鄭 炎，曹立宇，肖大樹，王相巖，李文清

子宮內(nèi)膜樣腺癌是起源于子宮內(nèi)膜的惡性腫瘤[1]，流行病學(xué)資料顯示發(fā)病率位于女性惡性腫瘤的第4位，占女性全身惡性腫瘤的7%[2]。由于子宮內(nèi)膜樣腺癌癌變過程比較漫長，因此尋找子宮內(nèi)膜癌早期診斷的指標(biāo)，延緩疾病的發(fā)展，提高患者的5年生存率具有一定的臨床意義。大量研究顯示配對(duì)相關(guān)同源框1(paired related homoeobox 1, PRRX1)蛋白在多種癌癥的發(fā)病機(jī)制和診斷中發(fā)揮一定的作用[3-6]。目前，PRRX1在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)及其臨床意義報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)旨在初步探討PRRX1在子宮內(nèi)膜樣腺癌中表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系，以提高臨床與病理醫(yī)師的認(rèn)識(shí)水平。

1 材料與方法

1.1 材料收集2010～2018年安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院以及安徽醫(yī)科大學(xué)附屬巢湖醫(yī)院存檔的267例子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本?；颊吣挲g40～78歲，平均54.2歲；其中正常子宮內(nèi)膜86例，子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變90例，子宮內(nèi)膜樣腺癌91例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有病例均進(jìn)行病理學(xué)診斷，由兩名檢驗(yàn)醫(yī)師對(duì)結(jié)果進(jìn)行判讀，以病理結(jié)果作為診斷依據(jù)；(2)有完整的病理資料和輔助檢查資料。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)存在嚴(yán)重的心、肺、肝、腎功能異常病史；(2)患者在接受檢查前，進(jìn)行相關(guān)醫(yī)學(xué)治療(如放、化療等)。根據(jù)FIGO分級(jí)、臨床分期和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移將子宮內(nèi)膜樣腺癌進(jìn)行分類。

1.2 主要試劑與儀器PRRX1羊多克隆抗體(PAK001Hu01，Cloud-Clone公司)，檸檬酸鹽抗原修復(fù)液(粉劑)(0.01 mol/L，pH 6.0，MVS-0066)，0.01 mol/L PBS(pH 7.2～7.4)，DAB顯色試劑盒(Polymer，Kit-0015)和EliVision Polyer HRP(鼠/兔)Kit-9902免疫組化試劑盒，均購自福州邁新公司。普通微波爐用于抗原微波修復(fù)。

1.3 免疫組化采用免疫組化EliVision法染色，石蠟切片常規(guī)脫蠟、脫水，3%H2O2孵育20 min，PBS清洗，0.01 mol/L枸櫞酸鹽緩沖液中微波處理進(jìn)行抗原修復(fù)，PBS清洗3次；滴加封閉血清孵育20 min，滴加一抗(PRRX1抗體)4 ℃孵育過夜，一抗工作濃度為1 ∶100，PBS清洗3次，滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗，孵育20 min，PBS清洗3次；DAB溶液顯色；自來水沖洗，蘇木精復(fù)染脫水封固，鏡下觀察。PBS液代替一抗作陰性對(duì)照。結(jié)果判定根據(jù)細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核呈棕黃色顆粒染色的細(xì)胞數(shù)和染色強(qiáng)度判定陽性。選擇至少5個(gè)400倍視野下計(jì)數(shù)，按陽性細(xì)胞占百分比計(jì)分：<5%為0分、5%～25%為1分、25%～50%為2分、50%～75%為3分、≥75%為4分；按細(xì)胞著色強(qiáng)度計(jì)分：弱染色為0分、中度染色為1分、強(qiáng)染色為3分。將兩項(xiàng)得分結(jié)果相乘：總分<2分為陰性，≥2分為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用χ2檢驗(yàn)分析計(jì)數(shù)資料，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PRRX1蛋白在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變和子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)應(yīng)用免疫組化EliVision法檢測正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變和子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中PRRX1蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示PRRX1陽性信號(hào)定位于子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變和子宮內(nèi)膜樣腺癌的細(xì)胞核中，在正常子宮內(nèi)膜中未見PRRX1蛋白呈陽性，在子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變中呈弱陽性，在子宮內(nèi)膜樣腺癌中呈強(qiáng)陽性 (圖1～3)。

圖1 PRRX1蛋白在正常子宮內(nèi)膜中呈陰性，EliVision法

圖2 PRRX1蛋白在子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變中呈弱陽性，EliVision法

圖3 PRRX1蛋白在子宮內(nèi)膜樣腺癌中呈強(qiáng)陽性，EliVision法

2.2 PRRX1蛋白在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變和子宮內(nèi)膜樣腺癌中的表達(dá)PRRX1在91例子宮內(nèi)膜樣腺癌中的陽性率為79.1%(72/91)，在正常組織中的陽性率為0(0/86)，在子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變中的陽性率為10.0%(9/90)。子宮內(nèi)膜樣腺癌與正常組織或子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變組織相比，PRRX1的陽性率顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=157.54，P<0.05)。

