張 婭，李傳應(yīng)，陳晶晶，王曉秋

近年全自動(dòng)免疫組化染色平臺(tái)的應(yīng)用在免疫組化染色的標(biāo)準(zhǔn)化控制中起重要作用[1]，但不同免疫組化染色平臺(tái)染色效果存在一定的差異，為了提高免疫組化制片的質(zhì)量，確保抗原的檢測(cè)率[2]，不同抗體應(yīng)選擇染色效果最佳平臺(tái)。目前，關(guān)于不同抗體在不同免疫組化染色平臺(tái)染色效果評(píng)價(jià)報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)將TDT、CD10兩種抗體在兩種不同免疫組化染色平臺(tái)中的染色效果總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本選取2018～2019年安徽省立醫(yī)院病理科存檔的腫瘤標(biāo)本40例，其中病理診斷TDT陽性的胸腺瘤、淋巴母細(xì)胞淋巴瘤標(biāo)本各10例；病理診斷CD10陽性的濾泡性淋巴瘤、子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤各10例。

1.2 儀器與試劑Roche Ventana XT/Ultra；Leica Bond；LEICARM2235型石蠟切片機(jī)；Olympus顯微鏡；TDT抗體、CD10抗體均購自北京中杉金橋公司；Leica封閉式二抗系統(tǒng)；Roche封閉式二抗系統(tǒng)。

1.3 方法腫瘤蠟塊連續(xù)2.5～3 μm厚切片2張，分別用貼置Roche、Leica標(biāo)簽的防脫載玻片撈片，80 ℃烘烤30 min，羅氏標(biāo)簽的玻片牛奶浸泡10 min，分別行上機(jī)全自動(dòng)處理。Roche Ventana和Leica Bond全自動(dòng)免疫組化染色平臺(tái)均使用相同廠家和同一批次的一抗，分別使用各自封閉的二抗系統(tǒng)。兩種染色平臺(tái)使用各自標(biāo)準(zhǔn)化SOP操作流程。染色結(jié)果在顯微鏡下觀察對(duì)比。

2 結(jié)果

2.1 TDT在不同免疫組化染色平臺(tái)中的染色效果兩種不同免疫組化染色平臺(tái)顯示胸腺瘤、淋巴母細(xì)胞淋巴瘤中TDT陽性定位于細(xì)胞核。Leica Bond染色平臺(tái)示陽性細(xì)胞核染色成棕黃色，染色強(qiáng)度適中，背景清晰，陽性率明顯較高(圖1A、B)。Roche Ventana染色平臺(tái)示部分細(xì)胞核陽性不明顯，呈淺黃色，陽性細(xì)胞和陰性細(xì)胞的對(duì)比不明顯，細(xì)胞多呈淺藍(lán)色，部分細(xì)胞呈深灰藍(lán)色，陽性率明顯較低(圖1C、D)。

2.2 CD10在兩種不同免疫組化染色平臺(tái)中的染色效果兩種不同免疫組化染色平臺(tái)顯示濾泡性淋巴瘤、子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤中CD10陽性定位于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)，Leica Bond染色平臺(tái)示陽性細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)染色呈棕黃色，染色強(qiáng)度適中，背景清晰，細(xì)胞陽性率明顯較高(圖2A、B)。Roche Ventana染色平臺(tái)示部分細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)陽性不明顯，呈淺黃色，陽性細(xì)胞和陰性細(xì)胞的對(duì)比不明顯，陽性率明顯較低(圖2C、D)。

3 討論

全自動(dòng)免疫組化染色平臺(tái)在免疫組化技術(shù)中應(yīng)用廣泛，染色結(jié)果可靠，操作簡(jiǎn)單，制片省時(shí)、省力，背景清晰，染色效果更佳[3]。前期我們實(shí)驗(yàn)室一直使用Roche Ventana染色平臺(tái)，大部分抗體染色效果滿意，少部分抗體染色結(jié)果有時(shí)引起爭(zhēng)議。其中TDT、CD10染色效果有時(shí)會(huì)出現(xiàn)弱陽性或假陰性，未達(dá)到理想效果。本實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)TDT、CD10指標(biāo)在Leica Bond染色平臺(tái)效果優(yōu)于Roche Ventana。

TDT作為DNA聚合酶的一種，免疫組化染色陽性定位于細(xì)胞核。在胸腺瘤的診斷中具有輔助作用，是胸腺瘤分型的參考指標(biāo)，A、AB、B1、B2型胸腺瘤TDT均陽性[4-5]。TDT也是淋巴母細(xì)胞瘤最特異和敏感的標(biāo)志物，T、B淋巴母細(xì)胞均可表達(dá)，陽性率高達(dá)95%[6]。CD10是濾泡性淋巴瘤經(jīng)常表達(dá)的抗原標(biāo)志，在子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞及其腫瘤陽性，以鑒別灶性弱陽性的子宮平滑肌瘤[7]，還在Burkitt淋巴瘤、部分彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤、前驅(qū)B淋巴母細(xì)胞性淋巴瘤、白血病、血管免疫母細(xì)胞性T細(xì)胞淋巴瘤等中表達(dá)[8]。決定免疫組化染色效果的重要因素是抗原修復(fù)，腫瘤標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林固定和石蠟包埋后，大量蛋白相互交聯(lián)，抗原修復(fù)可以打開交聯(lián)的蛋白，暴露抗原[9]。合適的修復(fù)液是影響抗原修復(fù)效果的重要因素，Leica Bond使用堿性修復(fù)液pH 9.0，而Roche Ventana抗原修復(fù)液pH 8.0～8.5，有文獻(xiàn)報(bào)道，對(duì)于大部分抗原高pH值修復(fù)液的修復(fù)效果優(yōu)于低pH值[9]。決定免疫組化染色效果的另一重要因素是一抗的染色，兩種免疫組化染色平臺(tái)的技術(shù)原理不同，Leica Bond采用Covertiles技術(shù)，試劑側(cè)面微量泵抽吸，直接滴加在組織表面，試劑消耗少，抗體抗原結(jié)合充分。Roche Ventana采用油蓋膜技術(shù)，輪盤旋轉(zhuǎn)，擊錘式將一抗滴加在覆蓋組織的緩沖液上層油膜，空氣渦流混勻試劑，一抗受到稀釋，增加了消耗量。

圖1 A.Leica Bond染色平臺(tái)胸腺瘤中TDT的表達(dá)，EnVision法；B.Leica Bond染色平臺(tái)淋巴母細(xì)胞淋巴瘤中TDT的表達(dá)，EnVision法；C.Roche Ventana染色平臺(tái)胸腺瘤中TDT的表達(dá)，EnVision法；D.Roche Ventana染色平臺(tái)淋巴母細(xì)胞淋巴瘤中TDT的表達(dá)，EnVision法

圖2 A.Leica Bond染色平臺(tái)濾泡性淋巴瘤中CD10的表達(dá)，EnVision法；B.Leica Bond染色平臺(tái)子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤中CD10的表達(dá)，EnVision法；C.Roche Ventana染色平臺(tái)濾泡性淋巴瘤中CD10的表達(dá)，EnVision法；D.Roche Ventana染色平臺(tái)子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤中CD10的表達(dá)，EnVision法

綜上所述，不同的免疫組化染色平臺(tái)采用的技術(shù)原理及配套的封閉試劑不同，其染色效果也存在一定差異，為了提高制片質(zhì)量，推進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)平臺(tái)建設(shè)，在實(shí)際操作過程中需反復(fù)摸索，針對(duì)不同的抗體選用合適的染色平臺(tái)。