宋建坤，蒯仂 ，茹意，羅楹，迮侃，李福倫，李欣，孫曉穎，李斌

(1.上海中醫(yī)藥大學(xué)，上海 201203； 2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院皮膚科，上海 200437)

皮膚是保護人體免受外界傷害的外在屏障，由表皮、真皮及皮下三層構(gòu)成。皮膚受損后，真皮細(xì)胞對不同水平調(diào)控過程的協(xié)同作用是必不可少的[1]。創(chuàng)面愈合主要經(jīng)歷兩個階段：炎癥期，各種炎癥細(xì)胞浸潤到傷口部位，清除病原體，分泌細(xì)胞因子和生長因子[2]；修復(fù)期，創(chuàng)面細(xì)胞外基質(zhì)開始重建，包括血管生成、肉芽組織形成、膠原纖維沉積、上皮化和創(chuàng)面收縮，接著瘢痕組織成熟，Ⅲ型膠原被Ⅰ型膠原取代，創(chuàng)面愈合[3-4]。全基因組的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究表明，人類基因組被大量的非編碼RNA(non-coding RNAs,ncRNAs)廣泛轉(zhuǎn)錄，包括微RNA(microRNA，miRNA)、長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)和環(huán)狀RNA(circular RNA，circRNA)[5]。ncRNAs是近年來發(fā)現(xiàn)的對細(xì)胞生理學(xué)和病理學(xué)具有重要作用的基因調(diào)控因子。ncRNAs占人類細(xì)胞轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的近60%，在發(fā)育和病理環(huán)境中ncRNA被證明可以調(diào)節(jié)細(xì)胞過程和通路[6]。ncRNAs參與創(chuàng)面愈合的全過程，研究ncRNAs與創(chuàng)面愈合之間的相互關(guān)系有助于更好地了解其在創(chuàng)面愈合中對信號通路的作用及調(diào)控機制，并為創(chuàng)面治療提供新靶點。現(xiàn)就ncRNAs與創(chuàng)面愈合的研究進展予以綜述。

1 miRNA與創(chuàng)面愈合

miRNA是一類在物種進化中相當(dāng)保守，長度為18～25個核苷酸序列的小分子單鏈RNA。miRNA的轉(zhuǎn)錄初產(chǎn)物在細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)錄，被核糖核酸酶-脫氧核糖核酸酶切割成前體miRNA。輸出蛋白5將前體miRNA運輸?shù)郊?xì)胞質(zhì)中，進一步切割形成成熟miRNA。之后，miRNA與RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體結(jié)合形成siRNA誘導(dǎo)基因沉默復(fù)合物——miRNA復(fù)合物，作為翻譯抑制劑降解靶mRNA，在轉(zhuǎn)錄后水平負(fù)性調(diào)控靶基因的表達。

1.1miRNA在創(chuàng)面炎癥期的作用 炎癥反應(yīng)是愈合創(chuàng)面的首要條件，miRNA異常表達影響促炎與抗炎信號的精細(xì)調(diào)節(jié)，導(dǎo)致創(chuàng)面促炎/抗炎信號失衡，引起過度的慢性炎癥影響創(chuàng)面愈合。慢性炎癥反應(yīng)也會影響角質(zhì)形成細(xì)胞介導(dǎo)的上皮化進程(角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖、遷移等)，不利于啟動后續(xù)的組織修復(fù)程序。在創(chuàng)面愈合的炎癥階段，白細(xì)胞通過受損的血管進入傷口，這是一種由化學(xué)引誘物介導(dǎo)的過程，如轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、血小板衍生生長因子等。參與創(chuàng)面炎癥期的miRNA主要有miR-155、miR-21、miR-146、miR-223、miR-203等。其中促進炎癥反應(yīng)的為miR-155，抑制炎癥反應(yīng)的有miR-21、miR-146、miR-223、miR-203。

miR-155是最早與Toll樣受體配體、炎癥細(xì)胞因子和特異性抗原誘導(dǎo)的炎癥相關(guān)的miRNA之一。Yang等[7]在創(chuàng)面邊緣注射miR-155拮抗劑，發(fā)現(xiàn)促炎因子白細(xì)胞介素(interleukin,IL)-1β、TNF-α減少，抗炎因子IL-10增加，下調(diào)miR-155可能通過減少難愈合創(chuàng)面過度的炎癥反應(yīng)，提高創(chuàng)面愈合質(zhì)量。

