吳克剛，趙欣欣，段雪娟，柴向華，于泓鵬，劉曉麗，范宇婷

（1.廣東工業(yè)大學(xué)輕工化工學(xué)院，廣東 廣州 510006；2.廣州市香思馨情健康科技有限公司，廣東 廣州 510006；3.河南工業(yè)大學(xué) 河南糧食作物協(xié)同創(chuàng)新中心，河南 鄭州 450001）

芳樟醇，又名沉香醇、胡荽醇、芫荽醇、沉香油醇、伽羅木醇、里那醇等，是一種無色液體，作為一種單離香料廣泛存在于香紫蘇精油、胡荽籽精油（芫荽油）、芳樟葉精油、芳樟木精油、黃樟精油等植物精油中。天然芳樟醇?xì)馕都冋?、圓和、甜潤(rùn)、幽雅，具有類似鈴蘭、百合花樣的香氣[1]，同時(shí)具有抗菌、抗病毒、鎮(zhèn)靜、驅(qū)蟲和殺蟲等功效[2-6]，因而可將其應(yīng)用于空氣清新殺菌劑等領(lǐng)域?，F(xiàn)用的消毒劑、殺菌劑和空氣清新劑等基本上都是人工合成的物質(zhì)，在消毒、殺菌、清新空氣的同時(shí)也會(huì)對(duì)人體造成一定的危害，并且氣味不理想[7]，而芳樟醇具有綠色、安全、高效、留香等特點(diǎn)，符合當(dāng)下的趨勢(shì)。

目前，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)植物精油抗菌活性成分及其作用機(jī)制開展了大量研究，主要是從菌體微觀形態(tài)、細(xì)胞膜通透性、新陳代謝等方面的變化來認(rèn)識(shí)植物精油液相接觸抗菌的作用機(jī)理[8-14]，而關(guān)于芳樟醇的氣相抗菌活性及其作用機(jī)制的研究不多。大腸桿菌（Escherichia coli）是人和動(dòng)物腸道中最常見的一種細(xì)菌，作為細(xì)菌的模式生物被廣泛用于科學(xué)研究。為此，本實(shí)驗(yàn)以大腸桿菌為供試菌，研究芳樟醇的氣相抗菌活性，通過觀察菌體微觀結(jié)構(gòu)、細(xì)胞膜通透性的變化來探討其抗菌機(jī)制，為植物精油成分氣相抗菌活性的研究提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 菌株、材料與試劑

大腸桿菌ATCC 25922由廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心提供。將菌株于營(yíng)養(yǎng)肉湯中37 ℃活化24 h，平板劃線分離單個(gè)菌落，挑取單個(gè)菌落用麥?zhǔn)媳葷峁芘渲瞥?.5麥?zhǔn)蠁挝唬s1.5h 108CFU/mL）的菌懸液，備用。

營(yíng)養(yǎng)瓊脂、緩沖蛋白胨 廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；芳樟醇（98%，質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同） 阿拉丁試劑（上海）有限公司；百里香酚（99%）、丁香酚（99%）、茴香腦（99%）、檸檬醛（95%）、檸檬烯（90%）、香葉醇（98%）、香茅醇（99%）、香茅醛（99%）、香芹酚（95%）和大茴香醛（99%） 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；1-苯胺基-8-萘磺酸（8-anilino-1-naphthalenesulfonic acid，ANS）、丙烯酰胺和雙丙烯酰胺 美國(guó)Sigma公司；牛血清白蛋白 廣東 光華化工有限公司；蛋白酶K 北京普博欣生物技術(shù)科技有限公司；考馬斯亮藍(lán)G-250 上海伯奧生物科技有限公司；花生油 山東魯花集團(tuán)有限公司；Ezup柱式細(xì)菌基因DNA抽提試劑盒 生工生物工程（上海）有限 公司；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

KDC-160HR高速冷凍離心機(jī) 科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司；FluoroMax-4熒光光譜儀 法國(guó)HORIBA Jobin Yvon公司；JSM-6360LV掃描電子顯微鏡 日本電子株式會(huì)社；LGJ-12冷凍干燥機(jī) 北京松源華興科技發(fā)展有限公司；S-3000N型掃描電子顯微鏡、H-7650型透射電子顯微鏡 日本日立公司；EM UC6超薄切片機(jī) 德國(guó)Leica公司；DDS-307T型電導(dǎo)率儀 上海智光儀器儀表有限公司；UV-2450紫外-可見分光光度計(jì) 日本島津公司；HP6890氣相色譜儀（配5973質(zhì)譜檢測(cè)器） 美國(guó)安捷倫科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 單離香料氣相熏蒸大腸桿菌及最低抑菌濃度和最低殺菌濃度的測(cè)定

