董 磊，張仲妍

1.武漢市紅十字會(huì)醫(yī)院腫瘤科，湖北 武漢 430000；

2.重慶大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院中醫(yī)腫瘤科，重慶 400030

非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）是最常見的肺癌類型，約占所有肺癌的80%，惡性程度高，易發(fā)生轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散，5年生存率很低［1］。目前，NSCLC患者主要采用手術(shù)聯(lián)合放化療，以期延長(zhǎng)患者的生存時(shí)間，提高生活質(zhì)量［2］。研究NSCLC細(xì)胞發(fā)生增殖和轉(zhuǎn)移的機(jī)制，對(duì)于臨床治療具有重要意義。miRNA是一組具有調(diào)控作用的非編碼小RNA，可以調(diào)控細(xì)胞的多種生物學(xué)過(guò)程［3］。miR-1290是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種與腫瘤有關(guān)的miRNA，在多種惡性腫瘤中均存在異常高表達(dá)［4-5］。臨床研究顯示，miR-1290可以調(diào)節(jié)干擾素調(diào)節(jié)因子-2（interferon regulatory factor-2，IRF2）的表達(dá)，調(diào)節(jié)NSCLC細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為［6］，但其作用具體機(jī)制目前尚不清楚。因此，本研究分析miR-1290靶向IRF2調(diào)節(jié)NSCLC細(xì)胞生物學(xué)行為的作用機(jī)制，旨在為NSCLC的分子靶向治療提供一定的參考依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料與儀器

全自動(dòng)酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)Thermo Scientific公司；7500實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（realtime fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）系統(tǒng)購(gòu)自美國(guó)Applied Biosystems公司；A549細(xì)胞均購(gòu)自上海酶研生物科技有限公司；空質(zhì)粒pGL3購(gòu)自上海信裕生物科技有限公司；包含IRF23’-UTR序列的熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒（3’-UTR IRF2-WT）和含有IRF23’-UTR突變序列的熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒（3’-UTR IRF2-MUT）均由賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司構(gòu)建并鑒定；PCR引物由上海生工生物工程有限公司合成；熒光素酶檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京賽泓瑞生物科技有限公司；RPMI-1640培養(yǎng)基、胎牛血清購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑購(gòu)自上海恒斐生物科技有限公司；細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒（cell counting kit-8，CCK-8）購(gòu)自武漢艾美捷科技有限公司；Transwell小室購(gòu)自上海研卉生物科技有限公司；RNA提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、熒光定量試劑均購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；β-actin、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、E-鈣黏著蛋白（E-cadherin）、基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）-2和Ki-67抗體均購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染

將A549細(xì)胞接種于含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中，置于37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將其分為NC組、miR-1290 mimic組和miR-1290 inhibitor組。轉(zhuǎn)染前24 h接種細(xì)胞，將空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到NC組細(xì)胞，miR-1290 mimic轉(zhuǎn)染到miR-1290組細(xì)胞，miR-1290 inhibitor轉(zhuǎn)染到miR-1290 inhibitor組細(xì)胞，按照轉(zhuǎn)染試劑操作步驟進(jìn)行轉(zhuǎn)染。采用RTFQ-PCR和蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）檢測(cè)各組細(xì)胞miR-1290和IRF2的表達(dá)。

1.3 miR-1290和IRF2的靶向關(guān)系驗(yàn)證

采用熒光素酶活性實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證miR-1290和IRF2的靶向關(guān)系，根據(jù)miRNA靶點(diǎn)預(yù)測(cè)軟件預(yù)測(cè)，選擇可以與miR-1290的結(jié)合的IRF2 mRNA的3’-UTR序列，體外合成含該位點(diǎn)的DNA片段（WT）和含該位點(diǎn)突變體（MUT）的DNA片段，克隆到雙熒光素酶啟動(dòng)子載體pGL3。將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到miR-1290組和NC組細(xì)胞，培養(yǎng)48 h后，采用熒光素酶檢測(cè)試劑盒測(cè)定熒光素酶活性。