miR-21是人類疾病中最常見的上調(diào)miRNA之一，在細(xì)胞增殖、分化、凋亡和上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymal transition，EMT)中發(fā)揮重要作用。miR-21促進成纖維細(xì)胞遷移，并使得生長因子分泌及其他細(xì)胞類型向創(chuàng)面遷移，從而加速糖尿病創(chuàng)面愈合過程[8]。Das等[9]研究發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞中miR-21的高表達促進了靶基因人第10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源基因的磷酸酶和重組人程序性細(xì)胞死亡4的分泌和沉默，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生更多的抗炎細(xì)胞因子IL-10，同時抑制炎癥介質(zhì)(TNF-α)的釋放，促進創(chuàng)面凋亡細(xì)胞清除，加速創(chuàng)面愈合。

miR-146是巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞中細(xì)胞因子和病原體產(chǎn)物(如脂多糖)誘導(dǎo)的miRNA之一。研究發(fā)現(xiàn)，miR-146a/b通過靶向泛素連接酶TNF受體相關(guān)因子6和IL-1受體相關(guān)激酶1負(fù)調(diào)控樹突狀細(xì)胞凋亡，減少促炎細(xì)胞因子IL-6、TNF-α的表達，抑制炎癥的發(fā)展[10]。Xu等[11]研究發(fā)現(xiàn)miR-146a的低表達與糖尿病潰瘍創(chuàng)面異常炎癥反應(yīng)有關(guān)。Zhou等[12]研究發(fā)現(xiàn)吞噬細(xì)胞和上皮細(xì)胞中的miR-223協(xié)同抑制上皮細(xì)胞中的經(jīng)典核因子κB(nuclear factor kappa-B，NF-κB)途徑，減少促炎因子和趨化因子的釋放，從而起到控制炎癥的作用。

TNF-α和IL-24是角質(zhì)形成細(xì)胞系和原代角質(zhì)形成細(xì)胞中miR-203的直接靶標(biāo)，miR-203通過下調(diào)細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制蛋白基因家族成員以及促炎細(xì)胞因子來微調(diào)或平衡細(xì)胞因子信號，創(chuàng)傷皮膚中miR-203的增加可能是抗炎反應(yīng)的一部分[13]。Benakanakere等[14]研究發(fā)現(xiàn)，上皮細(xì)胞表面Toll樣受體2的表達受miR-105表達的負(fù)調(diào)控，該機制可能降低炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生，減少炎癥反應(yīng)。

1.2miRNA在創(chuàng)面修復(fù)期的作用 創(chuàng)面修復(fù)期主要包括增殖和重塑兩個階段。增殖階段主要涉及再上皮化和血管生成，重塑階段與膠原蛋白的沉積至關(guān)重要。

1.2.1miRNA在增殖階段的作用 在傷口愈合的情況下，EMT由細(xì)胞因子如TGF-β驅(qū)動，并且是角質(zhì)形成細(xì)胞向創(chuàng)面中心遷移所必需的。在正常的傷口愈合中，該過程導(dǎo)致再上皮化。參與這一過程的miRNA主要有miR-21、miR-31、miR-155、miR-203、miR-204、miR-205、miR-210等。其中促上皮化的有miR-21、miR-31、miR-155，抑制上皮化的有miR-203、miR-204、miR-205、miR-210。

Yang等[15]研究發(fā)現(xiàn)，miR-21可能通過抑制組織金屬蛋白酶抑制因子3和T淋巴瘤侵襲轉(zhuǎn)移誘導(dǎo)因子1的表達，促進角質(zhì)形成細(xì)胞在體外遷移，促進創(chuàng)面在體內(nèi)愈合。Li等[16]研究發(fā)現(xiàn)miR-31在傷口邊緣化細(xì)胞中表達上調(diào)，通過抑制其靶基因上皮膜蛋白1，促進角質(zhì)形成細(xì)胞增殖和遷移。此外，miR-31還能通過靶向Ras/促分裂原活化的蛋白激酶信號通路促進角質(zhì)形成細(xì)胞遷移和增殖，因此miR-31是皮膚創(chuàng)面角質(zhì)形成細(xì)胞從炎癥階段向再上皮化階段轉(zhuǎn)變的重要細(xì)胞內(nèi)在調(diào)控因子[17]。miR-155通過上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶-2的水平，加速角質(zhì)形成細(xì)胞的遷移，促進創(chuàng)面愈合和再上皮化，且不影響創(chuàng)面收縮[18]。

