朱洪斌 葉亞蘭 顏剛林

全球范圍內，肺癌發(fā)病率和死亡率逐年增高。每年有108萬人確診肺癌，106萬人死于肺癌及相關疾病[1]。2015年，中國約61萬肺癌患者死亡，其中22%患者死于肺癌相關疾病[2]。非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌的主要類型，約占總數的85%，按照組織病理學分型，主要為腺癌和鱗癌，大多數患者在首次確診時已經處于疾病晚期，失去手術機會[3]。肺癌治療已經進入“靶向治療時代”，但是包括EFGR、ALK、ROS1[4-5]等驅動基因突變陽性患者總檢出率不超過50%，靶向治療失敗后續(xù)治療和基因野生型肺癌患者預后總體較差。早期發(fā)現早期治療，仍然是提高患者遠期生存的關鍵。

上皮細胞轉化序列2(epithelial cell transforming sequence 2,ECT2)主要參與鳥嘌呤核苷酸交換，誘導細胞有絲分裂和增殖[6]。研究顯示，其通過改變組織架構激活腫瘤通道[7]和DNA損傷參與腫瘤進程[8]。已被證實在多種惡性腫瘤中表達異常，如胃癌、乳腺癌、骨癌[9-10]等。但是，其在肺癌患者血液中表達情況及與患者臨床病理資料之間關系尚未闡明。本研究通過檢測非小細胞肺癌患者和健康志愿者外周血ECT2表達，探討其臨床價值。

資料與方法

一、病例資料

收集2017年7月至2018年12月入住安徽醫(yī)科大學附屬巢湖醫(yī)院50例NSCLC患者，所有患者臨床資料完整，病理診斷明確，依據《國際肺癌分期指南》第八版評估臨床分期。其中，男性35人，女性15人，中位年齡61.29±13.39歲(47～76歲)，腺癌26例，鱗癌24例。同期收集50例健康志愿者作為對照組。其中，男性33人，女性17人，中位年齡61.53±13.46歲(47～76歲)。2組性別、年齡比較，無統(tǒng)計學差異(χ2=2.698,P=0.073;t=0.816 ,P=0.925)。采集標本前，所有患者均未接受放化療等治療。本研究經院倫理委員會批準，均簽署知情同意書。

二、標本檢測

收集患者次日空腹靜脈血10 mL，送檢安徽醫(yī)科大學附屬巢湖醫(yī)院檢驗科應用電化學發(fā)光法測定癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)。另取患者及健康志愿者空腹靜脈血3mL，以3000 r·min-1離心10 min，留取上層血清，放置于- 80℃超低溫冰箱保存。采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)測定外周血ECT2的表達情況。所有操作嚴格按照ECT2 ELISA試劑盒(Abcam公司，ab51494)說明書完成。

三、統(tǒng)計學分析

所有的數據使用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件分析。計量資料均符合正態(tài)分布，以± s表示，方差齊使用t 檢驗，方差不齊使用Mann-Whitney U秩和檢驗，計數資料使用χ2檢驗。通過受試者工作特征曲線(ROC)，確定診斷cut-off值、最佳特異度和敏感度。P<0.05為差異存在統(tǒng)計學意義。

結 果

一、外周血ECT2和CEA表達情況

本研究測定了2組患者外周血中ECT2和CEA表達情況。結果顯示，NSCLC組患者ECT2和CEA表達均高于健康對照組，差異存在統(tǒng)計學意義(P<0.05)(見表1)。

表1 外周血中ECT2和CEA表達情況

二、外周血ECT2表達與臨床病理參數的關系

探討ECT2和臨床病理參數之間關系，結果顯示外周血ECT2在NSCLC中表達水平與TNM分期、淋巴結轉移相關(P<0.05)，與性別、年齡和病理類型不相關(P>0.05)(見表2)。

三、 ECT2在NSCLC的診斷價值

本研究采用繪制受試者工作特征曲線(ROC)探討ECT2在NSCLC的臨床診斷價值(圖1)結果顯示選取ECT2：906.24 ng/L為最佳cut-off值，其敏感度為73.2%，特異度為91.4%，曲線下面積(AUC)為0.913。

表2 外周血中ECT2與臨床病理參數的關系

圖1 NSCLC患者外周血ECT2 ROC曲線

討 論

ECT2在纖維母細胞轉化過程中被首次發(fā)現，具有特征性DH-PH串聯(lián)結構域，參與Rho、Rac和Cdc42核苷酸交換。其在細胞分裂間期被隔離在細胞核內，在有絲分裂期突破核膜分泌到細胞質中，參與磷酸化過程。ECT2在多種惡性腫瘤中存在過度表達，可能與染色體3q26區(qū)域異常有關[11]。在NSCLC中，無論肺腺癌還是肺鱗癌，ECT2均表達異?！，F有研究顯示其發(fā)病機制包括：一方面其異常錯位表達通過Rac1-Pak-MEK-Erk通道參與腫瘤進程[12]。另一方面，通過PKC-Ect2-Rac1-NPM通道參與KRAS-TRP53驅動陽性的肺腺癌進程[13]。

我們的研究結果顯示，NSCLC患者ECT2：1218.62 ±224.18 ng/l，相較與健康對照組，NSCLC組患者ECT2表達明顯增高，與臨床病理資料進行分析，其表達異常與TNM分期和淋巴結轉移相關(P<0.001)，與性別、年齡和病理類型不相關(P>0.05)。Zhou[14]和Bai[15]報道高表達的ECT2導致肺癌患者更差預后和更低、無復發(fā)、生存率。這些結果提示ECT2參與疾病的進程，與預后不良相關。Wang[16]報道在胃癌患者ECT2 mRNA較癌周正常組織表達明顯增高，根據ROC曲線選取外周血最佳cut-off值：924.62 ng/L，其敏感度為68.0%，特異度為 93.4%。本研究進一步分析結果顯示，選取906.24 ng/L為最佳cut-off值，其敏感度為73.2%，特異度為91.4%，曲線下面積(AUC)為0.913。提示ECT2在多種惡性腫瘤中存在異常表達，可以作為臨床血清腫瘤標志物使用。

綜上所述，本研究發(fā)現ECT2在NSCLC患者外周血中表達水平明顯增高，其表達水平與TNM分期和淋巴結轉移相關?？梢宰鳛镹SCLC患者新的腫瘤標志物。