范蕓， 歸巧娣， 施瑞潔， 解娟， 劉堯

(1.陜西省人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科, 陜西 西安 710068； 2.西安市華山中心醫(yī)院 檢驗(yàn)科, 陜西 西安 710043)

肺炎是兒科臨床中較常見的感染性疾病之一，尤其是秋冬季節(jié)的發(fā)病率較高[1-2]。肺炎主要由病毒、細(xì)菌等感染引發(fā)，根據(jù)病因不同，肺炎可分為細(xì)菌性肺炎、病毒性肺炎、支原體肺炎、衣原體肺炎及真菌性肺炎，以前3種較常見[3]。肺炎對(duì)患兒的心臟(中毒性心肌炎、心力衰竭)、大腦(嗜睡、煩躁不安、腦水腫、中毒性腦病)、胃腸(腹瀉、嘔吐、食欲減退、血便)等均可造成不同程度的損害[4]，盡早發(fā)現(xiàn)及鑒別診斷兒童肺炎感染類型對(duì)臨床治療及患兒預(yù)后具有重要意義。有研究發(fā)現(xiàn)，兒童肺炎的發(fā)病機(jī)制除了病原體直接侵入學(xué)說與呼吸道上皮吸附學(xué)說外，還可能與細(xì)胞免疫功能紊亂或失調(diào)有關(guān)[5-6]，患兒發(fā)病后其體內(nèi)正常的免疫平衡被打破[7]。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)菌感染性疾病患者體內(nèi)血清超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、降鈣素原(PCT)水平明顯上升，其敏感性及特異性均較高[8]。本研究通過檢測(cè)肺炎患兒入院時(shí)的血清hs-CRP、PCT及血液T淋巴細(xì)胞(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及CD4+CD25+)，觀察這些免疫指標(biāo)在不同病因患兒間的差異，探討上述指標(biāo)對(duì)兒童肺炎及其感染類型的鑒別診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年3-11月接受診斷治療的120例肺炎患兒作為肺炎組。入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡2～7歲，臨床資料完整者；(2)經(jīng)病史詢問、影像學(xué)(X線胸片檢查或CT檢查等)及臨床(臨床癥狀)等檢查，確診為肺炎；(3)無重要臟器功能受損及腫瘤疾患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)存在先天性心臟病合并癥的患兒，(2)不愿或不能配合此次研究者。根據(jù)病原體檢測(cè)結(jié)果，將120例入選者分成細(xì)菌組(細(xì)菌性肺炎，n=67)、病毒組(病毒性肺炎，n=33)和支原體組(支原體肺炎，n=20)。細(xì)菌性肺炎病原菌：(1)需氧革蘭陽性球菌，如金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌(肺炎球菌)、甲型溶血性鏈球菌等；(2)需氧革蘭陰性菌，如流感嗜血桿菌、肺炎克雷白桿菌、綠膿桿菌及埃希大腸桿菌等；(3)厭氧桿菌如梭形桿菌或棒狀桿菌等。病毒性肺炎為流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、單純皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒及麻疹病毒等；支原體肺炎主要由肺炎支原體引起。另選取同期接受健康體檢的100例健康兒童作為對(duì)照組。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患兒家長(zhǎng)知情同意此次研究并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1標(biāo)本采集患兒入院次日清晨、對(duì)照組兒童于體檢時(shí)，采集空腹靜脈血4 mL，分成2管，一管采用EDTA-K2抗凝用于檢測(cè)T細(xì)胞免疫指標(biāo)；另一管用常規(guī)管保存，靜置30 min，3 000 r/min離心5 min分離血清，用于檢測(cè)hs-CRP及PCT水平。

1.2.2血清hs-CRP及PCT水平 血清hs-CRP水平采用免疫散射比濁法，儀器為西門子醫(yī)學(xué)診斷產(chǎn)品有限公司生產(chǎn)BN Ⅱ全自動(dòng)蛋白分析儀；血清PCT水平采用酶聯(lián)熒光分析法，儀器為生物梅里埃mini-VIDAS全自動(dòng)免疫分析儀器， 血清PCT>0.5 μg/L則判定為陽性，計(jì)算各肺炎組患兒PCT陽性率，PCT陽性率= PCT陽性患兒數(shù)/該組患兒數(shù)×100%。

1.2.3外周血T淋巴細(xì)胞水平 采用EPICSXL流式細(xì)胞儀(美國(guó)貝克曼庫爾特公司)檢測(cè)。(1)T淋巴細(xì)胞亞群水平的檢測(cè)，在各試管內(nèi)加入CD45-FITC、CD4-RD1、CD8-ECD及CD3-PC5熒光單克隆抗體(美國(guó)貝克曼庫爾特公司)各10 μL及EDTA-K2抗凝靜脈血各100 μL，混勻后于室溫下避光反應(yīng)，15 min后加入Optilyse C溶血素裂解紅細(xì)胞(美國(guó)貝克曼庫爾特公司)500 μL，再次避光室溫下反應(yīng)15 min，然后加入PBS液500 μL充分混勻，避光室溫靜置10 min，上機(jī)檢測(cè)，應(yīng)用軟件自動(dòng)計(jì)算結(jié)果。(2)CD4+CD25+Treg細(xì)胞水平的檢測(cè)采用流式細(xì)胞術(shù)，在各試管內(nèi)加入EDTA-K2抗凝靜脈血100 μL，混勻后避光室溫下反應(yīng)，15 min后操作步驟與T淋巴細(xì)胞亞群水平的檢測(cè)步驟相同。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 一般資料比較

