歐庾婷 王彩冰 韋顯林 陳良廣 屠興榮

(右江民族醫(yī)學(xué)院1 臨床醫(yī)學(xué)院，2 應(yīng)用生理研究室，廣西百色市 533000，電子郵箱：2530335018@qq.com)

白花九里明為菊科植物，是壯族民間常用于祛風(fēng)除濕、活血調(diào)經(jīng)、止血、利水的藥物，廣西大部分地區(qū)均有分布[1-2]。近年國(guó)內(nèi)有文獻(xiàn)報(bào)告，白花九里明有護(hù)肝、降壓、止血、鎮(zhèn)痛、消炎等作用[3-6]，但尚無(wú)有關(guān)白花九里明對(duì)肺組織影響的文獻(xiàn)報(bào)道。本課題組建立小鼠肺損傷模型，觀察白花九里明提取液灌胃治療對(duì)小鼠肺懸液的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、丙二醛含量的影響，并與臨床用于治療肺部疾病的藥物氨溴索進(jìn)行比較分析，探討白花九里明對(duì)肺損傷的改善作用，為白花九里明的利用和開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)資料。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康昆明小鼠60只，5周齡左右，雌雄各半，體質(zhì)量25～35 g，由右江民族醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證：SCXK桂2017-0003；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證：SCXK桂2017-0004)。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，分籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)食和進(jìn)水，室溫25℃左右、濕度50%～60%、日光照12 h。

1.2 藥品、試劑及器械 白花九里明采于廣西壯族自治區(qū)百色市郊，曬干備用。0.9% 氯化鈉溶液(青州堯王制藥有限公司，批號(hào)：2218112103)，鹽酸氨溴索(石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司，批號(hào)：1539180673)，四氯化碳(成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)：20160520)。SOD測(cè)試盒、丙二醛測(cè)試盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20190109、20190109)。多功能酶標(biāo)儀(上壹橋國(guó)際貿(mào)易有限公司，型號(hào)：TriStar LB941)，離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠，型號(hào)：安亭 TGL-16G)；手持臺(tái)式兩用均質(zhì)器(美國(guó)PRO Scientific 公司，型號(hào)：PR0200)；三用恒溫水箱(金壇市醫(yī)療儀器廠，型號(hào)：HH-W600)。

1.3 白花九里明提取液的制備過(guò)程 取500 g白花九里明干草，用4 000 mL 30℃蒸餾水浸泡1 h，文火煮沸2 h，過(guò)濾液文火隔水濃縮至500 mL(相當(dāng)于生藥1 g/mL)，冷卻后放入4℃冰箱保存?zhèn)溆?，用時(shí)以雙蒸水配成低、中、高濃度(150 mg/mL、300 mg/mL、600 mg/mL)。

1.4 動(dòng)物分組、給藥及建模方法 將小鼠隨機(jī)均分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、氨溴索組以及白花九里明低、中、高濃度組，每組10只。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予0.9%氯化鈉注射液灌胃，氨溴索組給予4.3 mg/mL鹽酸氨溴索溶液灌胃，白花九里明低、中、高濃度組分別給予150 mg/mL、300 mg/mL、600 mg/mL的白花九里明提取液灌胃。灌胃30 min后，正常對(duì)照組給予0.9%氯化鈉注射液，其余組給予0.2%四氯化碳腹腔注射。灌胃每天1次，腹腔注射隔天1次，共30 d，灌胃和腹腔注射的用量均按小鼠體質(zhì)量計(jì)算，10 mL/kg。根據(jù)民間治療用量，將白花九里明按體表面積換算成小鼠用量[1-2]，根據(jù)臨床用于治療肺部疾病藥物的用量，將氨溴索換算成小鼠用量進(jìn)行灌胃[7]。

1.5 小鼠肺懸液的制備 末次灌胃前禁食12 h、禁水2 h，末次灌胃30 min開胸取肺加冰凍0.9%氯化鈉注射液，用手持臺(tái)式兩用均質(zhì)器攪拌制成10%肺勻漿，將裝有肺勻漿的試管放入4℃低溫離心機(jī)以3 000 r/min的速度離心10 min，分離上清液制備成肺懸液。