2.3 PRRX1表達(dá)與子宮內(nèi)膜樣腺癌臨床病理特征的關(guān)系患者年齡≥60歲的子宮內(nèi)膜樣腺癌的PRRX1陽性率為86.2%，年齡<60歲的子宮內(nèi)膜樣腺癌的PRRX1陽性率為75.8%，兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。按FIGO分級(jí)分類，F(xiàn)IGO 1級(jí)的PRRX1陽性率為60%，F(xiàn)IGO 2級(jí)的PRRX1陽性率為87.5%，F(xiàn)IGO 3級(jí)的PRRX1陽性率為89.6%，F(xiàn)IGO 1級(jí)組的PRRX1陽性率低于FIGO 2、3級(jí)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。臨床分期：Ⅰ+Ⅱ期PRRX1的陽性率為74%，Ⅲ+Ⅳ期陽性率為85.3%，兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組PRRX1陽性率為75.9%，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性率為87.8%，兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，表1)。

表1 子宮內(nèi)膜樣腺癌中PRRX1表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系(%)

3 討論

本實(shí)驗(yàn)觀察PRRX1蛋白在正常子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)，并探討PRRX1與子宮內(nèi)膜樣腺癌臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果顯示PRRX1蛋白陽性主要存在于子宮內(nèi)膜樣腺癌中，定位于細(xì)胞核，少量陽性表達(dá)于子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變中，正常子宮內(nèi)膜多無陽性。另外，在子宮內(nèi)膜樣腺癌患者中，按FIGO標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí)，F(xiàn)IGO 1級(jí)的PRRX1陽性率低于中、低分化；按患者年齡、臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分類，PRRX1陽性率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

PRRX1是定位于細(xì)胞核的同源框蛋白配對(duì)家族中的成員[6]，有研究顯示在膽囊癌[7]、乳腺癌[8]、卵巢癌組織[9]中，其陽性顆粒均主要表達(dá)于細(xì)胞核中。本實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)PRRX1在子宮內(nèi)膜腺癌中也表達(dá)于細(xì)胞核。PRRX1在癌組織中的高表達(dá)，在癌旁組織或正常組織中的低表達(dá)。方帆等[8]發(fā)現(xiàn)在乳腺癌中PRRX1陽性率高達(dá)45%；癌旁組織中的陽性率僅為12.5%。范丹等[9]報(bào)道則顯示在62例卵巢癌組織中，PRRX1的陽性數(shù)為33例，陽性率達(dá)53.2%。本實(shí)驗(yàn)中有91例子宮內(nèi)膜樣腺癌中PRRX1的陽性率高達(dá)79.1%(72/91)；在正常組織中的陽性率為0(0/86)。另外，作為子宮內(nèi)膜癌的癌前病變[10]，90例子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變組織中有9例PRRX1陽性，提示PRRX1的表達(dá)上調(diào)可能在子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起一定作用，具體的作用機(jī)制尚需進(jìn)一步的分析。

鑒于PRRX1在癌組織存在高表達(dá)現(xiàn)象，需進(jìn)一步分析PRRX1的表達(dá)與腫瘤患者臨床病理指標(biāo)的相關(guān)性。卵巢癌中PRRX1的表達(dá)被認(rèn)為與臨床分期和有無轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[9]。乳腺癌中PRRX1陽性率被發(fā)現(xiàn)與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期存在關(guān)聯(lián)，表現(xiàn)為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Ⅲ+Ⅳ期乳腺癌患者的PRRX1陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Ⅰ+Ⅱ期的乳腺癌患者[8]。本實(shí)驗(yàn)中并未見PRRX1的表達(dá)與患者年齡、臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等有關(guān)聯(lián)。但是在FIGO分級(jí)中，F(xiàn)IGO 2級(jí)組織的PRRX1陽性率(87.5%)和FIGO 3級(jí)組織的PRRX1陽性率(89.6%)高于FIGO 1級(jí)組織(60.0%)。在不同腫瘤組織中，PRRX1的表達(dá)與分化或分級(jí)程度之間的聯(lián)系有差異。在非小細(xì)胞肺癌組織中PRRX1高表達(dá)存在于高分化的肺癌組織中[11]，與本組結(jié)果相反。方帆等[8]發(fā)現(xiàn)PRRX1的陽性率與乳腺癌患者腫瘤分化程度均無顯著性相關(guān)。在卵巢癌患者中PRRX1表達(dá)對(duì)腫瘤分化程度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[9]。關(guān)于PRRX1在不同腫瘤組織中與分化程度之間聯(lián)系的差異性機(jī)制，尚需進(jìn)一步分析。

綜上所述，盡管近年子宮內(nèi)膜樣腺癌在基因水平、環(huán)境因素、信號(hào)通路等方面取得較大成果[12]，但繼續(xù)尋找新的生物學(xué)標(biāo)志物依然十分重要，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PRRX1蛋白在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中存在高表達(dá)，提示其可能成為子宮內(nèi)膜樣腺癌輔助診斷分級(jí)的標(biāo)志物。目前，PRRX1在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的作用機(jī)制尚需進(jìn)一步探討。