茹 平,黃 剛

(1.西安市第八醫(yī)院檢驗(yàn)科，西安 710061；2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科, 陜西 咸陽 712000)

橋本甲狀腺炎(Hashimoto’s thyroiditis,HT)是一種由免疫介導(dǎo)的自身免疫性疾病[1]。研究指出,白細(xì)胞分化抗原(cluster of differentiation,CD)195和單核細(xì)胞趨化蛋白1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)與甲狀腺的免疫紊亂有關(guān)[2-3]。筆者通過分析HT患者外周血液MCP-1和 CD195水平的變化與HT 的相關(guān)性,進(jìn)而為HT的臨床干預(yù)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2017年7月～ 2019年 7月期間在西安市第八醫(yī)院和陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院就診的82例HT患者作為研究對(duì)象,依據(jù)患者甲狀腺功能狀況分為正常組和甲狀腺功能減退(甲減)組。其中正常組40例，女性33例，男性7例，平均年齡46.2±11.7歲,病程2.63 ±3.28年；甲減組42例，女性35例，男性 7例，平均年齡49.3±12.3歲,病程2.79 ±3.17年。HT 診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《中國甲狀腺疾病診治指南》[4]：甲狀腺彌漫性腫大；血清甲狀腺球蛋白抗體或甲狀腺過氧化物酶抗體(thyroid peroxidase antibody,TPO-Ab)滴度明顯升高(>50%)即可診斷；若患者臨床表現(xiàn)不典型，則需抗體滴度連續(xù)二次 ≥60%，同時(shí)患者甲狀腺超聲結(jié)果需呈現(xiàn)彌漫性甲狀腺腫大伴低回聲。選擇35例同期體檢健康者作為對(duì)照組。排除標(biāo)準(zhǔn):伴有其他內(nèi)臟器官惡性腫瘤者;近 3 個(gè)月伴有感染者;其他自身免疫性疾病患者。各組研究對(duì)象的年齡、性別構(gòu)成無明顯差異，正常組和甲減組的病程比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究已獲得西安市第八醫(yī)院和陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并得到所有研究對(duì)象的知情同意。

1.2 試劑和儀器 MCP-1水平檢測(cè)試劑盒由上海江萊生物科技有限公司提供，CD195水平檢測(cè)采用 FACS Scan 流式細(xì)胞儀(美國 BD 公司)，異硫氰酸熒光素標(biāo)記的鼠抗人CD195抗體購自深圳晶美生物工程有限公司。所有研究對(duì)象均接受甲狀腺超聲檢查,采用 Phlip IU22 彩色超聲診斷儀(探頭頻率為10MHz)，正常值參考范圍為 FT3: 2.7～6.5 pmo1/L， FT4: 11.5～22.7 pmol/L，TSH: 0.35～5.5 uIU/ml， TPO-Ab:0～34IU/ml。

1.3 方法

1.3.1 研究方法：觀察所有研究對(duì)象的外周血液CD195,MCP-1,TSH,FT3,FT4和TPO-Ab水平的變化,并對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行甲狀腺超聲檢查.MCP-1水平檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附法，CD195水平采用流式細(xì)胞儀分析，TSH,FT3,FT4及TPO-Ab水平檢測(cè)采用電化學(xué)發(fā)光法。

1.3.2 血樣采集：所有研究對(duì)象禁食12h后被抽取靜脈血10ml，分成兩管各5ml。將一管血液樣本以3 000 r/min 離心分離血清，-20℃保存?zhèn)溆?用于檢測(cè)MCP-1,TSH,FT3,FT4和TPO-Ab水平，另一管血樣用于檢測(cè)CD195陽性細(xì)胞百分比。

1.3.3 外周血液CD195水平檢測(cè)：將研究對(duì)象的靜脈血按照1∶1的比例用磷酸鹽緩沖液進(jìn)行稀釋，取圓底離心管加入等體積的淋巴細(xì)胞分離液，離心分離淋巴細(xì)胞.將細(xì)胞懸浮液以3 000 r/min離心5min，潤洗，并加入異硫氰酸熒光素標(biāo)記的鼠抗人CD195抗體，避光孵育，采用相同方法制作不加入抗體的陰性對(duì)照待測(cè)液。采用流式細(xì)胞儀分析CD195陽性細(xì)胞百分比。

1.3.4 甲狀腺超聲檢查：所有研究對(duì)象檢查時(shí)保持仰臥位，頭部抬高將頸前部充分暴露，采用二維超聲模式觀察甲狀腺大小、形態(tài)及回聲等，測(cè)量甲狀腺雙葉前后徑及峽部厚徑；然后采用彩色多普勒超聲模式觀察甲狀腺血流情況。顯露右側(cè)頸外動(dòng)脈后，沿頸外動(dòng)脈追蹤其第一分支(甲狀腺上動(dòng)脈)，待頻譜圖像穩(wěn)定后，叮囑患者屏住呼吸，取甲狀腺上動(dòng)脈連續(xù)三個(gè)以上心動(dòng)周期的譜圖圖像， 測(cè)量其收縮期峰值流速(peak systolic velocity,PSV)、 舒張末期流速及血流阻力指數(shù)等指標(biāo)。本研究選擇峽部厚徑和PSV指標(biāo)進(jìn)行分析.

