王辰飛，劉波，張常歡，王建英，蘇明

（溫州醫(yī)科大學(xué)眼視光學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)院，浙江溫州325035）

腎癌（renalcellcarcinoma，RCC）是泌尿系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，而透明細(xì)胞癌是其最常見(jiàn)的病理類(lèi)型。目前，腎透明細(xì)胞癌（clearcellrenalcellcarcinoma，ccRCC）的發(fā)病率正在逐年上升，手術(shù)仍是治療早期RCC的主流方式，而針對(duì)晚期RCC則主要以化療以及靶向治療為主，但其治療效果較差[1]。因此研究預(yù)測(cè)RCC患者預(yù)后的生物標(biāo)志物以及治療的靶點(diǎn)對(duì)于提高RCC患者的生存預(yù)后尤為重要[2]。

長(zhǎng)鏈非編碼RNA（longnon-codingRNA，lncRNA）是一類(lèi)長(zhǎng)度大于200個(gè)核苷酸的RNA，因其缺乏完整的開(kāi)放閱讀框架，所以不具有編碼蛋白質(zhì)的功能[3-4]。研究表明lncRNA在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用[5]。LINC00460是一種位于人類(lèi)13號(hào)染色體上的lncRNA，研究發(fā)現(xiàn)其在多種腫瘤中異常表達(dá)，如在結(jié)直腸癌中LINC00460是明顯過(guò)表達(dá)并且與結(jié)直腸癌患者的預(yù)后更差相關(guān)，其可以通過(guò)作為miR-939-5p的分子海綿來(lái)促進(jìn)LIMK2的表達(dá)，從而促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖、遷移以及侵襲[6]。然而，LINC00460在人ccRCC中的表達(dá)及其作用機(jī)制目前尚未明確。本研究通過(guò)癌癥基因組圖譜（thecancergenomeatlas，TCGA）數(shù)據(jù)庫(kù)分析了LINC00460在ccRCC組織中的表達(dá)情況，并探討其與RCC患者的臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系，為研究RCC的發(fā)病機(jī)制及預(yù)測(cè)預(yù)后提供一定的參考依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 資料來(lái)源 通過(guò)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)（https://portal.gdc.cancer.gov/）收集611例ccRCC及癌旁組織的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)（HTSeq-FPKM）文件（其中癌組織539例，正?；虬┡詫?duì)照組72例）和537例ccRCC患者的臨床信息文件。納入標(biāo)準(zhǔn)：①具備完整的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)；②具備完整的臨床信息（包括隨訪(fǎng)信息以及臨床參數(shù)信息）。我們根據(jù)患者的ID號(hào)進(jìn)行匹配并進(jìn)一步整理了這些臨床信息文件后，共得到530例具有完整臨床信息的ccRCC患者（見(jiàn)表1）。

1.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 采用R語(yǔ)言軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。組間比較采用Wilcoxon檢驗(yàn)或Kruskal-Wallis檢驗(yàn)。采用logistic回歸來(lái)分析LINC00460與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，采用Kaplan-Meier方法計(jì)算生存率，繪制生存曲線(xiàn)。采用Cox回歸模型來(lái)分析獨(dú)立的預(yù)后因素。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 530例ccRCC患者的臨床信息

2 結(jié)果

2.1 LINC00460在ccRCC組織中的表達(dá) 通過(guò)Wilcoxon檢驗(yàn)分析539例ccRCC和72例癌旁組織之間LINC00460的表達(dá)差異，結(jié)果顯示LINC00460在癌組織中表達(dá)較癌旁組織明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

意義（P＜0.05），見(jiàn)圖1A。進(jìn)一步分析配對(duì)的72例癌組織和癌旁組織中LINC00460的表達(dá)，結(jié)果顯示LINC00460在癌組織中表達(dá)較癌旁組織明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)圖1B。

