袁洪超，高顯超，徐 進(jìn)，成世強(qiáng)，賀菁菁

(1.陜西金慧方中藥科技有限公司，陜西 鎮(zhèn)巴 723600；2.鎮(zhèn)巴縣科技進(jìn)步促進(jìn)中心，陜西 鎮(zhèn)巴 723600)

淫羊藿為小檗科植物淫羊藿(Epimedium brevicomu Maxim.)、箭葉淫羊藿(Epimedium sagittatum (Sieb.et Zucc.) Maxim.)、巫山淫羊藿(Epimedium wushanense T.S.Ying)柔毛淫羊藿(Epimedium pubescens Maxim.)或朝鮮淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai)的干燥葉。夏、秋季莖葉茂盛時(shí)采收，曬干或陰干[1]。是中國(guó)藥典規(guī)定基源最多的藥材之一。主要用于陽(yáng)萎早泄，腰酸腿痛，四肢麻木，半身不遂，神經(jīng)衰弱，健忘，耳鳴，目眩等癥。淫羊藿喜陰濕環(huán)境，適生于林下、溝邊等濕度和遮陰度較高的生境。野生資源主要分布陜西、甘肅、山西、河南、青海、湖北、四川、廣西、吉林、遼寧、浙江、安徽等地。栽培主要分布在陜西、重慶、湖北等地[2-4]。淫羊藿對(duì)土壤有極為嚴(yán)格的要求，以中性酸或稍偏堿、疏松、含腐殖質(zhì)、有機(jī)質(zhì)豐富的土壤油沙壤土為好[5-7]。藥典規(guī)定淫羊藿有效成份主要是總黃酮和淫羊藿苷[1]，已有研究表明：現(xiàn)有分布的淫羊藿有效成份含量絕大多數(shù)都不符合藥典標(biāo)準(zhǔn)[3]。本研究針對(duì)鎮(zhèn)巴縣分布的不同品種淫羊藿有效成分進(jìn)行測(cè)定，從而了解鎮(zhèn)巴縣不同品種淫羊藿質(zhì)量情況，為今后鎮(zhèn)巴縣淫羊藿產(chǎn)業(yè)發(fā)展、品種選育和種植提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

淫羊藿苷(成都普思生物科技股份有限公司，批號(hào)：16081202)，乙腈(色譜純，美國(guó)賽默飛公司)，甲醇(色譜純，美國(guó)賽默飛公司)。

1.2 主要儀器

美國(guó)Agilent 1260 高效液相色譜儀(安捷倫科技有限公司)；細(xì)胞型18108 摩爾超純水機(jī)(重慶摩爾水處理設(shè)備有限公司)；JA26038 電子天平(上海精科天美科學(xué)儀器有限公司)；KQ-500E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；LK-2000A 小型粉碎機(jī)(常州德杜精密儀器有限公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)材料來(lái)自于陜西金慧方中藥科技有限公司對(duì)鎮(zhèn)巴縣淫羊藿資源考察采樣，淫羊藿(Epimedium brevicomu Maxim.)來(lái)源于鎮(zhèn)巴縣長(zhǎng)嶺鎮(zhèn)中壩村；箭葉淫羊藿(Epimedium sagittatum (Sieb.et Zucc.)來(lái)源于鎮(zhèn)巴縣小洋鎮(zhèn)白河村；巫山淫羊藿(Epimedium wushanense T.S.Ying)來(lái)源于鎮(zhèn)巴縣鹽場(chǎng)鎮(zhèn)柳家河村。取干燥葉，低溫烘干，粉碎過(guò)3號(hào)篩，備用。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(5um，250mm×4.6mm)；流速：1.0mL/min；柱溫箱：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：270；流動(dòng)相為乙腈-水(30：70)等度洗脫。

1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液的制備

精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品1.0007mg，置于10mL的棕色容量瓶中，加入一定量的甲醇后置于超聲溶解，在用甲醇稀釋至刻度。

1.4.3 樣品溶液的制備

精密稱取粉碎過(guò)篩備用的巫山淫羊藿、箭葉淫羊藿、淫羊藿樣品0.2g，精密稱定，置于帶塞的錐形瓶中，精密加入稀乙醇20mL，稱定重量，超聲處理1小時(shí)，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，取過(guò)濾液，備用。

1.4.4 精密度實(shí)驗(yàn)

取對(duì)照溶液，按照1.4.1的色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣相同的體積，記錄標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積。

1.4.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

稱取同一批號(hào)的藥材，按照1.4.2方法，依法制備5份。在按照1.4.1的色譜條件測(cè)定淫羊藿苷的含量。

1.4.6 加樣回收率

精密稱取5份淫羊藿樣品各0.1g，加入1mL淫羊藿苷對(duì)照品溶液，按照1.4.3的方法制備，測(cè)定含量，計(jì)算加樣回收率(%)。

1.4.7 含量的測(cè)定

稱取不同品種淫羊藿樣品各0.2g，按照1.4.3方法制備，制備樣品溶液，在1.4.1色譜條件下，測(cè)定含量，采用外標(biāo)法計(jì)算淫羊藿苷的成分含量(%)。

2 結(jié)果與分析

2.1 淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品圖譜

如圖1所示，淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖。

圖1 淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

2.2 精密度考察

淫羊藿苷的峰面積平均分別為2292.67，RSD值為0.27%；結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.3 重復(fù)性考察

淫羊藿苷的含量為0.63%，RSD值為1.8%；結(jié)果表明該方法測(cè)定結(jié)果重復(fù)性良好。

2.4 加樣回收率

淫羊藿苷加樣回收率為100.4%，RSD值為0.38%；淫羊藿苷的加樣回收率在95%～110%之間，RSD值小于3%，符合要求。

表1 淫羊藿苷加樣回收率實(shí)驗(yàn)

2.5 含量測(cè)定

中國(guó)藥典質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，按照干品計(jì)算，本品含淫羊藿苷不低于0.5%，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，淫羊藿苷含量在淫羊藿和巫山淫羊藿中符合藥典規(guī)定，箭葉淫羊藿中淫羊藿苷的含量未達(dá)藥典規(guī)定。綜合以上分析顯示，鎮(zhèn)巴縣淫羊藿和巫山淫羊藿的品質(zhì)符合藥典要求。

表2 鎮(zhèn)巴縣不同品種淫羊藿樣品中淫羊藿含量的測(cè)定

3 結(jié)論與討論

淫羊藿苷含量是藥典規(guī)定評(píng)價(jià)淫羊藿質(zhì)量的重要指標(biāo)，秦為瀚[3]等通過(guò)對(duì)不同產(chǎn)地15個(gè)品種淫羊藿的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究表明：僅有黔北、天平山、柔毛3個(gè)品種達(dá)標(biāo)，其中天平山僅有30%的樣品達(dá)標(biāo)，柔毛僅有46%樣品達(dá)標(biāo)；本研究針對(duì)鎮(zhèn)巴縣域內(nèi)3個(gè)不同品種的淫羊藿品質(zhì)研究表明，通過(guò)對(duì)3個(gè)品種淫羊藿的淫羊藿苷的含量測(cè)定并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析；結(jié)果表明：鎮(zhèn)巴縣域內(nèi)分布的3種淫羊藿，其中淫羊藿和巫山淫羊藿的有效成份淫羊藿苷含量均達(dá)到藥典標(biāo)準(zhǔn)。