參考Lopez等[15]的氣相揮發(fā)實(shí)驗(yàn)，在已冷卻至室溫的培養(yǎng)基上加入0.1 mL上述菌懸液，用三角玻璃涂棒涂勻，待菌液完全吸收后將培養(yǎng)板倒置，按設(shè)定的空間含量將各單離香料的稀釋液（丙二醇稀釋）滴加在各培養(yǎng)皿的皿蓋中央，封口膜密封并于37 ℃的生化培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)24 h，觀察平板長(zhǎng)菌情況。以完全不長(zhǎng)菌的平板所對(duì)應(yīng)的最低濃度為最低抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC）。完全不長(zhǎng)菌的平板無菌更換新的培養(yǎng)皿皿蓋繼續(xù)培養(yǎng)24 h，仍然不長(zhǎng)菌的平板對(duì)應(yīng)的最低濃度為最低殺菌濃度（minimum bactericidal concentration，MBC）。

1.3.2 大腸桿菌表面疏水性分析

采用ANS熒光探針法分析表面疏水性來了解大腸桿菌細(xì)胞壁完整性。用10 mL磷酸鹽緩沖液（pH 7.4）收集經(jīng)芳樟醇處理過的菌體，用分光光度計(jì)將各菌懸液調(diào)OD600nm至0.500f 0.005。參照Thennarasu等[16]的方法，取2.5 mL菌懸液和0.5 mL ANS溶液（終濃度為6.67 mmol/L） 加入反應(yīng)試管中，振蕩混勻，用熒光光譜儀在激發(fā)波長(zhǎng)380 nm處測(cè)定發(fā)射波長(zhǎng)400～600 nm范圍內(nèi)的熒光光譜，激發(fā)和發(fā)射狹縫寬度均為5 nm。

1.3.3 大腸桿菌超顯微結(jié)構(gòu)觀察

取正常培養(yǎng)和經(jīng)200 μL/L芳樟醇處理24 h的大腸桿菌含菌平板，參照Tyagi等[17]的方法固定樣品，通過掃描電子顯微鏡和透射電子顯微鏡來觀察大腸桿菌超顯微結(jié)構(gòu)。

1.3.4 電導(dǎo)率分析

取正常培養(yǎng)和經(jīng)芳樟醇處理的大腸桿菌含菌平板，用無菌水收集菌體，用分光光度計(jì)將各菌懸液調(diào)OD600nm至1.000f 0.005，用電導(dǎo)率儀測(cè)各菌懸液電導(dǎo)率。

1.3.5 紫外吸收的測(cè)定

參考Hammer等[18]的方法，取10 mL OD600nm為1.0的菌懸液在11 000 r/min條件下離心10 min，取3 mL上清液，用紫外分光光度計(jì)在260 nm波長(zhǎng)處測(cè)定OD值。

1.3.6 大腸桿菌DNA電泳分析

取1.5 mL OD600nm為0.5的菌懸液，按DNA提取試劑盒操作在8 000 r/min條件下離心2 min，棄上清液，提取菌體內(nèi)的DNA，以Tris-硼酸緩沖液配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.8%凝膠（加入0.06%的GoldView染料），潛水點(diǎn)樣，100 V穩(wěn)壓電泳30 min，于紫外凝膠圖像分析儀下觀察DNA條帶亮度的變化，拍照并分析結(jié)果。

1.3.7 可溶性蛋白質(zhì)量濃度的分析

以牛血清白蛋白為標(biāo)準(zhǔn)蛋白繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)含量和吸光度之間的回歸方程為：y＝6.376 4x（R2＝0.991 2）。取10 mL OD600nm為1.0的菌液于7 000 r/min離心10 min。參照Bradford[19]的方法，取0.3 mL上清液并將其稀釋至1 mL，加入5 mL考馬斯亮藍(lán)G-250顯色液（含體積分?jǐn)?shù)0.01%考馬斯亮藍(lán)G-250、4.7%乙醇、8.5%磷酸），振蕩混勻，5 min后測(cè)其在595 nm波長(zhǎng)處的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出相應(yīng)樣品的蛋白質(zhì)量濃度。

