劉俊 應(yīng)璇 董揚 王文標(biāo)

(金華市人民醫(yī)院心血管內(nèi)科,浙江 金華 321000)

房顫是最常見的心律失常類型之一，其發(fā)病率為1%～2%〔1〕。房顫最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一是體循環(huán)血栓栓塞，特別是腦卒中。房顫可引起運動耐力降低、室性心律失常、心動過速心肌病和心衰等并發(fā)癥〔2〕。目前房顫的藥物轉(zhuǎn)復(fù)并維持竇律療效差，射頻消融術(shù)對于持續(xù)性房顫患者單次成功率也僅有37.5%～55.0%〔3〕。目前國內(nèi)外持續(xù)性房顫藥物治療及非藥物治療療效差，而房顫的基因治療可能尚需較長時日方能成為現(xiàn)實，建議還是強(qiáng)調(diào)房顫的一級預(yù)防，早期發(fā)現(xiàn)，個體化治療及預(yù)后判定等〔3～5〕。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展和人類基因組研究的深入，引起房顫的分子機(jī)制仍未明確，雖家族性房顫相關(guān)的遺傳學(xué)研究已取得一定進(jìn)展，但并未確定哪種基因突變是最常見的致病基因〔6，7〕。 本研究探討KCNE1、KCNE2基因多態(tài)性與家族性房顫的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 納入的62例房顫患者選擇于金華市人民醫(yī)院2017年1～12月。納入標(biāo)準(zhǔn)：①根據(jù)24 h動態(tài)心電圖或體表心電圖診斷；②年齡65～85歲；③獲得知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并瓣膜型心臟病、肺心病、先天性心臟病、心包炎及甲狀腺功能亢進(jìn)等；②精神疾病者。62例房顫患者中，男38例，女24例；年齡65～78〔平均(71.54±3.97)〕歲；其中家族性房顫39例，非家族性房顫23例。另選擇同期健康體檢者30例作為對照組，男18例，女12例；年齡67～79〔平均(72.18±5.46)〕歲。各組一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2方法 采集各組受試者外周靜脈血3 ml，進(jìn)行DNA測序，以天根生化磁珠提取DNA試劑盒自動化提取外周白細(xì)胞基因組DNA，且以PCR重測序法測定KCNE1基因rs1805127位點A/G和KCNE2基因rs1805120位點C/T基因多態(tài)性。引物序列由上海生工生物工程技術(shù)有限服務(wù)有限公司提供，引物序列為：KCNE1基因rs1805127位點上游引物5′-AGGAGACAGTTCAGCAGG-3′，下游引物5′-TTCAACGACATAGCACGAC-3′；KCNE2基因rs1805120位點上游引物5′-CAGAGATGTCATCGCTCCTG-3′，下游引物5′-TCCACCCCACTACCTCCCACC-3′。PCR擴(kuò)增條件：采用95℃條件下預(yù)變性5 min；反應(yīng)循環(huán)：采用95℃條件下變性30 s、58℃條件下退火30 s、72℃條件下延伸30 min，循環(huán)35次；最后采用72℃條件下末端延伸5 min后，冷卻PCR產(chǎn)物至4℃。PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像分析儀中拍照檢測；回收PCR產(chǎn)物，測序上機(jī)。

1.3觀察指標(biāo) ①觀察各組KCNE1基因rs1805127位點A、G等位基因分布情況；②觀察各組KCNE1基因rs1805127位點AA、AG、GG基因型頻率分布情況；③觀察各組KCNE2基因rs1805120位點C、T等位基因分布情況；④觀察各組KCNE2基因rs1805120位點CC、CT、TT基因型頻率分布情況。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 運用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS19.0進(jìn)行t、χ2檢驗。

2 結(jié) 果

2.1各組KCNE1基因rs1805127位點A/G等位基因分布比較 家族性房顫組和非家族性房顫組KCNE1基因rs1805127位點A等位基因分布率明顯低于對照組，而G等位基因分布率明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；而家族性房顫組和非家族性房顫組KCNE1基因rs1805127位點A和G等位基因分布率比較無明顯差異(P>0.05)，見表1。

2.2各組KCNE1基因rs1805127位點AA、AG、GG基因型頻率分布比較 家族性房顫組和非家族性房顫組KCNE1基因rs1805127位點GG基因型分布率明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；而家族性房顫組和非家族性房顫組KCNE1基因rs1805127位點GG基因型分布率比較無明顯差異(P>0.05)，各組AA、AG基因型分布率無明顯差異(P>0.05)，見表2。

2.3各組KCNE2基因rs1805120位點C/T等位基因分布比較 各組KCNE2基因rs1805120位點C和T等位基因分布率比較無明顯差異(P>0.05)，見表3。

2.4各組KCNE2基因rs1805120位點C/T基因型頻率分布比較 各組KCNE2基因rs1805120位點CC、CT和TT基因型頻率比較無明顯差異(P>0.05)，見表4。

表1 各組KCNE1基因rs1805127位點A/G等位基因分布率比較〔n(%)〕

與對照組比較：1)P<0.05，下表同

表2 各組KCNE1基因rs1805127位點AA、AG、GG基因型頻率分布比較〔n(%)〕

表3 各組KCNE2基因rs1805120位點C/T等位基因分布比較〔n(%)〕

表4 各組KCNE2基因rs1805120位點C/T基因型頻率分布比較〔n(%)〕

3 討 論

家族性房顫患者發(fā)病年齡相對較輕，無明確基礎(chǔ)心臟疾病，占房顫患者的2%～16%〔8～10〕。家族性房顫相關(guān)基因通常主要是編碼某個離子通道，并且基因表達(dá)異常會造成組成某一種離子通道的蛋白缺失及結(jié)構(gòu)異常，從而導(dǎo)致離子通道功能受到影響〔11～13〕。因此，針對家族性房顫基因定位不僅是明確了突變的位點，同時還需明確房顫時離子通道異常的原因所在〔14～16〕。

心肌細(xì)胞上分布眾多離子通道，而其中這些離子通道上相關(guān)基因多態(tài)改變，從而導(dǎo)致出現(xiàn)離子通道重構(gòu)，進(jìn)一步導(dǎo)致心房肌細(xì)胞動作電位受影響，而增加房顫的易患性〔17〕。其中認(rèn)為在眾多離子通道中，鉀離子通道相關(guān)基因多肽改變與房顫發(fā)生關(guān)系緊密。KCNE1基因不僅能夠編碼β亞單位，同時還能夠與α亞單位基因共同構(gòu)成緩慢激活延遲整流鉀通道〔18～20〕。本研究表明，房顫發(fā)生與rs1805127多態(tài)性具有相關(guān)性，并且認(rèn)為等位基因G可能為家族性房顫易感基因。KCNE2基因為一種瞬時外向鉀離子通道編碼基因。研究報道顯示，短QT綜合征患者家族中心室及心房的有效不應(yīng)期明顯縮短，且經(jīng)程控電刺激誘導(dǎo)出室顫和房顫，且經(jīng)基因分析顯示KCNE2基因第1 764位胞嘧啶核苷酸被鳥嘌呤核苷酸替代，并且相應(yīng)的其所編碼的第588位天冬氨酸變?yōu)橘嚢彼幔识J(rèn)為KCNE2基因N588K突變與房顫發(fā)生具有一定的相關(guān)性〔21〕。本研究表明，KCNE2基因位點rs1805120多態(tài)性與家族性房顫無明顯相關(guān)性。