1.4 細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期A549細(xì)胞，將其分為NC組、miR-1290組、IRF2組和miR-1290+IRF2組。轉(zhuǎn)染前24 h接種細(xì)胞，將空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到NC組細(xì)胞，miR-1290 mimic轉(zhuǎn)染到miR-1290組和miR-1290+IRF2組細(xì)胞；將IRF2構(gòu)建到pLV-DNA載體過(guò)表達(dá)后轉(zhuǎn)染到IRF2組和miR-1290+IRF2組細(xì)胞，按照轉(zhuǎn)染試劑操作步驟進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

1.5 轉(zhuǎn)染后miR-1290和IRF2的表達(dá)水平

采用RTFQ-PCR測(cè)定各組細(xì)胞中miR-1290和IRF2的表達(dá)水平，TRIzol法提取細(xì)胞總RNA，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，進(jìn)行RTFQ-PCR，miR-1290上游引物：5’-GGCTCTGAGTGGTTGAGC-3’，下游：5’-CAGTGCGTGTCGTGGAGT-3’；IRF2上游引物：5’-TGAACTGCATACTACGCTCAAG A-3’，下游引物：5’-CGGATTCGTCACAATG TGTTC-3’。反應(yīng)引物、體系和條件參照參考文獻(xiàn)［7］，以GAPDH作為內(nèi)參。采用Western blot檢測(cè)IRF2的表達(dá)，使用細(xì)胞裂解液提取總蛋白，將提取的總蛋白樣品經(jīng)過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳轉(zhuǎn)印至聚偏二氟乙烯膜，加兔抗人IRF2多克隆抗體（1∶1000）和β-actin蛋白單抗（1∶300），4 ℃下溫育過(guò)夜，最后加二抗37 ℃下溫育2 h，電化學(xué)發(fā)光法顯色。采用凝膠成像分析軟件分析蛋白條帶灰度值。

1.6 CCK-8檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖活性

取各組對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549細(xì)胞，將單個(gè)細(xì)胞懸液接種于96孔板中，每孔體積200 μL，含103個(gè)細(xì)胞，于37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分別于0、24、48、72、96 h進(jìn)行CCK-8檢測(cè)，加入10 μL CCK-8試劑，采用酶標(biāo)儀檢測(cè)波長(zhǎng)為450 nm處各孔的吸光度（D）值。

1.7 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的侵襲力

取100μL稀釋好的基質(zhì)膠均勻覆蓋于Transwell小室底部。取各組對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549細(xì)胞，用0.2%的胰蛋白酶進(jìn)行消化后，調(diào)整細(xì)胞密度為2×105個(gè)/mL。取100 μL稀釋好的細(xì)胞懸液加于上室，于37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的條件下培養(yǎng)48 h后，取出Transwell小室，采用甲醇固定，結(jié)晶紫進(jìn)行染色，顯微鏡下觀察膜下室面表面的細(xì)胞，并計(jì)數(shù)5個(gè)視野，取平均值。

1.8 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的遷移力

取各組對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549細(xì)胞接種于96孔板中，于37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的條件下培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)滿單層后，棄去培養(yǎng)基，采用滅菌的移液器吸嘴在皿底垂直劃一直線，采用PBS洗滌3次，于37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的條件下常規(guī)培養(yǎng)。顯微鏡下觀察劃痕處細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，測(cè)量劃痕寬度，計(jì)算細(xì)胞遷移率。