1.6 肺懸液SOD活性、丙二醛含量檢測(cè) 按照SOD測(cè)試盒、丙二醛測(cè)試盒說(shuō)明書，采用多功能酶標(biāo)儀分別檢測(cè)肺懸液SOD活性(羥胺法，波長(zhǎng)550 nm)、丙二醛含量(硫代巴比妥酸法，波長(zhǎng)532 nm)的吸光度值，再根據(jù)測(cè)試盒說(shuō)明書提供的公式計(jì)算肺懸液的SOD活性和丙二醛含量。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以(x±s)表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

模型對(duì)照組的SOD活性低于其他5組(均P<0.05)，但其他組間兩兩比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。模型對(duì)照組的丙二醛含量高于其他5組，白花九里明低濃度組、白花九里明中濃度組的丙二醛含量均高于正常對(duì)照組(均P<0.05)，而其他組間兩兩比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 6組小鼠肺懸液SOD活性和丙二醛含量比較(x±s)

注：與正常對(duì)照組比較，*P<0.05；與模型對(duì)照組比較，#P<0.05。

3 討 論

丙二醛含量間接反映機(jī)體組織細(xì)胞受到自由基攻擊而發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化的嚴(yán)重程度；SOD能清除機(jī)體自由基，其活力間接反映了機(jī)體清除氧自由基的能力[8-9]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型對(duì)照組的肺懸液SOD活性低于正常對(duì)照組，丙二醛含量高于正常對(duì)照組(均P<0.05)，提示該組小鼠肺組織細(xì)胞發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化、SOD消耗增多，這是由肺組織受到自由基攻擊造成肺組織細(xì)胞損傷所致，可見(jiàn)四氯化碳誘發(fā)肺損傷模型制備成功。

白花九里明有護(hù)肝、降壓、止血、鎮(zhèn)痛、消炎等作用[3-6]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，白花九里明低濃度組和中濃度組的丙二醛含量高于正常對(duì)照組，且低于模型對(duì)照組(均P<0.05)，提示這兩組小鼠的肺組織細(xì)胞出現(xiàn)脂質(zhì)過(guò)氧化損傷，但損傷程度輕于模型對(duì)照組，說(shuō)明低、中濃度白花九里明能在一定程度上減輕四氯化碳對(duì)肺組織細(xì)胞的損傷；白花九里明高濃度組、氨溴索組的丙二醛含量均低于模型對(duì)照組(均P<0.05)，且與正常對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，提示這兩組小鼠的肺組織細(xì)胞沒(méi)有出現(xiàn)明顯脂質(zhì)過(guò)氧化損傷，說(shuō)明高濃度白花九里明和氨溴索能抵抗四氯化碳對(duì)肺組織細(xì)胞的損傷。此外，白花九里明低、中、高濃度組和氨溴索組的SOD活性均高于模型對(duì)照組(均P<0.05)，而與正常對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，提示白花九里明和氨溴索能增加肺組織細(xì)胞的SOD活性，增強(qiáng)肺組織清除氧自由基的能力。

鹽酸氨溴索可促進(jìn)肺泡表面活性物質(zhì)生成、降低痰黏度和增強(qiáng)支氣管黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)，具有改善通氣和保護(hù)肺功能的作用[7，10]。本實(shí)驗(yàn)中，白花九里明各濃度組的丙二醛含量和SOD活性與氨溴索組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，提示白花九里明和氨溴索的作用相似。

綜上所述，白花九里明可提高肺組織細(xì)胞的SOD活性，抵抗自由基對(duì)肺組織的攻擊，從而減輕四氯化碳對(duì)肺組織細(xì)胞的損害，與氨溴索的作用效果相似，有望成為新一代防治肺部炎癥的藥物。但白花九里明能否促進(jìn)肺泡表面活性物質(zhì)生成和支氣管黏膜纖毛運(yùn)動(dòng)有待進(jìn)一步研究。