miR-203是表皮中最豐富的角質(zhì)形成細(xì)胞特異性miRNA，具有抗增殖作用。miR-203直接靶向轉(zhuǎn)錄因子p63，通過限制表皮干/祖細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖潛能和誘導(dǎo)細(xì)胞周期退出，促進表皮分化[19]。Deppe等[20]研究證實,下調(diào)miR-203可以加快角質(zhì)形成細(xì)胞增殖和遷移的靶蛋白的表達，以改善損傷皮膚的再上皮化。miR-204在角膜上皮中高表達，但是在角膜創(chuàng)面愈合過程中表達下調(diào)。因此，下調(diào)miR-204可以促進上皮細(xì)胞的增殖和遷移，利于創(chuàng)面愈合[21]。miR-205在角質(zhì)形成細(xì)胞遷移、再上皮化過程中起重要作用。有報道顯示，miR-205的下調(diào)導(dǎo)致絲氨酸-蘇氨酸激酶1的活性增加，肌動蛋白切斷絲切蛋白的磷酸化，以及絲狀肌動蛋白的相應(yīng)減少，抑制角質(zhì)形成細(xì)胞的遷移，延長創(chuàng)面的愈合[22]。Biswas等[23]發(fā)現(xiàn)在缺血性創(chuàng)面中出現(xiàn)大量缺氧誘導(dǎo)因子-1α，誘導(dǎo)miR-210表達，導(dǎo)致細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白E2F3表達下調(diào)，限制細(xì)胞增殖。在創(chuàng)面愈合過程中，miR-210下調(diào)可促進角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖，加快創(chuàng)面的閉合。

血管生成是增殖階段的另一個特征。創(chuàng)面的血管分布與其愈合能力密切相關(guān)，通過在整個傷口愈合過程中提供支持組織再生的營養(yǎng)物，促進血管生成，對傷口愈合及預(yù)后至關(guān)重要。促血管生成的miRNA主要有miR-146a、miR-4530、miR-148b、miR-23a、miR-126、miR-424等。抑制血管生成的miRNA有miR-218、miR-200b、miR-1、miR-29b、miR-939、miR-21、miR-377等。

miR-146a除抑制促炎細(xì)胞因子釋放外，還能增強血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)的表達。研究發(fā)現(xiàn)miR-146a通過靶向p21激活激酶1基因，刺激VEGF表達和血管分支的形成，促進新生血管的形成[24]。miR-4530具有刺激內(nèi)皮細(xì)胞血管生成的能力。Zhang等[25]研究發(fā)現(xiàn)miR-4530可能通過抑制乳腺癌細(xì)胞中血管生成抑制蛋白的表達，從而促進血管再生。Miscianinov等[26]研究顯示，在內(nèi)皮細(xì)胞中miR-148b具有促進血管生成的重要作用，其抑制作用通過調(diào)控靶基因TGF-β2和母親DPP同源物2(果蠅)(Smad)促進內(nèi)皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的過程。上調(diào)miR-148b可增加內(nèi)皮細(xì)胞的遷移、增殖和血管生成，加速創(chuàng)面的閉合，下調(diào)miR-148b可上調(diào)創(chuàng)面內(nèi)皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化表達，使得創(chuàng)面閉合受損。miR-23a通過抑制脯氨酰羥化酶1和2導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞中缺氧誘導(dǎo)因子-1α的積累，促進血管生成。同時，miR-23a還抑制緊密連接蛋白閉鎖小帶蛋白，從而增加血管通透性，上調(diào)miR-23a可以促進血管再生，加快創(chuàng)面愈合[27]。Jansen等[28]發(fā)現(xiàn)miR-126通過內(nèi)皮細(xì)胞微粒轉(zhuǎn)運到受體人冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞中，并調(diào)控靶蛋白SPRED1(EVH1 domain-containing protein 1)，促進血管內(nèi)皮細(xì)胞的修復(fù)。miR-424靶向通過靶向Cullin 2蛋白，增加缺氧誘導(dǎo)因子-1α在細(xì)胞內(nèi)的水平，抑制其蛋白酶體降解。升高的缺氧誘導(dǎo)因子-1α增加VEGF和人源葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白的轉(zhuǎn)錄，表明上調(diào)miR-424可以促進血管形成[29]。

