徐文慧，常麗靜，段連政，姜柔齊，宮喜艷，陳 新，邱智東

（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春 130117）

黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.var.mongholicus（Bge.）Hsiao 或膜莢黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.的干燥根，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[1]，在《本草綱目》中稱為“補(bǔ)藥之長(zhǎng)”。黃芪具有補(bǔ)氣升陽(yáng)，固表斂汗，利水消腫，生津養(yǎng)血，行滯通痹，托毒排膿，斂瘡生肌等功效[2-5]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前約15%臨床使用的方劑中均含有黃芪，且多作為君藥使用，2018 年國(guó)家發(fā)布了《古代經(jīng)典名方目錄（第一批）》[6]100 首，其中10%的方劑中含有黃芪。黃芪藥材質(zhì)量的優(yōu)劣直接關(guān)系到黃芪臨床應(yīng)用的功效，因此如何提高黃芪藥材質(zhì)量的優(yōu)質(zhì)性、穩(wěn)定性和可控性是目前亟待解決的問(wèn)題。

黃芪的入藥部位為地下部分的根系，其為雙子葉植物，屬于直根系。直根系由主根、側(cè)根及纖維根組成，但在實(shí)際處理黃芪藥材過(guò)程中，常稱其纖維根為須根?！吨袊?guó)藥典》2015年版中規(guī)定黃芪為春、秋二季采挖，除去須根和根頭，曬干。黃芪中主要成分為皂苷類、黃酮類及多糖類[7-9]，其中黃芪甲苷和毛蕊異黃酮葡萄糖苷為其有效成分，也作為其質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分。本次研究通過(guò)對(duì)不同產(chǎn)地、不同部位黃芪藥材中的黃芪甲苷和毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量進(jìn)行檢測(cè)、對(duì)比、分析，旨在為黃芪藥材入藥部位的合理應(yīng)用提供依據(jù)，提高黃芪藥材臨床應(yīng)用的科學(xué)性、合理性，尤其為制備均一、可控的經(jīng)典名方“物質(zhì)基準(zhǔn)”提供優(yōu)質(zhì)藥材資源。

1 材料

1.1 儀器 FA2004B 型電子天平（上海天美天平儀器有限公司），安捷倫1260 高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司），KQ-250B 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），SY-2000 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠），DZKW-4 電子恒溫水浴鍋（北京中興偉業(yè)儀器有限公司），DE-100g 萬(wàn)能高速粉碎機(jī)（浙江紅景天工貿(mào)有限公司）。

1.2 試劑 黃芪甲苷對(duì)照品（批號(hào)：110781-201616，純度97.4%，中國(guó)食品藥品檢定研究院），毛蕊異黃酮葡萄糖苷對(duì)照品（批號(hào)：111920-201606，純度97.6%，中國(guó)食品藥品檢定研究院）。甲醇（分析純，北京化工廠），乙醇（分析純，北京化工廠），正丁醇（分析純，北京化工廠），氨水（分析純，西隴科學(xué)股份有限公司），甲酸（色譜純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所），乙腈（色譜純，美國(guó)Fisher 公司），屈臣氏蒸餾水（廣州屈臣氏食品飲料有限公司），娃哈哈純凈水（吉林娃哈哈啟力飲料有限公司）。

1.3 藥材 不同產(chǎn)地黃芪藥材樣品10 批，經(jīng)長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)張景龍教授鑒定均為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.var.mongholicus（Bge.）Hsiao 的干燥根。各黃芪樣品產(chǎn)地見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)用黃芪藥材采集情況

將各產(chǎn)地黃芪樣品按各部位分開(kāi)，即根頭、主根、側(cè)根、纖維根以及地下全株，分別用粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，過(guò)篩，使其全部通過(guò)四號(hào)篩，將藥材粉末分別裝于自封袋中，于干燥陰涼處密封保存。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃芪甲苷的含量測(cè)定 黃芪甲苷的含量測(cè)定方法參照《中國(guó)藥典》2015 年版。

2.1.1 色譜條件 色譜柱為ZORBAX Eclipse Plus C18，流動(dòng)相為乙腈—水（32:68），對(duì)照品進(jìn)樣量為10 μL，20 μL，供試品進(jìn)樣量為10 μL，柱溫為25 ℃。蒸發(fā)光檢測(cè)器參數(shù)：蒸發(fā)器溫度60 ℃，霧化器溫度60 ℃，載氣流速1.2SLM。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 取黃芪甲苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL 含0.5 mg 的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 按《中國(guó)藥典》2015 年版一部黃芪藥材[含量測(cè)定]項(xiàng)下黃芪甲苷含測(cè)供試品溶液的制備方法，制備黃芪藥材不同部位含測(cè)供試品溶液。

2.1.4 供試樣品含量測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液10 μL、20 μL，供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。

2.2 毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量測(cè)定 毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量測(cè)定方法參照《中國(guó)藥典》2015 年版。

2.2.1 色譜條件 色譜柱為ZORBAX Eclipse Plus C18，以乙腈為流動(dòng)相A，以0.2%甲酸溶液為流動(dòng)相B，采用梯度洗脫：0～20 min，20%～40%A，80%～60%B；20～30 min，40%A，60%B；流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量為10 μL，柱溫為 25 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為260 nm。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成1 mL含50 μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 按《中國(guó)藥典》2015 年版一部黃芪藥材[含量測(cè)定]項(xiàng)下毛蕊異黃酮葡萄糖苷含測(cè)供試品溶液的制備方法，制備黃芪藥材不同部位含測(cè)供試品溶液。