2 結(jié)果

2.1 HT患者甲狀腺超聲分析 見表1。82例HT 患者甲狀腺表現(xiàn)為不同程度的彌散性腫大, 53 例患者出現(xiàn)峽部增厚,雙側(cè)甲狀腺實(shí)質(zhì)回聲不均勻增粗、偏高，其中70例患者甲狀腺內(nèi)部可見網(wǎng)格狀回聲或條索狀強(qiáng)回聲。甲減組和正常組的峽部厚徑及PSV均高于對(duì)照組,其中甲減組的峽部厚徑和PSV增高更顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

2.2 HT患者甲狀腺功能分析 見表1。甲減組的血清FT3和FT4水平均顯著低于對(duì)照組和正常組,而甲減組的TPO-Ab和TSH水平則顯著高于對(duì)照組和正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。正常組的TPO-Ab水平高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。正常組TSH,FT3和FT4水平與對(duì)照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.3 HT患者外周血液MCP-1和CD195水平分析 見表1。甲減組和正常組的MCP-1水平和CD195陽性細(xì)胞百分比均高于對(duì)照組,其中甲減組的MCP-1水平和CD195陽性細(xì)胞百分比增高更顯著，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

2.4 相關(guān)性分析 在甲減組和正常組中，MCP-1水平和CD195陽性細(xì)胞百分比分別呈正相關(guān)性(r=0.835,0.819,均P<0.01)。在甲減組中,MCP-1水平和CD195陽性細(xì)胞百分比分別與TSH,TPO-Ab,PSV及峽部厚徑呈正相關(guān)性，而與FT3和FT4水平呈負(fù)相關(guān)性(rMCP-1=0.827,0.798,0.809,0.772,-0.789,-0.821,均P<0.01;rCD195=0.813,0.803,0.791,0.783,-0.807,-0.843,均P<0.01)。在正常組中,MCP-1水平和CD195陽性細(xì)胞百分比分別與TPO-Ab水平,PSV及峽部厚徑呈正相關(guān)性(rMCP-1=0.772,0.813,0.805,均P<0.01;rCD195=0.763,0.799,0.817,均P<0.01)。

表1 HT患者甲狀腺功能和超聲及外周血液MCP-1和CD195水平分析

3 討論

HT是最常見的甲狀腺自身免疫性疾病，也是引起甲狀腺功能減退的主要原因[5]。研究表明,碘是合成甲狀腺激素的重要化學(xué)物質(zhì)，低碘或高碘營養(yǎng)都會(huì)增加甲狀腺疾病的風(fēng)險(xiǎn)，過量的碘會(huì)增加自身免疫性甲狀腺炎的發(fā)生率[4]。 研究證實(shí)MCP-1是趨化因子家族的成員之一,其主要由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌[6]。CHEN等[7]研究認(rèn)為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氧化應(yīng)激可誘導(dǎo)MCP-1等因子的過度表達(dá),該過程可能與甲狀腺疾病的發(fā)生有關(guān)。他們發(fā)現(xiàn)MCP-1在非正常濃度碘處理的甲狀腺細(xì)胞中呈現(xiàn)較高的表達(dá),而在異常碘處理的甲狀腺細(xì)胞中加入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激阻滯劑后,MCP-1的表達(dá)則明顯降低?，F(xiàn)已證實(shí)碘的營養(yǎng)狀況通過影響機(jī)體的氧化應(yīng)激及甲狀腺激素水平等參與HT的致病過程[3]。劉銳等[8]的研究顯示HT患者血清MCP-1 的表達(dá)顯著升高。然而，碘，MCP-1和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氧化應(yīng)激在甲狀腺疾病發(fā)病過程中的相關(guān)性尚不完全清楚[3]，本研究分析82例HT患者的結(jié)果顯示甲減組MCP-1 水平顯著增高,相關(guān)性分析顯示甲減組MCP-1水平與 TSH,FT3,FT4和TPOAb水平及PSV,甲狀腺峽部厚徑呈顯著相關(guān)性，提示MCP-1升高可能造成甲狀腺的自身免疫性損傷進(jìn)而促進(jìn)HT的進(jìn)展,進(jìn)一步地研究顯示HT正常組TSH,FT3,FT4水平與對(duì)照組比較無差異,而正常組的MCP-1水平則高于對(duì)照組,且與TPOAb,PSV及甲狀腺峽部厚徑有顯著相關(guān)性,提示MCP-1水平的變化可以較早地評(píng)價(jià)HT的發(fā)生和發(fā)展。

CD195是CD4+T淋巴細(xì)胞特異性表面因子。研究證實(shí) CD195與甲狀腺的免疫紊亂有關(guān)[2]。李存杰等[9]的研究顯示CD195可調(diào)節(jié) HT 患者細(xì)胞免疫的活性,其過度表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞免疫過度活躍進(jìn)而破壞甲狀腺細(xì)胞,造成甲狀腺功能減退，他們發(fā)現(xiàn)HT患者接受治療后CD195陽性細(xì)胞百分比及TPO-Ab水平均顯著降低。袁曉嵐等[2]的研究也印證了上述觀點(diǎn),并且還發(fā)現(xiàn)甲減組HT患者治療后CD195水平仍高于健康對(duì)照組,且HT甲狀腺功能正常組CD195水平也顯著高于健康對(duì)照組，相關(guān)性分析顯示 HT 甲減組患者CD195陽性細(xì)胞百分比與TSH及TPO-Ab有明顯相關(guān)性。本研究的結(jié)果也與上述文獻(xiàn)的結(jié)論相符。提示CD195的異常表達(dá)可能誘導(dǎo)細(xì)胞免疫活性的增加,進(jìn)而導(dǎo)致HT患者的甲狀腺功能減退。但有關(guān)CD195在 HT 甲狀腺功能減退中的價(jià)值仍需進(jìn)一步研究。

綜上所述，外周血液MCP-1和CD195水平與HT的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),其具體機(jī)制可通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步明確。本研究通過檢測(cè)外周血液MCP-1和CD195水平,為HT的早期診斷提供了新思路,并為HT的治療提供了更多的依據(jù)。