Zhang等[30]發(fā)現(xiàn)miR-218可能通過靶向ROBO1(細(xì)胞黏附分子免疫球蛋白超家族成員)基因介導(dǎo)血管叢破壞，抑制腫瘤的生長。同樣地，在創(chuàng)傷愈合過程中，下調(diào)miR-218的表達能促進血管生成。miR-200家族通過控制細(xì)胞遷移和極性，在EMT過程中起重要作用。Chan等[31]發(fā)現(xiàn)miR-200b負(fù)調(diào)控人微血管內(nèi)皮細(xì)胞中的Ets-1相關(guān)基因，即基質(zhì)金屬蛋白酶-1和VEGF受體2，下調(diào)miR-200b能夠促進血管生成。miR-21能夠抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，是一種強有力的抗血管生成因子[32]。Xie等[33]研究發(fā)現(xiàn)下調(diào)miR-1可以激活血管生成前信號通路，促進VEGFA的表達，刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移。有研究報道，miR-29b通過靶向蛋白激酶3抑制乳腺癌細(xì)胞中VEGF和c-myc的表達，證明了miR-29b在抗血管生成和抗腫瘤發(fā)生中的作用[34]。另一項研究表明miR-29b的過表達通過靶向信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3信號通路抑制宮頸癌細(xì)胞的體外侵襲、EMT過程和血管生成，抑制腫瘤生長和體內(nèi)新生血管形成[35]。在創(chuàng)面愈合過程中，miR-29可能通過靶向蛋白激酶3和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3信號通路抑制新生血管生成。miR-939在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞過表達顯著抑制細(xì)胞增殖、黏附和成管，通過直接靶向γ聯(lián)蛋白來消除血管完整性并抑制血管生成[36]。在創(chuàng)面愈合中，下調(diào)miR-939可以促進內(nèi)皮細(xì)胞增殖和血管生成。體內(nèi)外的研究均證實過表達miR-377可以抑制食管癌的生長和血管生成[37]。同樣，下調(diào)miR-377可能通過直接結(jié)合其3′非編碼區(qū)來調(diào)節(jié)CD133和VEGF，促進血管形成。

1.2.2miRNA在重塑階段的作用 傷口愈合的重塑階段涉及組織的膠原沉積，與瘢痕的形成和成熟密切相關(guān)。Ⅰ型膠原蛋白(collagen typeⅠ,Col1)是細(xì)胞外基質(zhì)的主要組成部分，其無序積累可導(dǎo)致瘢痕形成。參與重塑階段的miRNA主要有miR-98、miR-141-3p、miR-29b、miR-185等。

Bi等[38]用miR-98模擬物轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞后，Col1α1基因表達顯著下降，導(dǎo)致細(xì)胞活力下降和細(xì)胞凋亡增加，用miR-98抑制劑轉(zhuǎn)染細(xì)胞，結(jié)果相反。因此，下調(diào)miR-98可以促進皮膚成纖維細(xì)胞中的Col1α1基因表達，加快創(chuàng)面愈合。生長因子受體結(jié)合蛋白2相關(guān)的接頭蛋白1是miR-141-3p的直接靶點，其在瘢痕組織中表達上調(diào)。研究發(fā)現(xiàn)miR-141-3p通過抑制接頭蛋白1表達降低皮膚成纖維細(xì)胞的增殖和遷移，促進細(xì)胞凋亡，下調(diào)miR-141-3p誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞分泌膠原，促進創(chuàng)面愈合[39]。miR-29b及其家族成員(miR-29s)主要通過調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)代謝參與創(chuàng)傷愈合和組織纖維化，通過抑制TGF-β1/Smad/結(jié)締組織生長因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，減少過度瘢痕形成[40]。Zhu等[41]研究發(fā)現(xiàn)miR-29b可能通過轉(zhuǎn)錄后抑制熱激蛋白47的表達，在皮膚創(chuàng)傷愈合過程中降低膠原合成和血管生成。因此，下調(diào)miR-29b能誘導(dǎo)膠原合成，促進創(chuàng)面愈合。Xiao等[42]研究發(fā)現(xiàn)過表達的miR-185可以抑制成纖維細(xì)胞的生長，其潛在機制可能是通過抑制TGF-β1和Col1的表達來介導(dǎo)的。