2.2.4 供試樣品含量測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

2.3 黃芪甲苷含量測(cè)定結(jié)果 按2.1 項(xiàng)下方法對(duì)10 批不同產(chǎn)地黃芪不同部位黃芪甲苷含量進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2，測(cè)定結(jié)果顯示，其中纖維根中黃芪甲苷含量最高，而根頭中黃芪甲苷含量最低。

2.4 毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量測(cè)定結(jié)果 按2.2 項(xiàng)下方法對(duì)10 批不同產(chǎn)地黃芪不同部位毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3，測(cè)定結(jié)果顯示，其中主根中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量最高，而根頭中毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量最低。

表2 不同產(chǎn)地黃芪不同部位黃芪甲苷含量測(cè)定結(jié)果（，n=6） %

表2 不同產(chǎn)地黃芪不同部位黃芪甲苷含量測(cè)定結(jié)果（，n=6） %

表3 不同產(chǎn)地黃芪不同部位毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量測(cè)定結(jié)果（，n=6） %

表3 不同產(chǎn)地黃芪不同部位毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量測(cè)定結(jié)果（，n=6） %

3 分析與討論

3.1 不同產(chǎn)地黃芪不同部位黃芪甲苷含量相關(guān)性分析 以黃芪甲苷含量為參數(shù)對(duì)黃芪藥材不同部位，即根頭、主根、側(cè)根、纖維根及地下全株進(jìn)行聚類分析，結(jié)果（圖1）表明黃芪藥材的不同部位黃芪甲苷含量存在顯著性差異，聚類分析的結(jié)果表明，當(dāng)歐式距離為10 時(shí)，黃芪藥材中的不同部位根據(jù)其黃芪甲苷的含量差異大致可分為三大類，其中主根、側(cè)根和地下全株為一類，而其中主根和側(cè)根的黃芪甲苷含量最為相似，而纖維根含量較高，根頭含量較低，二者與其他部位差異較大，故纖維根及根頭各為單獨(dú)一類。

3.2 不同產(chǎn)地黃芪不同部位毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量相關(guān)性分析 以毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量為參數(shù)對(duì)黃芪藥材不同部位，即根頭、主根、支根、須根及全株進(jìn)行聚類分析，結(jié)果（圖2）表明黃芪藥材的不同部位毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量存在顯著性差異，聚類分析的結(jié)果表明，黃芪藥材中的不同部位根據(jù)其毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量差異大致可分為三大類，其中主根、側(cè)根含量最為接近，因此為一類，而其纖維根與地下全株為一類，根頭含量較低，故根頭單獨(dú)為一類。

圖1 不同部位黃芪甲苷含量聚類分析結(jié)果

圖2 不同部位毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量聚類分析結(jié)果

3.3 討論 該次實(shí)驗(yàn)中選用十批不同產(chǎn)地黃芪，包括甘肅、河北、內(nèi)蒙古等地，均為黃芪的道地主產(chǎn)區(qū)，具有一定代表性。采用HPLC-ELSD 法對(duì)十批不同產(chǎn)地黃芪不同部位黃芪甲苷進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果表明黃芪藥材各部位中主根和側(cè)根黃芪甲苷含量接近，而纖維根黃芪甲苷含量最高，約為其主根和側(cè)根的近3倍，根頭中黃芪甲苷含量最低。據(jù)研究表明，黃芪甲苷是黃芪正性肌力作用的主要活性成分[10]，其還具有廣泛的藥理作用，如調(diào)節(jié)免疫[11]、缺血保護(hù)、心臟保護(hù)、抗炎、抗氧化、抗病毒和抗腫瘤等作用[12-15]。而《中國(guó)藥典》2015 年版中規(guī)定黃芪為春、秋二季采挖，除去須根和根頭，曬干。因此在黃芪的實(shí)際產(chǎn)地加工過(guò)程中，多采用“揉搓”等方式對(duì)黃芪原藥材進(jìn)行處理[16]，大量破壞其纖維根及側(cè)根，這就造成了黃芪甲苷的大量浪費(fèi)。因此建議能夠取下黃芪原藥材纖維根，對(duì)黃芪甲苷成分進(jìn)行提取處理，讓黃芪藥材得到合理化應(yīng)用，避免資源的大量浪費(fèi)。

另一含測(cè)指標(biāo)毛蕊異黃酮葡萄糖苷也為黃芪中主要藥效成分，其具有抗氧化、抗病毒、抗癌、降血糖、神經(jīng)保護(hù)、骨骼保護(hù)、改善疲勞等多方面的藥理作用[17-18]。根據(jù)以上對(duì)不同部位的黃芪甲苷及毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)兩含量指標(biāo)中，主根、側(cè)根均為一類，說(shuō)明其含量相似度較高，雖然纖維根中黃芪甲苷含量較高，但其毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量則明顯低于主根及側(cè)根，因此若對(duì)纖維根進(jìn)行保留，在實(shí)際黃芪藥材檢驗(yàn)中則會(huì)造成部分黃芪藥材毛蕊異黃酮葡萄糖苷含測(cè)結(jié)果不合格，而且由于采收方式及運(yùn)輸方式的影響，造成各批次黃芪藥材中纖維根占比差異較大，嚴(yán)重影響黃芪藥材質(zhì)量的穩(wěn)定性，因此不建議在原藥材中保留纖維根。

綜上所述，在黃芪原藥材處理過(guò)程中，應(yīng)將其纖維根完整取下，并對(duì)其黃芪甲苷進(jìn)行提取加以應(yīng)用，有效避免資源浪費(fèi)。本實(shí)驗(yàn)證明了黃芪藥材處理的科學(xué)性及合理性，讓黃芪藥材得到了更加合理、有效的應(yīng)用。