命健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅［1］。肝纖維化是肝硬化發(fā)生發(fā)展過程的必經(jīng)階段，其發(fā)生機制是一個比較復(fù)雜的病理過程，它與膠原和其他細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）的合成與降解失衡，導(dǎo)致在肝內(nèi)過量沉積有關(guān)［2］。肝活組織病理學(xué)檢查是診斷肝纖維化的金標(biāo)準(zhǔn)，但該檢查屬于有創(chuàng)性檢查，不易在臨床上開展，且隨著近年來對肝纖維化研究的深入，發(fā)現(xiàn)許多細(xì)胞因子參與了肝纖維化的過程，因此細(xì)胞因子成為臨床醫(yī)生們研究的熱點。另外有大量研究表明血清中透明質(zhì)酸（HA）、Ⅲ型前膠原（PC-Ⅲ）、Ⅳ型膠原（Ⅳ-C）和層黏蛋白（LN）均可在一定程度反映患者肝細(xì)胞損害和肝纖維化程度［3］。因此本研究通過比較乙肝肝硬化患者與CHB患者血清中TNF-α、IL-1β的含量差異，分析它們與肝纖維化指標(biāo)的相關(guān)性，為防止CHB進(jìn)一步發(fā)展為肝硬化提供相關(guān)線索。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月—2018年12月湛江中心人民醫(yī)院傳染病和肝膽科收治的45例乙肝肝硬化患者作為研究組，并選取同期45例慢性乙型肝炎患者作為對照組。根據(jù)2015年中華醫(yī)學(xué)會第十七次全國病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會議上發(fā)布的《慢性乙型肝炎防治指南》（2015年版）中關(guān)于肝硬化和CHB的診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷［4］，排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并其他肝炎病毒感染患者；（2）伴有其他類型肝臟疾病者；（3）伴有食管胃底靜脈曲張破裂出血、肝性腦病、肝腎綜合征等嚴(yán)重并發(fā)癥者；（4）由其他原因如肝腎綜合征、酒精性肝炎等引起的肝硬化患者。兩組患者的年齡、性別等一般資料均具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)通過，且所有患者均已簽署知情同意書。

1.2 方法

抽取患者靜脈血5 ml，將血液標(biāo)本于常溫靜置1 h、3 500r/min離心15 min后，分離抽取上清液，-20℃保存待測。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清中TNF-α、IL-1β含量，采用熒光免疫法檢測血清中HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C和LN含量，所有操作均嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t檢驗，相關(guān)性分析采用Pearson線性相關(guān)分析法，多因素分析采用非條件logistic回歸分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者血清中TNF-α、IL-1β含量以及肝纖維化指標(biāo)情況

研究組患者血清中TNF-α、IL-1β的含量明顯高于對照組，肝纖維化指標(biāo)HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C和LN也均明顯高于對照組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），見表1。

2.2 患者血清中TNF-α、IL-1β含量與肝纖維化指標(biāo)的相關(guān)性

Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，患者血清中TNF-α、IL-1β與肝纖維化指標(biāo)（HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C和LN）均呈直線正相關(guān)關(guān)系，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表1 兩組患者血清中TNF-α、IL-1β含量以及肝纖維化指標(biāo)情況（±s）

表1 兩組患者血清中TNF-α、IL-1β含量以及肝纖維化指標(biāo)情況（±s）

組別研究組（n=45）對照組（n=45）肝纖維化指標(biāo)tP TNF-α（pg/ml）68.86±13.83 33.42±10.10 13.88＜0.01 IL-1β（pg/ml）17.87±3.86 7.61±3.15 13.81＜0.01 HA（μg/L）556.92±91.25 301.38±72.34 14.72＜0.01 PC-Ⅲ（μg/L）254.56±45.32 187.52±25.63 8.64＜0.01Ⅳ-C（μg/L）165.87±23.58 103.53±19.85 13.57＜0.01 LN（μg/L）220.94±42.18 164.58±33.65 7.01＜0.01

表2 兩組患者血清中TNF-α、IL-1β含量與肝纖維化指標(biāo)的相關(guān)性

2.3 CHB患者發(fā)生肝硬化有關(guān)因素的非條件logistic回歸分析

以是否發(fā)生肝硬化為因變量，以血清中TNF-α、IL-1β、HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C和LN為自變量，行非條件logistic回歸分析結(jié)果顯示，血清中TNF-α、IL-1β、Ⅳ-C和LN是CHB患者發(fā)生肝硬化的影響因素（P＜0.05），見表3。