2.2 LINC00460在不同臨床參數(shù)患者間的表達(dá) 通過(guò)Wilcoxon檢驗(yàn)或Kruskal-Wallis檢驗(yàn)分析了不同臨床參數(shù)患者之間LINC00460的表達(dá)情況，結(jié)果顯示隨著病理學(xué)分期、T分期、N分期、M分期以及組織學(xué)分級(jí)的升高LINC00460的表達(dá)也升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。另外LINC00460在男性中表達(dá)較女性高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而LINC00460在不同年齡段之間的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)圖2。

圖1 LINC00460在ccRCC組織中的表達(dá)

圖2 LINC00460在不同臨床參數(shù)患者間的表達(dá)

為了進(jìn)一步驗(yàn)證LINC00460的表達(dá)與患者臨床參數(shù)的相關(guān)性，我們根據(jù)LINC00460表達(dá)值的中位數(shù)進(jìn)行高低分組作為因變量，以臨床參數(shù)作為自變量進(jìn)行l(wèi)ogistic回歸分析，結(jié)果顯示，LINC00460高表達(dá)與更高的病理學(xué)分期、T分期、N分期、M分期和組織學(xué)分級(jí)相關(guān)；LINC00460高表達(dá)與性別相關(guān)，與年齡無(wú)關(guān)。見(jiàn)表2。

2.3 Kaplan-Meier生存分析 根據(jù)LINC00460的表達(dá)值的中位數(shù)將所有的患者分為高LINC00460表達(dá)組和低LINC00460表達(dá)組。采用Kaplan-Meier生存分析2 組患者的總生存率（overallsurvival，OS）以及無(wú)病生存率（disease-freesurvival，DFS)，結(jié)果顯示高LINC00460表達(dá)組的OS和DFS較低LINC00460表達(dá)組更差，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)圖3。

2.4 Cox回歸分析 采用單因素以及多因素Cox回歸對(duì)所有患者進(jìn)行總生存以及無(wú)病生存分析。單因素Cox回歸分析結(jié)果表明，年齡、病理學(xué)分期、T分期、M分期、組織學(xué)分級(jí)和LINC00460均與患者的總生存明顯相關(guān)。多因素Cox回歸分析證實(shí)，年齡、病理學(xué)分期、組織學(xué)分級(jí)和LINC00460均是影響患者總生存的預(yù)后因素（見(jiàn)表3）。單因素Cox回歸分析結(jié)果表明，病理學(xué)分期、T分期、M分期、組織學(xué)分級(jí)和LINC00460均與患者的無(wú)病生存明顯相關(guān)。多因素Cox回歸分析證實(shí)，病理學(xué)分期和組織學(xué)分級(jí)是影響患者無(wú)病生存的預(yù)后因素（見(jiàn)表4）。

表2 logistic回歸分析LINC00460在不同臨床參數(shù)患者間的表達(dá)

