馬尚 尹顏軍 張鑫桐 白萬秋 榮長利 時廣利

肺癌嚴(yán)重威脅著人類的健康，是目前全世界最常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率排在各種癌癥的第一位[1]。肺癌中大約75%為非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，肺癌患者的5年生存率比較低(15～20%左右)，主要原因是患者確診時大多為晚期肺癌，而早期肺癌患者的5年生存率大大提高(約40%)[2]。因此，早期發(fā)現(xiàn)和早期治療對于提高肺癌患者的生存率至關(guān)重要。人甘露糖醇結(jié)合凝集素相關(guān)絲氨酸蛋白酶(MASP)-2于肝臟中合成分泌，是補體系統(tǒng)凝集素激活途徑的關(guān)鍵酶，參與機體的免疫應(yīng)答，在機體的免疫調(diào)節(jié)和免疫監(jiān)視中發(fā)揮著重要作用[3]。有研究表明，MASP-2與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，MASP-2可能通過促進增殖而引起腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[4-5]。細(xì)胞角蛋白19片段(Cyfra21-1)做為一種肺癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物，目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床。本文主要通過檢測NSCLC患者血清中MASP-2和Cyfra21-1的濃度水平，并與目前臨床上常規(guī)檢測指標(biāo)癌胚抗原(CEA)進行比較，探討聯(lián)合檢測血清MASP-2和Cyfra21-1在NSCLC輔助診斷和早期診斷中的臨床應(yīng)用價值。

資料與方法

一、 一般資料

病例組為2017年8月至2018年8月首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院收治確診的NSCLC患者139例，年齡41～75歲，男性82例、女性57例；其中腺癌96例，鱗癌43例。所有NSCLC患者為初次就診，并經(jīng)過病理學(xué)確診為NSCLC，以往未做過任何手術(shù)、化療或放療。肺部良性疾病組46例(男性24例、女性22例)，包括肺炎患者15例、肺結(jié)核患者18例和肺部良性結(jié)節(jié)患者13例。健康人組61名(男性29名、女性32名)來自北京胸科醫(yī)院體檢正常的人員，血脂、肝腎功能、血常規(guī)等指標(biāo)正常，并且無糖尿病和高血壓病史等。

二、 標(biāo)本采集

采集NSCLC患者、肺部良性疾病患者和健康人空腹靜脈血(非抗凝)標(biāo)本3mL，在2 h內(nèi)經(jīng)4000 r·min-1離心后分離出血清，然后將血清標(biāo)本-80℃冷凍保存，集中進行MASP-2的檢測。此研究經(jīng)首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院倫理委員會審批通過(批件號：2016-01)。

三、研究方法

MASP-2的檢測采用丹麥HycultBiorech公司生產(chǎn)的人類MASP-2酶聯(lián)免疫吸附法定量檢測試劑盒，應(yīng)用進口酶標(biāo)儀(型號:Multiskan)進行吸光度值的測定，MASP-2的臨界參考值為60 ng/mL；Cyfra21-1和CEA的檢測應(yīng)用上海透景生物技術(shù)公司生產(chǎn)的全自動流式熒光免疫分析儀完成(型號：TESMI)，Cyfra21-1的臨界參考值為4 ng/mL，CEA的臨界參考值為5 ng/mL。所有標(biāo)本的MASP-2、Cyfra21-1和CEA檢測嚴(yán)格按照試劑盒說明書和儀器規(guī)范操作程序進行。

四、 統(tǒng)計學(xué)處理

統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS軟件進行,對所有數(shù)據(jù)進行正態(tài)性分布檢驗，非正態(tài)性分布數(shù)據(jù)采用中位數(shù)(M)和四分位數(shù)間距(QR)表示；非正態(tài)性分布數(shù)據(jù)采用秩和Mann-Whitney檢驗, 多組之間兩兩比較采用P值修正的方法,即只有P<0.05/K=0.05/3=0.0167才能認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義；組間靈敏度的比較采用χ2檢驗；P<0.05時具有統(tǒng)計學(xué)差異。

結(jié) 果

一、 血清MASP-2和Cyfra21-1的檢測結(jié)果

NSCLC患者血清中MASP-2的濃度水平明顯高于肺部良性疾病組和正常健康人組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(Z=2.942，P<0.01)；肺部良性疾病組血清中MASP-2和Cyfra21-1的濃度水平與正常健康人組比較無明顯差異(Z=0.573，P>0.05)，Cyfra21-1的濃度水平明顯高于肺部良性疾病組和正常健康人組(Z=6.798，P<0.001)。NSCLC經(jīng)病理分型后，血清MASP-2在鱗癌和腺癌中的濃度水平無明顯差異(Z=0.407，P>0.05)，Cyfra21-1在鱗癌中的濃度水平顯著高于腺癌，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(Z=2.689，P<0.05)。NSCLC經(jīng)TNM分期后，MASP-2在Ⅰ期+Ⅱ期和Ⅲ期+Ⅳ期中的濃度水平無明顯差異(Z=0.857，P>0.05)；Cyfra21-1在Ⅲ期+Ⅳ期中的濃度水平顯著高于Ⅰ期+Ⅱ期，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(Z=2.986，P<0.05)(見表1)。