1.9 Western blot檢測(cè)VEGF、E-cadherin、MMP-2蛋白水平及Ki-67增殖指數(shù)

取各組對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549細(xì)胞，采用細(xì)胞裂解液提取總蛋白，二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）法進(jìn)行蛋白定量，取50 ng蛋白進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳，電轉(zhuǎn)膜至聚偏二氟乙烯膜，室溫封閉2 h，采用洗膜緩沖液（TRISbuffered saline Tween，TBST）洗膜并加一抗，4 ℃溫育過(guò)夜，TBST洗膜加二抗，室溫下溫育2 h。再用電化學(xué)發(fā)光顯示，選用β-actin作為內(nèi)參，采用凝膠圖象處理系統(tǒng)分析對(duì)比條帶強(qiáng)弱。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料均以表示，對(duì)計(jì)量資料首先進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，各組均滿足正態(tài)性且兩組間方差齊，采用單因素方差分析比較兩組間差異性，若組間比較有差異，采用SNK-q檢驗(yàn)比較兩組間差異，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-1290與IRF2的靶向關(guān)系

將miR-1290 mimic和miR-1290 inhibitor分別轉(zhuǎn)染到miR-1290細(xì)胞后，采用RTFQ-PCR和Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞miR-1290和IRF2的表達(dá)，結(jié)果顯示：與NC組相比，miR-1290 mimic組的miR-1290 mRNA水平明顯增加［（8.13±0.05）vs（1.00±0.00），P＜0.05］，IRF2蛋白和mRNA水平明顯下降［（0.17±0.02）vs（0.28±0.02）；（0.32±0.02）vs（1.00±0.00），P＜0.05］，miR-1290 inhibitor組的miR-1290 mRNA水平明顯下降［（0.17±0.02）vs（1.00±0.00），P＜0.05］，IRF2蛋白和mRNA水平明顯增加［（0.65±0.05）vs（0.28±0.02）；（2.87±0.08）vs（1.00±0.00），P＜0.05，圖1，表1］。

圖1 miR-1290與IRF2的靶向關(guān)系Fig.1 Targeted relationship between miR-1290 and IRF2

表1 miR-1290與IRF2的靶向關(guān)系Tab.1 Targeted relationship between miR-1290 and IRF2

2.2 熒光素酶活性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-1290與IRF2的靶向關(guān)系

體外合成含miR-1290結(jié)合IRF2 mRNA 3’-UTR序列位點(diǎn)的DNA片段（WT）和含該位點(diǎn)突變體（MUT）的DNA片段，克隆到雙熒光素酶啟動(dòng)子載體pGL3，分別轉(zhuǎn)染到miR-1290組和NC組細(xì)胞，采用熒光素酶檢測(cè)試劑盒測(cè)定熒光素酶活性，結(jié)果顯示，與轉(zhuǎn)染野生型熒光素酶質(zhì)粒組相比，共轉(zhuǎn)染野生型熒光素酶質(zhì)粒和miR-1290 mimic組細(xì)胞的熒光素酶活性顯著降低［（0.38±0.04）vs（1.00±0.04），P＜0.05］，miR-1290可以靶向負(fù)調(diào)控IRF2（圖2）。

圖2 熒光素酶實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的熒光素酶活性Fig.2 Luciferase activity of cells in each group was detected by luciferase experiment

2.3 RTFQ-PCR和Western blot檢測(cè)各組A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染后miR-1290和IRF2的表達(dá)水平

將空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到NC組細(xì)胞，miR-1290 mimic轉(zhuǎn)染到miR-1290組和miR-1290+IRF2組細(xì)胞；將IRF2構(gòu)建到pLV-DNA載體過(guò)表達(dá)后轉(zhuǎn)染到IRF2組和miR-1290+IRF2組細(xì)胞后，采用RTFQPCR和Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞miR-1290和IRF2的表達(dá)，結(jié)果顯示：與NC組相比，miR-1290組miR-1290 mRNA水平明顯增加［（8.11±0.06）vs（1.00±0.00），P＜0.05］，IRF2蛋白和mRNA水平明顯下降［（0.15±0.02）vs（0.27±0.02）；（0.33±0.03）vs（1.00±0.00），P＜0.05］，IRF2組IRF2蛋白和mRNA水平明顯增加［（1.23±0.05）vs（0.27±0.02）；（7.65±0.05）vs（1.00±0.00），P＜0.05］；與IRF2組相比，miR-1290+IRF2組miR-1290 mRNA水平明顯增加［（8.09±0.06）vs（1.02±0.03），P＜0.05］，IRF2蛋白和mRNA水平明顯下降［（0.24±0.05）vs（1.23±0.05）；（0.93±0.06）vs（7.65±0.05），P＜0.05，圖3，表2］。

