顧利萍，俞吉霞

封片程序是常規(guī)制片過(guò)程中的收關(guān)環(huán)節(jié)，日常工作中發(fā)現(xiàn)切片必須濕封，用溫箱烤干或電吹風(fēng)吹干后干燥切片，易引起細(xì)胞收縮、龜裂或切片出現(xiàn)黑色結(jié)晶樣小點(diǎn)[1]，切片頻繁出現(xiàn)空氣結(jié)晶，在鏡下見(jiàn)類似色素樣的點(diǎn)狀縮晶和黑色光滑的細(xì)胞核[2]，導(dǎo)致細(xì)胞核內(nèi)細(xì)微結(jié)構(gòu)無(wú)法觀察，嚴(yán)重影響病理診斷。目前，切片制作中關(guān)于空氣結(jié)晶的報(bào)道較少。本科室總結(jié)實(shí)踐工作經(jīng)驗(yàn)，探討空氣結(jié)晶產(chǎn)生的情況及處理方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑DAKO Cover Stainer全自動(dòng)染色封片一體機(jī)，Leica 2235切片機(jī)，DAKO HE染液組(蘇木精、伊紅、返藍(lán)液)，中性樹(shù)膠。

1.2 材料收集乳腺、扁桃體、胃腸組織、肝臟、脾臟、淋巴結(jié)、腎臟、甲狀腺組織作為分析對(duì)象，送檢標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定，常規(guī)脫水，包埋，4 μm厚切片。

1.3 方法將不同組織進(jìn)行常規(guī)石蠟切片，切片厚為4 μm，烤片20 min，置于染色機(jī)選擇常規(guī)HE染色不封片程序，分別置于空氣中5、10、20、30、60 min及過(guò)夜，然后進(jìn)行手工封片。另將二甲苯取出切片進(jìn)行手工濕封與其進(jìn)行對(duì)比，觀察切片中空氣結(jié)晶情況。

2 結(jié)果

HE染色后直接進(jìn)行手工濕封的切片鏡下紅藍(lán)對(duì)比鮮明、透亮，核內(nèi)結(jié)構(gòu)清晰；染色后從二甲苯取出置于空氣中自然干燥再封片的切片，可見(jiàn)類似色素樣的點(diǎn)狀縮晶或黑色結(jié)晶樣小點(diǎn)(圖1、2)，不同組織均會(huì)產(chǎn)生空氣結(jié)晶(表1)。

表1 不同組織產(chǎn)生空氣結(jié)晶的情況

圖1 大量類似色素樣的點(diǎn)狀縮晶(紅色箭頭所示) 圖2 黑色光滑的細(xì)胞核或黑色結(jié)晶樣小體(紅色箭頭所示)，結(jié)構(gòu)清晰的細(xì)胞核(藍(lán)色箭頭所示)

3 討論

常規(guī)制片質(zhì)控要求封片不溢膠、無(wú)氣泡，科室全自動(dòng)染色封片一體機(jī)替代手工封片后，該環(huán)節(jié)往往被大家忽略，有文獻(xiàn)報(bào)道封片不及時(shí)易引起組織干涸，出現(xiàn)組織收縮和裂痕即龜裂現(xiàn)象，或因吸收空氣中的水分使部分細(xì)胞核透明不良而出現(xiàn)黑核現(xiàn)象[3]，通過(guò)實(shí)驗(yàn)我們也發(fā)現(xiàn)嚴(yán)格按規(guī)范制作的切片，鏡下可見(jiàn)細(xì)胞核結(jié)構(gòu)清晰，紅藍(lán)對(duì)比鮮明，透亮清晰的優(yōu)良切片，而在空氣中靜置干燥的切片封片后均出現(xiàn)空氣結(jié)晶。

3.1 空氣結(jié)晶產(chǎn)生原因我們?cè)谌粘９ぷ髦邪l(fā)現(xiàn)空氣結(jié)晶主要發(fā)生在以下幾種情況。(1)切片干封：染色機(jī)設(shè)置的封片過(guò)程，1個(gè)染色架切片10張需要耗時(shí)2 min，染色架后面封片的幾張切片中會(huì)產(chǎn)生黑色光滑的細(xì)胞核，由于其封片時(shí)二甲苯已揮發(fā)，處于干燥狀態(tài)；(2)染色機(jī)故障：在無(wú)水乙醇缸處發(fā)生撞架的情況后手工取出置于空氣中干燥，而后切片未經(jīng)重新處理直接手工封片，出現(xiàn)大量成片的褐色區(qū)域或者黑色光滑的細(xì)胞核；(3)試劑更換錯(cuò)誤：染色脫水無(wú)水乙醇三道，更換了第一缸無(wú)水乙醇，后兩缸無(wú)水乙醇未經(jīng)更換直接使用時(shí)，出現(xiàn)大量成片的褐色區(qū)域或者黑色光滑的細(xì)胞核；(4)重新濕封效果不佳：出現(xiàn)空氣結(jié)晶的切片移去蓋玻片，二甲苯5 min，中性樹(shù)膠封固，切片高倍鏡下仍然可見(jiàn)空氣結(jié)晶。綜合以上幾種情況可見(jiàn)產(chǎn)生空氣結(jié)晶的主要原因：切片置于空氣中吸收了水分使部分細(xì)胞核脫水透明不良，經(jīng)過(guò)樹(shù)膠封片后產(chǎn)生點(diǎn)狀縮晶或黑核現(xiàn)象。

3.2 空氣結(jié)晶避免方法嚴(yán)格按照常規(guī)制片的規(guī)范化流程進(jìn)行操作，使切片脫水、透明充分，手工封片必須要濕封，采用封片機(jī)封片時(shí)盡量保持全封閉、實(shí)驗(yàn)室保持恒溫，減慢二甲苯的揮發(fā)，樹(shù)膠濃稠用二甲苯調(diào)均勻。

3.3 空氣結(jié)晶補(bǔ)救措施對(duì)于已經(jīng)產(chǎn)生的空氣結(jié)晶，我們采取補(bǔ)救措施：(1)重新切片；(2)無(wú)法重新切片的組織進(jìn)行手工處理，加溫去掉蓋玻片或者將切片置于二甲苯中去掉蓋玻片，然后置于二甲苯中兩道各5～10 min，置于無(wú)水乙醇兩道各2 min，95%乙醇1 min，75%乙醇1 min，流水充分沖洗，伊紅染色，75%、95%乙醇各1 min，無(wú)水乙醇兩道各2 min，二甲苯兩道各2 min，中性樹(shù)膠封固，處理后的切片鏡下細(xì)胞核結(jié)構(gòu)清晰，紅藍(lán)對(duì)比鮮明，透亮清晰的優(yōu)良切片。

封片環(huán)節(jié)看似簡(jiǎn)單，但也同樣會(huì)影響切片質(zhì)量，影響病理診斷，隨著ISO 15 189的推進(jìn)，常規(guī)技術(shù)操作需要嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)化程序進(jìn)行，抓好常規(guī)制片過(guò)程中的每個(gè)細(xì)節(jié)，制作出一張高質(zhì)量的HE切片，給病理診斷提供需要的信息，規(guī)避風(fēng)險(xiǎn)，更好的服務(wù)于患者。