圖3 ccRCC患者的Kaplan-Meier生存分析

3 討論

LINC00460可參與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展。在胃癌中，LINC00460在癌組織中的表達(dá)較癌旁組織明顯升高，細(xì)胞學(xué)和分子機(jī)制研究表明其可以通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miR-342-3p來(lái)促進(jìn)KDM2A的表達(dá)從而促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖、遷移以及侵襲[7]。另外，ZHANG等[8]的研究發(fā)現(xiàn)LINC00460的表達(dá)還與胃癌患者的OS和DFS明顯相關(guān)，LINC00460過(guò)表達(dá)的患者其總生存以及無(wú)病生存更差，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)LINC00460可以通過(guò)激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路來(lái)促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖及遷移。在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中，LINC00460在癌組織中的表達(dá)也較癌旁組織表達(dá)明顯增加，并且其表達(dá)的增加可能與癌細(xì)胞的凋亡和自噬相關(guān)，LINC00460的沉默可以明顯抑制STC2、AKT、ERK的表達(dá)，從而引起癌細(xì)胞發(fā)生凋亡和自噬[9]。在卵巢癌中，LINC00460在癌組織中的表達(dá)也較癌旁組織表達(dá)明顯升高，并且LINC00460的高表達(dá)與卵巢癌患者的預(yù)后明顯相關(guān)，LINC00460高表達(dá)的患者具有高的轉(zhuǎn)移率和低的OS，細(xì)胞學(xué)功能實(shí)驗(yàn)證明LINC00460 的過(guò)表達(dá)可通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miR-338-3p來(lái)促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，而沉默LINC00460可明顯抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖和遷移[10]。在肺腺癌中，LINC00460在癌組織中表達(dá)也較癌旁組織明顯增加，通過(guò)細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)LINC00460的過(guò)表達(dá)可以競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miR-302c-5p并促進(jìn)FOXA1信號(hào)通路的激活來(lái)促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞的增殖、遷移以及侵襲，而敲低LINC00460則可導(dǎo)致miR-302c-5p表達(dá)上升和FOXA1信號(hào)通路激活的抑制，從而引起肺腺癌癌細(xì)胞增殖和遷移抑制[11]。此外，LINC00460的表達(dá)還與腫瘤的耐藥相關(guān)，在非小細(xì)胞肺癌中，LINC00460的過(guò)表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌對(duì)吉非替尼耐藥明顯相關(guān)，LINC00460可以通過(guò)作為miR-769-5p的分子海綿來(lái)促進(jìn)EGFR（miR-769-5p的靶基因）表達(dá)，從而促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌耐藥的發(fā)生[12]。由此可見(jiàn)，LINC00460主要是作為一種促癌lncRNA來(lái)促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展和耐藥，并且其也與腫瘤患者的預(yù)后明顯相關(guān)。

表3 單因素和多因素Cox回歸分析（總生存）

表4 單因素和多因素Cox回歸分析（無(wú)病生存）

在本研究中，通過(guò)分析LINC00460在ccRCC以及癌旁組織中的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，LINC00460在ccRCC中表達(dá)也較癌旁組織明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。另外，通過(guò)分析LINC00460的表達(dá)與ccRCC患者臨床參數(shù)的關(guān)系表明，其在高的腫瘤病理學(xué)分期、組織學(xué)分級(jí)、T分期、N分期和M分期中表達(dá)更高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這些研究結(jié)果表明LINC00460的高表達(dá)可能促進(jìn)ccRCC的進(jìn)展及轉(zhuǎn)移。此外，Kaplan-Meier生存分析結(jié)果顯示，LINC00460高表達(dá)組患者較低表達(dá)組患者的總生存及無(wú)病生存更差，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。為了進(jìn)一步證實(shí)LINC00460在預(yù)測(cè)ccRCC患者預(yù)后中的作用，我們使用了多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸對(duì)患者的總生存預(yù)后進(jìn)行分析，結(jié)果表明年齡、病理學(xué)分期、組織學(xué)分級(jí)和LINC00460均是影響患者總生存的預(yù)后因素。而無(wú)病生存預(yù)后的多因素Cox回歸模型分析顯示病理學(xué)分期和組織學(xué)分級(jí)是影響患者無(wú)病生存預(yù)后的因素。這些研究結(jié)果表明LINC00460可作為ccRCC的預(yù)后因子來(lái)預(yù)測(cè)ccRCC患者術(shù)后的總生存，但不能用于獨(dú)立預(yù)測(cè)ccRCC患者術(shù)后的無(wú)病生存。

綜上所述，LINC00460可能作為一個(gè)促癌lncRNA來(lái)調(diào)節(jié)ccRCC的發(fā)生發(fā)展，并且其可以作為預(yù)測(cè)ccRCC患者OS的生物標(biāo)志物。然而本研究仍有不足之處：①本研究主要基于生物信息學(xué)分析的結(jié)果，缺乏確切的實(shí)驗(yàn)研究；②在本研究中LINC00460的表達(dá)不是影響患者無(wú)病生存的獨(dú)立預(yù)后因子，可能與本研究中的樣本量過(guò)少有關(guān)；③本研究中LINC00460是否可以作為ccRCC治療的一個(gè)靶點(diǎn)，仍需要進(jìn)一步分析。因此，我們的研究結(jié)果仍然需要大樣本分析以及體內(nèi)外分子機(jī)制實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步探討。