翟珂

作者單位：450052 河南省鄭州市骨科醫(yī)院

動(dòng)脈硬化發(fā)病因素較多，脂質(zhì)代謝異常為其最重要的危險(xiǎn)因素，空腹低密度脂蛋白膽固醇（LDLC）升高及高密度脂蛋白膽固醇（HDLC）降低將增加心血管發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。LDLC 是評(píng)估動(dòng)脈硬化的主要指標(biāo)，HDLC 則是抗動(dòng)脈硬化的重要脂質(zhì)顆粒，兩者在動(dòng)脈硬化病變中有一定的預(yù)測價(jià)值[1]。有研究顯示apoA1、apoB 及其比值與動(dòng)脈硬化有一定關(guān)系，并對(duì)心血管危險(xiǎn)性的預(yù)測價(jià)值較常規(guī)脂質(zhì)指標(biāo)高[2]。apoB 為LDLC 顆粒的主要蛋白，可釋放多種炎性產(chǎn)物，促進(jìn)動(dòng)脈硬化進(jìn)展；apoA1 是HDLC 的主要蛋白質(zhì)成分，有抗血栓形成、內(nèi)皮功能保護(hù)及抑制動(dòng)脈硬化發(fā)生和發(fā)展等作用[3]；apoB/apoA1 比值可反映致動(dòng)脈硬化指標(biāo)和抗動(dòng)脈硬化指標(biāo)之間的動(dòng)態(tài)平衡[4]。雖然目前臨床有關(guān)動(dòng)脈硬化患者血脂指標(biāo)餐后情況的報(bào)道較多，但仍存在諸多爭議，并且有關(guān)脂餐負(fù)荷前后脂代謝指標(biāo)的動(dòng)態(tài)變化和動(dòng)脈硬化關(guān)系的研究不多，考慮到動(dòng)物脂肪代謝指標(biāo)檢測結(jié)果以及動(dòng)脈硬化評(píng)估結(jié)果更為精準(zhǔn)，我們對(duì)納入的12 只家兔展開實(shí)驗(yàn)研究，旨在探討脂餐負(fù)荷前后脂代謝的動(dòng)態(tài)變化及其與動(dòng)脈硬化的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及主要試劑、儀器以12 只健康雄性家兔（由我省醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供）為研究對(duì)象，體重2～3kg，平均（2.58±0.23）kg，月齡5 個(gè)月。主要試劑：膽固醇（上海生物工程有限公司，CDO122-50g）、速眠新Ⅱ（獸醫(yī)店購買，070031582），LDLC、HDLC 檢測試劑盒（德賽診斷系統(tǒng)有限公司），apoA1、apoB 檢測試劑盒（浙江伊利康生物技術(shù)有限公司），HE 染色劑由我院病理科提供；主要儀器：離心機(jī)（TDZ5-WS）、自動(dòng)生化分析儀（UniCel DxC 800，Beckman Coulter）、超聲診斷儀（意大利Esaoto 公司）、顯微鏡（Olympus BX53 光學(xué)顯微鏡照相系統(tǒng)）等。

1.2 研究方法①動(dòng)物模型建立：12 只健康家兔均單籠喂養(yǎng)，單純高脂飲食（1%膽固醇、8%蛋黃、91%基礎(chǔ)飼料）喂養(yǎng)8 周，分別于初始階段、喂養(yǎng)4 周、8 周給予脂餐負(fù)荷，每日喂養(yǎng)飼料100g。②血脂指標(biāo)測定：分別于初始階段、第4、8 周對(duì)家兔進(jìn)行耳緣靜脈采血，收集空腹和餐后2、4、8h 靜脈血各2ml，全自動(dòng)生化分析儀測定LDLC、HDLC、apoB、apoA1，并計(jì)算apoB/apoA1 比值。③動(dòng)脈硬化病變?cè)u(píng)分：參照兔主動(dòng)脈硬化病變分級(jí)記分法，分為1～4 級(jí)計(jì)分，內(nèi)中膜無增厚而管腔內(nèi)膜面光整為1 分，內(nèi)中膜增厚為2 分，管壁增厚伴管腔內(nèi)膜面不光整或粗糙為3 分，觀察到彌漫分布斑塊回聲為4 分。④病理結(jié)果：納入家兔均在8 周后用20%烏拉坦麻醉后，將其頸動(dòng)脈、胸主動(dòng)脈、腹主動(dòng)脈、股動(dòng)脈及冠狀動(dòng)脈分離，分離血管行大體檢查后，生理鹽水輕沖洗，10%甲醛固定24h，乙醇脫水石蠟包埋后，切片常規(guī)行HE 染色，記錄血管壁結(jié)構(gòu)變化以確定動(dòng)脈粥樣硬化情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，計(jì)量資料用±s表示，組間對(duì)比分別行χ2、t檢驗(yàn)，組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)LDLC、HDLC、apoB、apoA1 及apoB/apoA1 水平比較采用重復(fù)測量數(shù)據(jù)方差分析（F檢驗(yàn)），服從正態(tài)分布各變量間相關(guān)性比較采用Pearson 直線相關(guān)性分析，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 動(dòng)脈硬化病變?cè)u(píng)分情況初始階段、喂養(yǎng)第4周、第8 周，家兔動(dòng)脈硬化病變?cè)u(píng)分分別為（1.02± 0.10）分、（1.78±0.25）分、（2.79±0.26）分，經(jīng) 重復(fù)測量方差分析提示，隨著脂餐負(fù)荷時(shí)間延長，實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ图彝脛?dòng)脈硬化病變?cè)u(píng)分隨之明顯升高（F=12.356，P<0.05）。