表1 血清MASP-2和Cyfra21-1的濃度水平M(QR)

注：NSCLC與良性疾病、健康人比較，MASP-2:Z=2.942，aP=0.003；Cyfra21-1:Z=6.798，bP=0.000；腺癌與鱗癌比較，MASP-2：Z=0.407，cP=0.684；Cyfra21-1：Z=2.689，dP=0.014；Ⅲ期+Ⅳ期與Ⅰ期+Ⅱ期比較，MASP-2：Z=0.857，eP=0.392；Cyfra21-1：Z=2.986，fP=0.008

二、血清MASP-2、Cyfra21-1和CEA在NSCLC中檢測的靈敏度和特異度

血清MASP-2和Cyfra21-1在NSCLC中檢測的靈敏度分別為47.5%和48.2%，略高于CEA的靈敏度44.6%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.362,P>0.05)。血清MASP-2、Cyfra21-1和CEA在NSCLC中檢測的特異度分別為88.8%、89.8%和90.2%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.203,P>0.05)。MASP-2和Cyfra21-1聯(lián)合對NSCLC檢測的靈敏度明顯提高，達到了64.0%，特異度略有下降(為86.0%)；MASP-2和Cyfra21-1聯(lián)合檢測的靈敏度與單項MASP-2、Cyfra21-1比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=7.714,P<0.01),特異度比較無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.381,P>0.05)。靈敏度計算方法為：病例組陽性例數(shù)/病例組總例數(shù)；特異度計算方法為：對照組陰性例數(shù)/對照組總例數(shù)(見表2)。

表2 MASP-2、Cyfra21-1和CEA在NSCLC中的靈敏度、特異度

注：MASP-2、Cyfra21-1、CEA之間比較，靈敏度：χ2=0.362，aP=0.631；特異度：χ2=0.203，bP=0.822；MASP-2+Cyfra21-1與單項比較，靈敏度：χ2=7.714，cP=0.005；特異度：χ2=0.381，dP=0.537

三、血清MASP-2、Cyfra21-1和CEA在不同NSCLC中的靈敏度

血清MASP-2在鱗癌和腺癌中檢測的靈敏度無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.166,P>0.05)；Cyfra21-1在鱗癌中檢測的靈敏度顯著高于腺癌，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.308,P<0.05)；CEA在腺癌中檢測的靈敏度顯著高于鱗癌，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.205,P<0.05)。血清MASP-2在晚期NSCLC(Ⅲ期+Ⅳ期)中的靈敏度高于早期NSCLC(Ⅰ期+Ⅱ期)，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=1.668,P>0.05)；血清Cyfra21-1在晚期NSCLC中檢測的靈敏度顯著高于早期NSCLC，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=26.24,P<0.001)；血清CEA在晚期NSCLC中檢測的靈敏度顯著高于早期NSCLC，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=24.72,P<0.001)；血清MASP-2在Ⅰ期+Ⅱ期NSCLC中檢測的靈敏度顯著高于Cyfra21-1和CEA，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.212,P<0.05)(見表3)。

討 論

由于早期肺癌(Ⅰ期和Ⅱ期)患者發(fā)病時癥狀不明顯，因此肺癌患者確診時大多數(shù)已屬于中晚期(Ⅲ期和Ⅳ期)，造成肺癌的死亡率比較高，全世界每年大概有130萬人死于肺癌[6]。目前肺癌患者的早期篩查主要依靠肺部低劑量螺旋CT的手段，但是胸部CT對于一些肺部結(jié)節(jié)的診斷仍有一定的困難[7]。目前，腫瘤標(biāo)志物已經(jīng)廣泛應(yīng)用于臨床，腫瘤標(biāo)志物是由腫瘤細(xì)胞分泌進入到人的血液或體液中的物質(zhì)，在一定程度上能夠反映腫瘤的病理過程[8]。目前臨床上常用的與肺癌有關(guān)的腫瘤標(biāo)志物主要有細(xì)胞角蛋白(Cyfra21-1)、癌胚抗原(CEA)和鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原(SCC)等，用于NSCLC的輔助診斷和療效監(jiān)測。但是這些肺癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物在早期NSCLC中的靈敏度比較低，只有10～20%[9]。因此，為了早期診斷肺癌患者以及提高患者的生存率，發(fā)現(xiàn)靈敏度和特異度都比較理想的肺癌腫瘤標(biāo)志物對于臨床具有重要的價值。