1.3.8 SDS-PAGE分析

取3 mL上述OD600nm為0.5的菌懸液，參考He Feng等[20]的方法，12 000 r/min離心10 min取沉淀物，懸于50 μL的TE緩沖液中，按體積比1∶1加入50 μL上樣緩沖液，于沸水浴中煮沸5 min，12 000 r/min離心5 min，取50 μL上清液進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis， SDS-PAGE）。

1.3.9 熒光光譜分析

參考Ye Xiaoli等[21]的方法，取3 mL上述OD600nm為0.5的菌懸液，在激發(fā)波長(zhǎng)285 nm處測(cè)定發(fā)射波長(zhǎng)在300～500 nm范圍內(nèi)的熒光光譜，激發(fā)和發(fā)射狹縫寬度均為5 nm，進(jìn)行熒光光譜分析。

1.3.10 脂肪酸組成分析

取正常培養(yǎng)和經(jīng)芳樟醇處理的大腸桿菌含菌平板，無菌水收集菌體，參照杜春明等[22]的方法制備樣品。GC條件：程序升溫（初始溫度50 ℃，保持1 min；以 25 ℃/min的速率升溫到200 ℃，保持1 min；再以 3 ℃/min的速率升溫到230 ℃，保持18 min，進(jìn)樣口溫度250 ℃）；載氣為高純氦氣，流速為1 mL/min；進(jìn)樣量為1 μL，分流比20∶1。質(zhì)譜條件：電離方式為電子轟擊，電子能量70 eV；離子源溫度：230 ℃；四極桿溫度： 150 ℃；掃描范圍10～800 amu，進(jìn)行脂肪酸分析。通過計(jì)算機(jī)檢索，與質(zhì)譜庫(kù)提供的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖對(duì)照，對(duì)脂肪酸成分進(jìn)行鑒定；用自動(dòng)積分法算出各峰的峰面積，用面積歸一化法計(jì)算各脂肪酸成分的相對(duì)含量。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

每個(gè)樣品重復(fù)3 次實(shí)驗(yàn)，用SPSS 20.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，采用GraphPad Prism軟件作圖，其中電導(dǎo)率、可溶性蛋白質(zhì)量濃度等以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 芳樟醇對(duì)大腸桿菌氣相抗菌活性的研究

2.1.1 芳樟醇?xì)庀嗫咕钚耘c幾種單離香料的對(duì)比

表 1 單離香料對(duì)大腸桿菌抗菌活性的比較Table 1 Comparison of antibacterial activity of isolate aroma compounds against E. coli

氣相熏蒸法得到的各單離香料對(duì)大腸桿菌的MIC和MBC如表1所示。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，除丁香酚、茴香腦、檸檬烯、檸檬醛、香葉醇、香茅醇和香茅醛在1 000 μL/L時(shí)沒有表現(xiàn)抗菌效果外，芳樟醇、香芹酚、百里香酚和大茴香醛對(duì)大腸桿菌均具較好的抗菌效果，抗菌能力大小依次為：香芹酚＞百里香酚＞芳樟醇＞大茴香醛。芳樟醇的抗菌作用雖然稍弱于香芹酚和百里香酚，但優(yōu)于其他幾種單離香料。段雪娟[23]、王新偉[24]等采用直接接觸法研究發(fā)現(xiàn)百里香酚和香芹酚對(duì)大腸桿菌具有很好的抗菌活性，但茴香腦、檸檬醛也具有較好的抗菌活性，這與本實(shí)驗(yàn)氣相熏蒸法得到的結(jié)果有所不同，主要是因?yàn)榫统煞值臍庀嗫咕钚赃€與其溶解性、揮發(fā)速率等因素有關(guān)[25]。

2.1.2 溶劑對(duì)芳樟醇?xì)庀嗫咕钚缘挠绊?/p>

表 2 不同溶劑稀釋的芳樟醇對(duì)大腸桿菌抑菌作用的比較Table 2 Comparison of antimicrobial activity of different concentrations of linalool in different solvents against E. coli

由表2可知，不同溶劑稀釋的芳樟醇熏蒸對(duì)大腸桿菌的生長(zhǎng)產(chǎn)生了不同的抑制效果，冰乙酸稀釋的芳樟醇抑菌效果最強(qiáng)，當(dāng)空間含量為100 μL/L時(shí)，就能完全抑制大腸桿菌的生長(zhǎng)；其次為丙二醇和無水乙醇稀釋的芳樟醇，當(dāng)空間含量達(dá)到200 μL/L能完全抑制大腸桿菌的生長(zhǎng)；然而以花生油為溶劑稀釋的芳樟醇當(dāng)空間含量達(dá)到250 μL/L時(shí)依然未顯示抑菌效果。