2 lncRNA與創(chuàng)面愈合

lncRNAs是一類長度超過200個核苷酸的非蛋白編碼轉(zhuǎn)錄本。由于具有結(jié)合DNA、RNA和蛋白質(zhì)的能力，其作用機制可大致分為：①轉(zhuǎn)錄活性的分子信號；②內(nèi)源誘餌結(jié)合并降低其他調(diào)節(jié)RNA的可用性或蛋白質(zhì)；③指導(dǎo)染色質(zhì)修飾復(fù)合物定位到靶DNA；④蛋白質(zhì)和轉(zhuǎn)錄物結(jié)合的結(jié)構(gòu)支架[43]。

2.1lncRNA在創(chuàng)面炎癥期的作用 參與創(chuàng)面炎癥期相關(guān)分子(如NF-κB、TNF-α、IL-6)表達調(diào)控的lncRNA主要有l(wèi)ncRNA-環(huán)加氧酶2(cyclooxygenase 2,COX-2)、Lethe、肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄子1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1，MALAT1)、lnc1992 THRIL、lnc-IL7R等。其中促進炎癥反應(yīng)的有l(wèi)ncRNA-COX2，抑制炎癥反應(yīng)的有Lethe、MALAT1、lnc1992 THRIL、lnc-IL7R。

Hu等[44]發(fā)現(xiàn)lncRNA-COX2在活化的巨噬細(xì)胞中的作用機制涉及形成含有l(wèi)ncRNA-COX2的染色質(zhì)重建復(fù)合物，所得到的復(fù)合物被募集到晚期炎癥基因的啟動子/增強子區(qū)域，調(diào)節(jié)NF-κB向復(fù)合物的募集，觸發(fā)染色質(zhì)重塑，并最終導(dǎo)致獲得NF-κB結(jié)合和基因轉(zhuǎn)錄的位點。

Lethe是一種假基因lncRNA，受NF-κB亞基RelA[v-rel網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病毒癌基因同源物(禽)]調(diào)控。在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞中，lncRNA Lethe可能通過直接與RelA同源二聚體結(jié)合，阻斷RelA結(jié)合DNA的能力，從而起到抑制NF-κB的效應(yīng)，發(fā)揮抗炎作用[45]。MALAT1是一種高度保守的lncRNA，敲除MALAT1可以增加脂多糖誘導(dǎo)的TNF-α和IL-6的表達[46]。在細(xì)胞核中，MALAT1與NF-κB的亞基p65和p50相互作用以抑制其DNA結(jié)合活性，從而減少促炎細(xì)胞因子TNF-α和IL-6的表達，抑制炎癥的發(fā)生[46]。lnc1992 THRIL又稱TNF-α和異構(gòu)核L核糖核蛋白相關(guān)的免疫調(diào)節(jié)lncRNA，它可以調(diào)節(jié)人類巨噬細(xì)胞對先天刺激的反應(yīng)。THRIL通過感應(yīng)TNF-α、IL-6、IL-8和CXC趨化因子配體10的表達調(diào)節(jié)Toll樣受體1/2激動劑的效能，Toll樣受體1/2激動劑受到刺激后，THRIL通過與人源全長重組蛋白形成RNA蛋白復(fù)合物，負(fù)調(diào)控TNF-α表達[47]。

lnc-IL7R能夠減少脂多糖誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，對血管細(xì)胞黏附分子-1、IL-6及IL-8具有負(fù)調(diào)節(jié)作用，通過削弱組蛋白H3的N端賴氨酸殘基K27甲基化，從而阻斷炎癥介質(zhì)的近端啟動因子對炎癥反應(yīng)進行調(diào)節(jié)[48]。