表3 血清MASP-2、Cyfra21-1和CEA在不同NSCLC中的靈敏度(%)

注：腺癌與鱗癌比較，MASP-2：χ2=0.166，aP=0.716；Cyfra21-1：χ2=5.308，bP=0.021；CEA：χ2=5.205，cP=0.027；Ⅲ期+Ⅳ期與Ⅰ期+Ⅱ期比較，MASP-2：χ2=1.668，dP=0.197；Cyfra21-1：χ2=26.24，eP=0.000；CEA：χ2=24.72，fP=0.000；MASP-2與Cyfra21-1、CEA比較，χ2=6.212，gP=0.024

MASP-2是由686個氨基酸組成一種蛋白質(zhì)，MASP2編碼基因位于1p36.3-36.2染色體上，包含12個外顯子[10]。 MASP主要有四類(MASP-1、MASP-2、MASP-3和sMAP)，其中MASP-2是補體系統(tǒng)凝集素激活途徑中的關(guān)鍵因素，能夠直接激活補體級聯(lián)反應(yīng)。補體系統(tǒng)是先天性的重要固有免疫，是機體防御病原體侵害的第一道系統(tǒng)。在機體免疫防御過程中，MASP-2激活補體后開始啟動吞噬細(xì)胞和清除抗原的功能，還具有促進細(xì)胞凋亡和免疫監(jiān)視等作用[11]。

劉雪晴等[4]的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MASP-2在大腸癌患者的癌組織和血清中異常表達，MASP-2可能在大腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中起一定的作用。段廷旺等[12]的研究結(jié)果也顯示，MASP-2在胃癌患者的癌組織中表達異常。SWIERZKO等[5]的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，卵巢癌患者癌組織和血清中MASP-2的表達量顯著高于對照組，并且可以判斷卵巢癌患者的預(yù)后情況。張小蓬[13]應(yīng)用酶聯(lián)免疫法檢測了96例Ⅰ期和Ⅱ期NSCLC患者血清中MASP-2的濃度水平，檢測結(jié)果顯示Ⅰ期和Ⅱ期NSCLC患者血清中MASP-2的濃度水平顯著高于健康人對照組(P<0.001)，并且與是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。Cyfra21-1是目前臨床上常用的肺癌腫瘤標(biāo)志物之一，《中國原發(fā)性肺癌診療規(guī)范》(2015年版)推薦Cyfra21-1可用于NSCLC的輔助診斷、治療監(jiān)測和預(yù)后判斷[14]。

本研究的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NSCLC患者血清中MASP-2的濃度水平明顯高于肺部良性疾病患者和健康人，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。這一研究結(jié)果與張小蓬[13]的研究結(jié)果基本一致，不同的是其研究對象中不包括Ⅲ期和Ⅳ期NSCLC患者。本研究的結(jié)果顯示，MASP-2在NSCLC中檢測的靈敏度為47.5%、特異度為88.8%，Cyfra21-1在NSCLC檢測中的靈敏度為48.2%、特異度為89.8%，說明MASP-2在NSCLC檢測中的靈敏度和特異度與Cyfra21-1大致相同，同樣有可能作為檢測NSCLC的一種腫瘤標(biāo)志物。本研究的結(jié)果顯示，肺部良性疾病組血清中MASP-2和Cyfra21-1的濃度水平與正常健康人組比較無明顯差異(P>0.05)，表明肺部良性疾病對MASP-2和Cyfra21-1表達沒有影響。另外，本研究最重要的發(fā)現(xiàn)是MASP-2在早期NSCLC中檢測的靈敏度比較高，達到了39.0%，顯著高于Cyfra21-1的靈敏度(14.6%)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，說明MASP-2對于早期NSCLC的檢出率要好于Cyfra21-1?！吨袊l(fā)性肺癌診療規(guī)范》(2015年版)建議聯(lián)合使用肺癌腫瘤標(biāo)志物能夠提高肺癌檢測的靈敏度和特異度。本研究的結(jié)果也顯示，聯(lián)合Cyfra21-1和MASP-2對NSCLC檢測的靈敏度達到了64.0%，顯著高于單一腫瘤標(biāo)志物的陽性率(P<0.01)。

綜上所述，血清MASP-2在NSCLC的輔助診斷中具有較好的臨床應(yīng)用價值,聯(lián)合MASP-2和Cyfra21-1，可以提高NSCLC檢測的靈敏度。