圖3 轉(zhuǎn)染后A549細(xì)胞IRF2蛋白的表達(dá)Fig.3 Expression of IRF2 protein in transfected A549 cells

表2 各組A549細(xì)胞的轉(zhuǎn)染后miR-1290和IRF2的水平Tab.2 miR-1290 and IRF2 levels of A549 cells in each group after transfection

2.4 CCK-8檢測(cè)各組A549細(xì)胞的增殖情況

采用CCK-8檢測(cè)各組對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期A549細(xì)胞的增殖情況，結(jié)果顯示，與NC組相比，miR-1290組細(xì)胞在培養(yǎng)24、48、72和96 h時(shí)數(shù)量明顯增加（P＜0.05），IRF2組細(xì)胞在培養(yǎng)24、48、72和96 h時(shí)數(shù)量明顯下降（P＜0.05），miR-1290+IRF2組細(xì)胞在培養(yǎng)24、48、72和96 h時(shí)數(shù)量均無(wú)明顯變化（P＞0.05）；與IRF2組相比，miR-1290+IRF2組細(xì)胞在培養(yǎng)24、48、72和96 h時(shí)數(shù)量明顯增加（P＜0.05）；與miR-1290組相比，miR-1290+IRF2組細(xì)胞在培養(yǎng)24、48、72和96 h時(shí)數(shù)量差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，表3）。

表3 各組A549細(xì)胞的增殖情況Tab.3 Proliferation of A549 cells in each group

2.5 Transwell和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組A549細(xì)胞的侵襲和遷移能力

采用Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期A549細(xì)胞的侵襲力，劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期A549細(xì)胞的遷移力，結(jié)果顯示，與NC組相比，miR-1290組細(xì)胞侵襲細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞遷移率明顯增加［（183.45±22.37）vs（127.26±17.95）；（65.43±8.61）vs（44.37±6.58），P＜0.05］，IRF2組細(xì)胞侵襲細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞遷移率明顯下降［（73.35±11.36）vs（127.26±17.95）；（28.25±5.24）vs（44.37±6.58），P＜0.05］，miR-1290+IRF2組細(xì)胞侵襲細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞遷移率無(wú)明顯差異（P＞0.05）；與IRF2組相比，miR-1290+IRF2組細(xì)胞侵襲細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞遷移率明顯增加［（131.48±18.51）vs（73.35±11.36）；（47.40±7.23）vs（28.25±5.24），P＜0.05］；與miR-1290組相比，miR-1290+IRF2組細(xì)胞侵襲細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞遷移率明顯下降［（131.48±18.51）vs（183.45±22.37）；（47.40±7.23）vs（65.43±8.61），P＜0.05，圖4，表4］。