2.2 血清LDLC、HDLC 動(dòng)態(tài)變化隨著高脂飲食時(shí)間延長，血清LDLC 水平呈升高趨勢，8 周內(nèi)脂餐負(fù)荷前最高，餐后降低；8 周內(nèi)脂餐負(fù)荷后HDLC水平較負(fù)荷前降低，隨著動(dòng)脈硬化進(jìn)展，各時(shí)間段HDLC 水平均呈降低趨勢，見表1。

2.3 血清apoB、apoA1 動(dòng)態(tài)變化隨著高脂飲食時(shí)間延長，脂餐負(fù)荷后apoB 水平均呈上升趨勢，4 周內(nèi)脂餐負(fù)荷后8h apoB 水平最低；8 周時(shí)apoA1 水平有下降趨勢，8 周時(shí)脂餐負(fù)荷后4h apoA1 水平最高，見表2。

表1 12 只家兔血清LDLC、HDLC 動(dòng)態(tài)變化（±s，mmol/L）

表1 12 只家兔血清LDLC、HDLC 動(dòng)態(tài)變化（±s，mmol/L）

時(shí)間 LDLC 動(dòng)態(tài)變化 HDLC 動(dòng)態(tài)變化空腹 餐后2h 餐后4h 餐后8h 空腹 餐后2h 餐后4h 餐后8h初始階段 0.60±0.49 0.43±0.55 0.42±0.60 0.52±0.39 0.50±0.07 0.45±0.12 0.44±0.09 0.42±0.09第4 周 5.62±2.02 3.95±1.98 4.18±2.15 3.44±2.82 1.16±0.25 1.04±0.26 1.02±0.25 1.00±0.22第8 周 12.56±0.91 11.17±1.12 11.09±1.22 10.26±1.80 1.30±0.27 1.25±0.24 1.23±0.22 1.25±0.25

表2 12 只家兔血清apoB、apoA1 動(dòng)態(tài)變化（±s，g/L）

表2 12 只家兔血清apoB、apoA1 動(dòng)態(tài)變化（±s，g/L）

時(shí)間 apoB 動(dòng)態(tài)變化 apoA1 動(dòng)態(tài)變化空腹 餐后2h 餐后4h 餐后8h 空腹 餐后2h 餐后4h 餐后8h初始階段 0.02±0.04 0.04±0.03 0.04±0.03 0.01±0.01 0.40±0.03 0.39±0.02 0.39±0.03 0.38±0.02第4 周 0.17±0.08 0.16±0.10 0.16±0.09 0.12±0.11 0.41±0.04 0.41±0.03 0.42±0.04 0.41±0.04第8 周 0.29±0.11 0.26±0.12 0.25±0.11 0.25±0.12 0.33±0.07 0.32±0.06 0.35±0.05 0.34±0.04

2.4 血清apoB/apoA1 比值變化隨著高脂飲食時(shí)間延長，apoB/apoA1 比值在第8 周時(shí)最高，第4 周后脂餐負(fù)荷后呈下降趨勢，見表3。

表3 12 只家兔血清apoB/apoA1 比值動(dòng)態(tài)變化（±s）

表3 12 只家兔血清apoB/apoA1 比值動(dòng)態(tài)變化（±s）

時(shí)間 空腹 餐后2h 餐后4h 餐后8h初始階段 0.06±0.09 0.09±0.07 0.10±0.07 0.03±0.02第4 周 0.45±0.22 0.40±0.25 0.39±0.19 0.30±0.24第8 周 1.22±1.27 0.94±0.92 0.61±0.52 0.62±0.67

2.5 血脂指標(biāo)與動(dòng)脈硬化進(jìn)展程度相關(guān)性分析Pearson 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，脂餐負(fù)荷前后LDLC、apoB 水平及apoB/apoA1 比值與動(dòng)脈硬化病變?cè)u(píng)分呈正相關(guān)（r=0.327、0.405、0.398，P<0.01），HDLC、apoA1 與動(dòng)脈硬化病變?cè)u(píng)分呈負(fù)相關(guān)（r=-0.335、-0.392，P<0.01）。