4組兒童的一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。

表1 4組兒童一般資料比較Tab.1 The comparison of the general

2.2 血清hs-CRP水平、PCT水平及陽性率

結(jié)果顯示，各組兒童血清hs-CRP水平比較，細(xì)菌組>支原體組>病毒組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；各組兒童血清PCT水平比較，細(xì)菌組>支原體組>病毒組>對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；各組兒童血清PCT陽性率比較，細(xì)菌組>支原體組和病毒組>對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 4組兒童血清hs-CRP水平、PCT水平及陽性率比較Tab.2 The comparison of the serum hs-CRP and PCT levels in four

注：(1)與對(duì)照組比較，P<0.05；(2)與病毒組比較，P<0.05；(3)與支原體組比較，P<0.05。

2.3 部分T淋巴細(xì)胞免疫指標(biāo)

結(jié)果顯示，3組肺炎患兒外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均低于對(duì)照組，CD4+CD25+水平均顯著高于對(duì)照組，CD8+水平除病毒組外，細(xì)菌組與支原體組均顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 各組兒童外周血部分T淋巴細(xì)胞免疫指標(biāo)水平比較Tab.3 The comparison of the T-lymphocytes factors levels in four

注：(1)與對(duì)照組比較，P<0.05。

3 討論

兒童肺炎在兒科疾病中較為常見，病因主要為肺炎支原體感染或呼吸道合胞病毒感染，南方好發(fā)于夏季與秋季，北方好發(fā)于冬季與春季[9]。研究發(fā)現(xiàn)，兒童一旦發(fā)生肺炎，其機(jī)體內(nèi)的免疫平衡系統(tǒng)就會(huì)被打亂，免疫指標(biāo)CD4+/CD8+會(huì)呈失衡狀態(tài)[10]。據(jù)報(bào)道，急性組織受損4～6 h內(nèi)或者免疫反應(yīng)階段，血清hs-CRP水平會(huì)激增，故血清hs-CRP是疾病急性期的重要衡量指標(biāo)之一[11]。機(jī)體被細(xì)菌感染時(shí)，血清hs-CRP水平會(huì)明顯上升，機(jī)體被病毒或支原體等感染時(shí)，血清hs-CRP水平會(huì)輕度上升或者維持正常值，其敏感度及特異度均較高，是臨床上診斷及鑒別細(xì)菌感染的重要可靠指標(biāo)[12]。細(xì)菌感染性疾病中，患者的血清PCT水平明顯上升，其敏感性特異性較C反應(yīng)蛋白(CRP)或外周血白細(xì)胞等其它指標(biāo)高，也是臨床上細(xì)菌感染診斷與鑒別的一個(gè)可靠指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，各組兒童血清hs-CRP水平比較，細(xì)菌組>支原體組>病毒組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；各組兒童血清PCT水平比較，細(xì)菌組>支原體組>病毒組>對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；各組兒童血清PCT陽性率比較，細(xì)菌組>支原體組和病毒組>對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示血清hs-CRP可作為臨床上的炎癥標(biāo)志物之一，敏感性較高，但特異性不高，可以區(qū)分細(xì)菌性肺炎與支原體肺炎，但不能辨別病毒性肺炎，對(duì)肺炎患兒的感染類型鑒別價(jià)值有限；血清PCT水平及陽性率則可有效鑒別細(xì)菌性肺炎、病毒性肺炎及支原體肺炎，對(duì)肺炎患兒的診斷及其感染類型的鑒別均具有重要的檢測(cè)價(jià)值。

機(jī)體內(nèi)T淋巴細(xì)胞不僅是免疫反應(yīng)的重要效應(yīng)細(xì)胞，而且也是免疫功能調(diào)節(jié)性細(xì)胞，其中CD4+與CD8+的比值可有效反映機(jī)體內(nèi)的免疫狀態(tài)，該比值下降則表示細(xì)胞免疫功能受抑制[13]。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是對(duì)免疫調(diào)節(jié)功能具有抑制作用的重要細(xì)胞亞群，可有效抑制病毒、細(xì)菌及支原體等病原微生物感染導(dǎo)致的免疫反應(yīng)，抑制淋巴細(xì)胞的增殖及活化[14-15]。本研究結(jié)果顯示，3組肺炎患兒的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均低于對(duì)照組，CD4+CD25+水平均高于對(duì)照組(P<0.05)；細(xì)菌組與支原體組患兒的CD8+水平均高于對(duì)照組(P<0.05)，提示肺炎患兒機(jī)體內(nèi)細(xì)胞免疫紊亂，T細(xì)胞免疫抑制作用對(duì)體內(nèi)病原微生物的復(fù)制與存活具有一定的激活作用，借助CD4+CD25+T細(xì)胞活化作用促進(jìn)效應(yīng)T細(xì)胞釋放，阻礙機(jī)體免疫反應(yīng)，從而避免免疫應(yīng)答過度反應(yīng)導(dǎo)致的病理受損，確保機(jī)體維持慢性感染狀態(tài)，這與以往的相關(guān)研究結(jié)果一致[16-18]。

綜上所述，不同類型肺炎患兒的機(jī)體內(nèi)免疫功能均有受損，血清hs-CRP及PCT水平可以輔助鑒別診斷肺炎的感染類型。