圖4 各組A549細(xì)胞的侵襲和遷移力Fig.4 Invasion and migration of A549 cells in each group

表4 各組A549細(xì)胞的侵襲和遷移力Tab.4 Invasion and migration of A549 cells in each group

2.6 Western blot檢測(cè)各組A549細(xì)胞VEGF、E-cadherin、MMP-2蛋白水平及Ki-67增殖指數(shù)

采用Wester n blot檢測(cè)各組對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期A549細(xì)胞V EGF、E-cad her in、MMP-2蛋白水平及Ki-67增殖指數(shù)，結(jié)果顯示，與NC組相比，miR-1290組細(xì)胞VEGF、MMP-2和Ki-67明顯增加［（0.75±0.07）vs（0.47±0.04）；（0.67±0.06）vs（0.38±0.03）；（0.72±0.06）vs（0.40±0.04），P＜0.05］，E-cadherin水平明顯下降［（0.21±0.03）vs（0.32±0.03），P＜0.05］，IRF2組細(xì)胞VEGF、MMP-2和Ki-67明顯下降［（0.26±0.03）vs（0.47±0.04）；（0.23±0.03）vs（0.38±0.03）；（0.25±0.03）vs（0.40±0.04），P＜0.05］，E-cadherin水平明顯增加［（0.61±0.05）vs（0.32±0.03），P＜0.05］，miR-1290+IRF2組細(xì)胞VEGF、MMP-2、Ki-67和E-cadherin無(wú)明顯差異（P＞0.05）。與IRF2組相比，miR-1290+IRF2組細(xì)胞VEGF、MMP-2和Ki-67明顯增加［（0.51±0.05）vs（0.26±0.03）；（0.41±0.04）vs（0.23±0.03）；（0.44±0.04）vs（0.25±0.03），P＜0.05］，E-cadherin水平明顯下降［（0.30±0.03）vs（0.61±0.05），P＜0.05］；與miR-1290組相比，miR-1290+IRF2組細(xì)胞VEGF、MMP-2和Ki-67明顯下降［（0.51±0.05）vs（0.75±0.07）；（0.41±0.04）vs（0.67±0.06）；（0.44±0.04）vs（0.72±0.06），P＜0.05］，E-cadherin水平明顯增加［（0.30±0.03）vs（0.21±0.03），P＜0.05，圖5，表5］。

圖5 各組A549細(xì)胞VEGF、E-cadherin、MMP-2、Ki-67的水平Fig.5 Levels of VEGF,E-cadherin,MMP-2 and Ki-67 of A549 cells in each group

表5 各組A549細(xì)胞VEGF、E-cadherin、MMP-2、Ki-67的水平Tab.5 Levels of VEGF,E-cadherin,MMP-2 and Ki-67 of A549 cells in each group

3 討論

miR-1290是一種新發(fā)現(xiàn)的miRNA，在肺癌、胃癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌等多種惡性腫瘤中均存在異常表達(dá)［8］。Mo等［9］的研究顯示，miR-1290在NSCLC患者血清中水平升高，且miR-1290高表達(dá)是影響NSCLC患者預(yù)后生存的獨(dú)立因素，提示miR-1290與NSCLC的惡性發(fā)展密切相關(guān)。Kim等［10］的研究顯示，miR-1290在A549細(xì)胞中表達(dá)明顯上調(diào)，差異表達(dá)的miR-1290可能通過(guò)下調(diào)Bcl-2的表達(dá)，抑制NSCLC細(xì)胞的凋亡。因此，本研究以NSCLC細(xì)胞A549為研究對(duì)象，分析miR-1290作用于NSCLC細(xì)胞的具體機(jī)制。本研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染miR-1290mimic后，A549細(xì)胞中miR-1290的表達(dá)顯著上調(diào)，IRF2的表達(dá)顯著下調(diào)，轉(zhuǎn)染miR-1290 inhibitor后，miR-1290的表達(dá)顯著下調(diào)，IRF2的表達(dá)顯著上調(diào)，證實(shí)轉(zhuǎn)染成功，提示miR-1290可以負(fù)調(diào)控IRF2。本研究采用熒光素酶實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，miR-1290可以靶向負(fù)調(diào)控IRF2的表達(dá)。IRF2是IRF家族的一員，可以結(jié)合干擾素基因啟動(dòng)子，在免疫反應(yīng)和促進(jìn)細(xì)胞增殖方面發(fā)揮重要作用［11］。臨床研究顯示［12］，IRF2參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展，可以抑制胃癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移，與本研究結(jié)果基本相符，提示miR-1290可能通過(guò)靶向負(fù)調(diào)控IRF2的表達(dá)，促進(jìn)NSCLC細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為，有望作為NSCLC分子靶向治療的新靶點(diǎn)。