3 討論

研究表明LDLC 升高、HDLC 降低是顱內(nèi)外動(dòng)脈硬化的重要危險(xiǎn)因素[5，6]；隨著臨床對(duì)動(dòng)脈硬化研究的不斷深入，apoB、apoA1 及兩者比值在動(dòng)脈硬化形成中的作用成為研究熱點(diǎn)。早期Tang 等[7]研究提示血清apoB、apoA1 等可有效預(yù)測冠狀動(dòng)脈疾病進(jìn)展情況。由鳳秋等[8]研究指出對(duì)動(dòng)脈硬化性腦梗死患者進(jìn)行血脂調(diào)節(jié)時(shí)，除監(jiān)測TC、TG、LDLC、HDLC水平外，還應(yīng)同時(shí)觀察apoB、apoA1 及apoB/apoA1比值變化。李煥敏等[9]的研究表明，在急性缺血性卒中患者中，apoB 水平和apoB/apoA1 比值增高是顱內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，apoA1水平增高為顱內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄的獨(dú)立保護(hù)因素。國內(nèi)外有關(guān)apoB、apoA1 在心血管疾病發(fā)生中作用的研究雖然較多，而對(duì)于脂餐負(fù)荷前后脂代謝指標(biāo)的動(dòng)態(tài)變化及其與動(dòng)脈硬化的關(guān)系仍存在諸多爭議。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著高脂飲食時(shí)間延長，8 周內(nèi)脂餐負(fù)荷前LDLC 最高，餐后降低，8 周內(nèi)脂餐負(fù)荷后HDLC 水平較負(fù)荷前降低，隨著動(dòng)脈硬化進(jìn)展，各時(shí)間段HDLC 水平均呈降低趨勢。隨著高脂飲食時(shí)間延長，空腹及脂餐負(fù)荷后apoB 水平呈上升趨勢，4 周內(nèi)脂餐負(fù)荷后8h apoB 水平最低，8 周時(shí)apoA1 水平有下降趨勢，8 周時(shí)脂餐負(fù)荷后4h apoA1 水平最高。隨著高脂飲食時(shí)間延長，apoB/apoA1 比值在第8 周時(shí)最高，第4 周后脂餐負(fù)荷前后呈下降趨勢，表明隨著動(dòng)脈硬化進(jìn)展，LDLC 水平明顯升高，機(jī)體抗動(dòng)脈硬化能力明顯增強(qiáng)，脂餐負(fù)荷后apoB 清除增快。相關(guān)性分析結(jié)果提示，脂餐負(fù)荷前后LDLC、apoB 水平及apoB/apoA1 比值與動(dòng)脈硬化病變?cè)u(píng)分呈正相關(guān)，HDLC、apoA1 與動(dòng)脈硬化病變?cè)u(píng)分呈負(fù)相關(guān)，初步證實(shí)了LDLC、HDLC、apoB、apoA1 及apoB/apoA1 比值的動(dòng)態(tài)變化在評(píng)估動(dòng)脈硬化程度中有明確的臨床參考價(jià)值。

apoA1 是HDLC 的主要載脂蛋白，可作為HDLC的結(jié)構(gòu)蛋白并維持其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性和完整性[10]，還可作為一種輔助因子，參與激活卵巢脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶活性，使其游離膽固醇酯化，參與膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)過程，防止動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病，是延緩動(dòng)脈硬化的一種保護(hù)因子，apoA1 及HDLC表達(dá)水平與動(dòng)脈硬化程度呈負(fù)相關(guān)[11]。apoB 受體結(jié)合區(qū)可與靶細(xì)胞LDLC 受體結(jié)合，介導(dǎo)血漿中LDLC 受體決定性蛋白質(zhì)，參與動(dòng)脈硬化生理病理過程[12]，apoB、LDLC 水平與動(dòng)脈硬化呈正相關(guān)，apoB/apoA1 比值變化與動(dòng)脈硬化也呈明顯正相關(guān)。本研究結(jié)果表明，HDLC 在脂餐前后變化幅度較小，因而空腹?fàn)顟B(tài)下LDLC、HDLC 水平更能預(yù)測動(dòng)脈硬化程度，而餐后apoA1、apoB 和apoB/apoA1 比值動(dòng)態(tài)變化更能反映動(dòng)脈硬化的進(jìn)展情況[13]。

基于以上分析，脂餐負(fù)荷前后apoA1、apoB 及apoB/apoA1 比值動(dòng)態(tài)變化與動(dòng)脈硬化程度有明顯相關(guān)性，臨床工作中應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)測患者血清脂質(zhì)水平變化，對(duì)評(píng)估疾病進(jìn)展和指導(dǎo)合理防治措施有重要意義。