表 3 不同溶劑對(duì)大腸桿菌抗菌作用的比較Table 3 MIC and MBC of linalool in different solvents against E. coli

由表3可以看出，稀釋溶劑冰乙酸對(duì)大腸桿菌具有較強(qiáng)的抗菌作用，空間含量達(dá)到250 μL/L時(shí)就能對(duì)大腸桿菌產(chǎn)生抑菌、殺菌作用；乙醇空間含量要達(dá)到10 000 μL/L 才能產(chǎn)生抑菌、殺菌效果；而丙二醇和植物油對(duì)大腸桿菌均沒有顯示出抗菌作用。用冰乙酸和乙醇作為稀釋溶劑時(shí)會(huì)對(duì)芳樟醇的抗菌效果產(chǎn)生一定的干擾；植物油為溶劑時(shí)對(duì)芳樟醇的抗菌能力具有抑制作用，因此丙二醇作為芳樟醇的溶劑較為適宜。

2.2 芳樟醇對(duì)大腸桿菌細(xì)胞壁與細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的影響

2.2.1 芳樟醇對(duì)細(xì)胞壁的影響

圖 1 芳樟醇處理對(duì)大腸桿菌表面疏水性的影響Fig. 1 Effect of linalool treatment on surface hydrophobicity of E. coli

由圖1可以看出，隨著芳樟醇含量的增加和處理時(shí)間的延長(zhǎng)其誘導(dǎo)的熒光強(qiáng)度均大幅度增加，同時(shí)最大熒光強(qiáng)度發(fā)生紅移，說明芳樟醇?xì)庀嗵幚韺?dǎo)致大腸桿菌表面疏水性增加，也就是與探針ANS結(jié)合的疏水區(qū)域增多了，這表明芳樟醇破壞了大腸桿菌細(xì)胞壁，使得細(xì)胞膜上越來越多的脂類疏水性磷脂雙分子層區(qū)域暴露出來。Thennarasu等[16]的研究也發(fā)現(xiàn)大腸桿菌經(jīng)過縮氨酸處理后ANS熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，最大吸收峰發(fā)生部分藍(lán)移。

2.2.2 芳樟醇對(duì)大腸桿菌超顯微結(jié)構(gòu)的影響

圖 2 芳樟醇處理前后大腸桿菌的透射電子顯微鏡圖（×60 000）Fig. 2 TEM images of E. coli before and after linalool treatment (× 60 000)

圖 3 芳樟醇處理前后大腸桿菌的掃描電子顯微鏡圖Fig. 3 SEM images of E. coli before and after linalool treatment

透射電子顯微鏡圖顯示正常大腸桿菌細(xì)胞壁與細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整、緊密相貼、胞漿濃密、均勻分布（圖2A1和2A2）；經(jīng)芳樟醇處理后，菌體胞壁和細(xì)胞膜邊緣模糊，出現(xiàn)溶解破裂，胞漿變得稀疏、不均勻分布，甚至出現(xiàn)局部凝結(jié)（圖2B1和2B2）。掃描電子顯微鏡圖顯示正常的大腸桿菌呈完整的短棒狀或短圓柱狀，菌體飽滿、充盈、表面圓潤(rùn)光滑（圖3A）；經(jīng)芳樟醇處理后大腸桿菌菌體表面變得不光滑，呈現(xiàn)皺縮、干癟狀態(tài) （圖3B）。具有抗菌活性的植物精油成分，其由于疏水性更易作用于細(xì)胞膜，破壞細(xì)胞膜的完整性，從而使細(xì)胞膜的通透性大大增強(qiáng)，使細(xì)胞內(nèi)的一些物質(zhì)泄漏，并導(dǎo)致菌體死亡[26-27]。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，芳樟醇不僅破壞了大腸桿菌的細(xì)胞壁，也破壞了細(xì)胞膜，導(dǎo)致大腸桿菌胞內(nèi)物質(zhì)泄漏，從而呈現(xiàn)皺縮、干癟狀態(tài)。