2.2lncRNA在創(chuàng)面修復(fù)期的作用

2.2.1lncRNA在增殖階段的作用 創(chuàng)面增殖期以血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖與角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖和遷移為主要表現(xiàn)。參與增殖階段的lncRNA主要有MALAT1、LINC00323-0、lncRNA-H19、lncRNA ANRIL(antisense non-coding RNA in the INK4 locus)、母系表達基因3(materally expressed gene 3，MEG3)等。其中促上皮化的有MALAT1、LINC00323-003、lncRNA-H19、lncRNA ANRIL，抑制上皮化的有MEG3。

MALAT1由TGF-β誘導(dǎo)，是內(nèi)皮細(xì)胞增殖的重要介質(zhì)。在體外與體內(nèi)實驗中，抑制內(nèi)皮細(xì)胞中MALAT1均可減少內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，導(dǎo)致血管生長缺陷，表明MALAT1對內(nèi)皮細(xì)胞、血管生成具有促進作用[49]。缺氧是一種強有力的促血管生成刺激物，并在內(nèi)皮細(xì)胞中誘導(dǎo)VEGF介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。LINC00323-003對缺氧高度敏感，對內(nèi)皮細(xì)胞的血管生成至關(guān)重要，下調(diào)lncRNA會導(dǎo)致離體誘導(dǎo)的基于多能干細(xì)胞的三維工程人心臟組織模型中的血管形成受損[50]。Tao等[51]發(fā)現(xiàn)lncRNA-H19的降低與糖尿病血管生成損傷之間可能存在通過阻斷l(xiāng)ncRNA-H19而導(dǎo)致胰島素-磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B通路受損的關(guān)系。Zhang等[52]發(fā)現(xiàn)過表達的lncRNA ANRIL通過激活NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑上調(diào)VEGF并促進血管生成。

MEG3是一種母系印跡基因編碼的lncRNA，Su等[53]發(fā)現(xiàn)MEG3水平與VEGF水平呈負(fù)相關(guān)，提示MEG3可能通過p53途徑抑制VEGF的表達。因此，下調(diào)MEG3可以促進血管生成。

2.2.2lncRNA在重塑階段的作用 在這一階段，成纖維細(xì)胞合成膠原纖維尤為重要，TGF-β、IL-4對膠原合成有明顯的促進作用[54]。參與調(diào)控膠原合成及瘢痕形成的lncRNA主要有l(wèi)ncRNA8975-1、lncAC097662.2、lncRP11-586K2.1、lncRNA8975-1、lncRNA Col1α2-AS1等。

lncRNA8975-1、AC097662.2和RP11-586K2.1分別與Col1α2、Col4α3和基質(zhì)金屬蛋白酶-16基因相關(guān)，參與趨化因子和TNF信號通路，可能影響膠原蛋白的合成或降解[55]。lncRNA AC067945.2的過表達下調(diào)皮膚成纖維細(xì)胞中的膠原蛋白表達，并可能與VEGF和Wnt信號通路相關(guān)[56]。Li等[57]通過實時熒光定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)分析發(fā)現(xiàn)lncRNA8975-1 在增生性瘢痕組織和真皮成纖維細(xì)胞中過表達。lncRNA8975-1過表達抑制增殖性瘢痕成纖維細(xì)胞中Col1α2、Col1α1、Col3α1和α-平滑肌肌動蛋白的細(xì)胞增殖并降低其蛋白表達水平，表明下調(diào)lncRNA8975-1可以促進成纖維細(xì)胞的增殖。Nong等[58]研究發(fā)現(xiàn)lncRNA Col1α2-AS1在增生性瘢痕組織和成纖維細(xì)胞中上調(diào)，通過促進Smad7表達抑制成纖維細(xì)胞增殖，同時也證實了miR-21參與lncRNA Col1α2-AS1誘導(dǎo)的Smad7表達，Col1α2-AS1作為內(nèi)源性海綿吸附miR-21，進而調(diào)節(jié)Smad7和分子級聯(lián)，在增生性瘢痕中發(fā)揮保護作用。

3 circRNA與創(chuàng)面愈合

circRNA是由mRNA前轉(zhuǎn)錄本的非序列反剪接形成的，在真核細(xì)胞中廣泛表達。它們最近被確定為多種生理和病理過程中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，通常作為miRNA海綿起作用，并參與miRNA介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的組成。此外，circRNA還具有與RNA結(jié)合蛋白相互作用、調(diào)節(jié)mRNA的穩(wěn)定性、調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄、翻譯蛋白等功能。