表3 CHB患者發(fā)生肝硬化有關(guān)因素的非條件logistic回歸分析

3 討論

CHB是由HBV持續(xù)感染引起的慢性肝臟炎癥性疾病。大量研究表明，HBV其實并不直接殺傷肝細(xì)胞，而是通過免疫應(yīng)答反應(yīng)對肝臟起作用，機體感染HBV后可使肝臟內(nèi)淋巴細(xì)胞增加、浸潤，產(chǎn)生大量的細(xì)胞因子及炎性遞質(zhì)，這些物質(zhì)雖然可在一定程度幫助機體消滅該病毒，但同時又可造成機體自身肝細(xì)胞的變性和壞死，通過長期、反復(fù)的作用，導(dǎo)致肝葉內(nèi)出現(xiàn)纖維隔、再生結(jié)節(jié)，進(jìn)而使肝臟發(fā)生纖維化，若不加以控制，最終可導(dǎo)致肝硬化和（或）肝細(xì)胞癌［5］。CHB患者發(fā)生肝纖維化的過程，涉及許多不同水平的調(diào)節(jié)，其主要病理特征是以膠原蛋白為主的ECM在竇周間隙的大量增生與異常沉積，而HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C和LN是ECM的主要成分［6］。在正常情況下，機體的HA是由星狀細(xì)胞合成并通過血液循環(huán)到達(dá)肝臟，然后最終降解于在血竇內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)，但是若肝臟發(fā)生損傷，可使HA到達(dá)肝臟的數(shù)量增加且降解降低，造成其大量沉積于肝臟內(nèi)。而LN在正常肝組織中含量極少，主要分布于肝膽管、血管壁及淋巴管壁等，是基底膜的重要成分，若肝臟發(fā)生損傷，LN與IV-C合成將增加并共同構(gòu)成肝基底膜而形成纖維間隔，是肝纖維化的發(fā)生和早期肝硬化的診斷重要指標(biāo)［7］。而PC-Ⅲ是Ⅲ型膠原的前體，也是由肝星狀細(xì)胞合成的，在肝纖維化早期PC-Ⅲ水平即開始升高。大量研究表明，乙型肝炎患者血清中HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C和LN含量均可升高，且隨著病情加重其血清中含量升高得更明顯，可反映機體肝纖維化程度［8-9］。本研究結(jié)果顯示，乙肝肝硬化患者血清中HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C和LN含量明顯高于CHB患者，同樣也證實HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C和LN可作為反映肝硬化程度的良好指標(biāo)。

ECM的產(chǎn)生受炎癥因子等在內(nèi)的多種因素的影響，這些因素可促進(jìn)肝纖維化的形成與發(fā)展，而炎癥反復(fù)存在也是CHB患者進(jìn)展為肝硬化甚至HCC的重要因素［10］。TNF-α是主要由淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞合成及分泌的一種分子量為17KD的多肽細(xì)胞因子，它可使肝星狀細(xì)胞及纖維母細(xì)胞增殖加快，并可促進(jìn)膠原的合成以及肝纖維化的發(fā)生，另外它還能夠刺激內(nèi)毒素誘導(dǎo)IL-6、IL-8等炎癥因子的生成，進(jìn)而介導(dǎo)肝細(xì)胞炎性反應(yīng)，造成肝組織微血管損傷，纖維蛋白量增加，肝細(xì)胞壞死，可導(dǎo)致CHB患者肝纖維化程度進(jìn)行性加重并可促使其發(fā)展為肝硬化［11］。而IL－1β可以通過自分泌或旁分泌方式持續(xù)活化肝星狀細(xì)胞和枯否細(xì)胞，而活化的肝星狀細(xì)胞和枯否細(xì)胞又可反過來刺激單核/巨噬細(xì)胞分泌IL－1β，導(dǎo)致IL-1β在體內(nèi)水平不斷增加，這種雙向反饋機制可使肝內(nèi)ECM的產(chǎn)生大量增加，加重肝臟炎癥及纖維化程度［12］。本研究結(jié)果顯示，乙肝肝硬化患者血清中TNF-α、IL-1β均明顯高于CHB患者，且所有患者血清中TNF-α、IL-1β含量與各項肝纖維化指標(biāo)均呈正相關(guān)關(guān)系，說明血清中TNF-α、IL-1β與肝纖維化程度有著緊密聯(lián)系。另外非條件logistic回歸分析結(jié)果也顯示，TNF-α、IL-1β、LN與IV-C是CHB患者發(fā)生肝硬化的影響因素。

綜上所述，與CHB患者相比，乙肝肝硬化患者血清中TNF-α，IL-1β以及肝纖維化指標(biāo)含量均明顯升高，TNF-α，IL-1β與肝纖維化指標(biāo)呈正相關(guān)關(guān)系，是CHB患者發(fā)生肝硬化的影響因素，尋找有效的拮抗TNF-α和IL-1β的途徑，有助于防止CHB進(jìn)一步纖維化而導(dǎo)致肝硬化的發(fā)生。