本研究結(jié)果顯示，IRF2過(guò)表達(dá)可以顯著下調(diào)Ki-67的表達(dá)，抑制A549細(xì)胞的增殖活性，miR-1290過(guò)表達(dá)可以靶向抑制IRF2的表達(dá)，使Ki-67增殖指數(shù)升高，促進(jìn)A549細(xì)胞的增殖活性。Yan等［13］的研究顯示，miR-1290可以靶向調(diào)節(jié)LHX6的表達(dá)促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移，提示miR-1290可以靶向負(fù)調(diào)控IRF2的表達(dá)，促進(jìn)A549細(xì)胞的增殖。本研究結(jié)果顯示，IRF2過(guò)表達(dá)可以顯著抑制A549細(xì)胞的侵襲和遷移能力，miR-1290過(guò)表達(dá)可以靶向抑制IRF2的表達(dá)，促進(jìn)A549細(xì)胞的侵襲和遷移。Liang等［14］的研究表明，IRF2可以促進(jìn)肺癌細(xì)胞的凋亡，抑制其增殖和遷移，與本研究的結(jié)果基本相符，提示miR-1290可能通過(guò)靶向負(fù)調(diào)控IRF2的表達(dá)，抑制A549細(xì)胞的增殖和遷移。陳蓉等［15］的研究顯示，miR-1290可能通過(guò)與IRF2結(jié)合，促進(jìn)A549細(xì)胞的增殖和侵襲，與本研究結(jié)果基本相符，提示miR-1290可能通過(guò)靶向抑制ADAM9的表達(dá)，抑制A549細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移。

在本研究中，IRF2過(guò)表達(dá)可以下調(diào)A549細(xì)胞的VEGF和MMP-2，上調(diào)E-cadherin水平，miR-1290過(guò)表達(dá)可以靶向抑制ADAM9的表達(dá)，上調(diào)VEGF和MMP-2，下調(diào)E-cadherin水平。VEGF是一種高度特異性的促血管生成因子，可以促進(jìn)腫瘤血管的新生，在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用，研究顯示［16］，VEGF高表達(dá)可以調(diào)控NSCLC細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為，加快NSCLC的惡性發(fā)展，提示miR-1290可能通過(guò)靶向負(fù)調(diào)控IRF2的表達(dá)，上調(diào)VEGF的表達(dá)，促進(jìn)A549細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移。MMP-2是MMP家族的一員，可以降解和重塑細(xì)胞外基質(zhì)，參與調(diào)控多種腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移［17］。E-cadherin是一種鈣依賴性的跨膜蛋白，可以調(diào)節(jié)細(xì)胞間的黏附作用，一旦其表達(dá)下調(diào)或缺失，可導(dǎo)致細(xì)胞間黏附作用下降，使癌細(xì)胞易發(fā)生脫落，促進(jìn)其侵襲和轉(zhuǎn)移［18］。Butkiewicz等［19］的研究顯示，MMP-2、E-cadherin和VEGF可以作用于NSCLC細(xì)胞，促進(jìn)其侵襲和遷移。Yi等［20］的研究顯示，miR-18a可以靶向IRF2調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為，提示miR-1290可能通過(guò)靶向抑制IRF2的表達(dá)，調(diào)節(jié)MMP-2、E-cadherin和VEGF蛋白水平，促進(jìn)A549細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。

綜上所述，miR-1290可能通過(guò)靶向負(fù)調(diào)控IRF2的表達(dá)，上調(diào)VEGF、MMP-2，下調(diào)E-cadherin水平，使Ki-67增殖指數(shù)升高，促進(jìn)A549細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移，有望作為臨床治療的新靶點(diǎn)。