3.1circRNA在創(chuàng)面炎癥期的作用 circRNA 0044073、circARF3、circRNA_Atp9b是具有促炎作用的circRNA，下調(diào)其表達有利于減少創(chuàng)面炎癥反應(yīng)。

circRNA 0044073的過表達促進了人血管平滑肌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，有利于Janus激酶/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和炎癥的激活[59]。有證據(jù)顯示，Janus激酶/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子信號通路通過IL家族、干擾素家族及生長抑素影響巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞，從而參與創(chuàng)傷愈合過程。circARF3作為內(nèi)源性miR-103海綿起到抑制miR-103活性的作用，導(dǎo)致TNF受體相關(guān)因子3表達增加，而TNF受體相關(guān)因子3能夠阻斷NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，促進NOD樣受體蛋白3炎癥小體激活和炎癥細(xì)胞因子釋放[60]。Zhou等[61]用IL-1β刺激小鼠軟骨細(xì)胞后，發(fā)現(xiàn)circRNA_Atp9b表達顯著上調(diào)，敲低circRNA_Atp9b則促進了Ⅱ型膠原的表達，同時抑制了基質(zhì)金屬蛋白酶-13、COX-2和IL-6的產(chǎn)生，表明circRNA_Atp9b通過海綿miR-138-5p調(diào)控細(xì)胞外基質(zhì)分解代謝和炎癥。

3.2circRNA在創(chuàng)面修復(fù)期的作用

3.2.1circRNA在增殖階段的作用 circANRIL與雌激素受體共調(diào)節(jié)因子抗體同源物1結(jié)合，損害核酸外切酶介導(dǎo)的前核糖體RNA加工和血管平滑肌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中的核糖體生物合成。研究顯示，circANRIL可誘導(dǎo)核仁應(yīng)激和p53活化，進而增加細(xì)胞凋亡，降低增殖率[62]。

功能性研究發(fā)現(xiàn)，上調(diào)circRNA-肌球蛋白輕鏈激酶(myosin light chain kinase，MYLK)可以促進細(xì)胞增殖和遷移，在體內(nèi)外誘導(dǎo)EMT和血管生成，而下調(diào)circRNA-MYLK則相反。在機制上，circRNA-MYLK和VEGFA的非編碼區(qū)具有相同的miR-29a反應(yīng)元件，與miR-29a競爭性結(jié)合，通過拮抗miR-29a調(diào)控VEGFA的表達[63]。VEGFA還通過激活TGF-β信號，NF-κB和β聯(lián)蛋白途徑促成EMT的發(fā)生。因此，上調(diào)circRNA-MYLK可以促進細(xì)胞增殖和血管生成，加快創(chuàng)面的修復(fù)。

3.2.2circRNA在重塑階段的作用 實驗表明，circRNA_010567沉默可以上調(diào)miR-141，下調(diào)TGF-β1的表達，并抑制成纖維細(xì)胞中纖維化相關(guān)蛋白切除，包括Col1、Col3和α-平滑肌肌動蛋白，因此上調(diào)circRNA_010567可以促進膠原生成[64]。Yang等[65]通過動物實驗、聚合酶鏈反應(yīng)和細(xì)胞遷移實驗等發(fā)現(xiàn)circ-Amotl1的表達加速了成纖維細(xì)胞的增殖和遷移，進一步的機制研究發(fā)現(xiàn)異位circ-Amotl1可以增加信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3和DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3A的蛋白水平，增加纖維連接蛋白的表達，從而促進創(chuàng)面的愈合。

4 展 望

人類基因組大多是由ncRNAs組成，ncRNAs在創(chuàng)面愈合過程中扮演重要角色，參與調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)、再上皮化、血管生成和瘢痕形成，有望成為創(chuàng)面愈合的生物標(biāo)志和治療靶點。目前miRNA在創(chuàng)面愈合中的機制研究相對成熟，而lncRNA與circRNA對創(chuàng)面愈合的調(diào)控機制尚處于初始階段，有待進一步體內(nèi)外實驗及功能驗證。進一步研究ncRNAs在創(chuàng)傷愈合中各個階段的作用，并篩選其靶基因，將成為研究者今后努力的目標(biāo)。更好地理解創(chuàng)傷愈合的分子機制可能為慢性創(chuàng)面提供更好的治療和先進的解決方案。