2.3 芳樟醇對(duì)大腸桿菌細(xì)胞膜通透性的影響

2.3.1 芳樟醇對(duì)大腸桿菌胞內(nèi)小分子物質(zhì)泄漏的影響

圖 4 芳樟醇處理對(duì)大腸桿菌菌液電導(dǎo)率的影響Fig. 4 Effect of linalool treatment on electric conductivity of E. coli suspension

菌體的細(xì)胞壁損傷以及細(xì)胞膜通透性增加會(huì)導(dǎo)致一些鉀鹽、磷酸鹽等小分子釋放出，使菌液電導(dǎo)率升高。由圖4可知，菌液的電導(dǎo)率隨著芳樟醇含量增加和處理時(shí)間延長(zhǎng)而增大。芳樟醇與大腸桿菌作用的前2 h內(nèi)，電導(dǎo)率增加緩慢，2～3 h期間增加快速，之后趨于平緩。Kong Ming等[27]研究殼聚糖對(duì)大腸桿菌的抗菌作用也發(fā)現(xiàn)菌液電導(dǎo)率增加，細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)泄漏現(xiàn)象。

2.3.2 芳樟醇對(duì)大腸桿菌核酸類物質(zhì)泄漏的影響

圖 5 芳樟醇處理對(duì)大腸桿菌菌液OD260 nm值的影響Fig. 5 Effect of linalool treatment on OD260 nm of E. coli suspension

圖 6 芳樟醇處理對(duì)大腸桿菌胞內(nèi)DNA含量的影響Fig. 6 Effect of linalool treatment on DNA content of E. coli

細(xì)胞膜嚴(yán)重破損時(shí)不僅小分子泄漏，DNA、RNA等大分子物質(zhì)也會(huì)大量外泄，導(dǎo)致菌液OD260nm升高。由圖5可知，菌液OD260nm隨著芳樟醇含量的增加和處理時(shí)間的延長(zhǎng)而升高，芳樟醇含量超過200 μL/L后，OD260nm趨于穩(wěn)定；芳樟醇作用前2 h內(nèi)，OD260nm增加緩慢，2～3 h快速增加，之后趨于平緩。Devi等[9]研究丁香酚處理異變形桿菌時(shí)，也發(fā)現(xiàn)菌體表面被溶解和出現(xiàn)非選擇性孔洞，導(dǎo)致核酸大分子物質(zhì)泄漏。

如圖6所示，在細(xì)菌總量相同的情況下，隨著芳樟醇處理時(shí)間延長(zhǎng)菌體內(nèi)DNA量越來越少，以至于到6 h之后已經(jīng)檢測(cè)不到DNA，可能是在芳樟醇的長(zhǎng)時(shí)間作用下，由于細(xì)胞膜嚴(yán)重破損導(dǎo)致DNA大量泄漏。

2.3.3 芳樟醇導(dǎo)致大腸桿菌蛋白質(zhì)大分子物質(zhì)泄漏的影響

圖 7 芳樟醇處理對(duì)大腸桿菌可溶性蛋白質(zhì)量濃度的影響Fig. 7 Effect of linalool treatment on soluble protein content of E. coli

由圖7可知，菌液中的可溶性蛋白質(zhì)量濃度隨芳樟醇含量增加和處理時(shí)間的延長(zhǎng)而增大。在空間含量低于150 μL/L時(shí)，菌液可溶性蛋白質(zhì)量濃度增加幅度較小，當(dāng)含量達(dá)到MIC時(shí)，可溶性蛋白質(zhì)量濃度迅速增加。可溶性蛋白質(zhì)量濃度隨處理時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增大，20 h之后可溶性蛋白質(zhì)量濃度趨于穩(wěn)定。這進(jìn)一步證明芳樟醇處理后菌體細(xì)胞的通透性增強(qiáng)，造成可溶性蛋白質(zhì)滲出。

圖 8 芳樟醇處理對(duì)大腸桿菌菌體總蛋白質(zhì)的影響Fig. 8 Effect of linalool treatment on total proteins of E. coli

如圖8所示，隨著芳樟醇與大腸桿菌作用時(shí)間延長(zhǎng)，蛋白質(zhì)條帶逐漸減少，顏色逐漸變淺，部分蛋白質(zhì)條帶甚至消失。表明經(jīng)過芳樟醇處理，菌體內(nèi)部的蛋白質(zhì)可能被部分分解或泄漏，而導(dǎo)致菌體內(nèi)的總蛋白質(zhì)含量和種類變少。Devi等[9]研究發(fā)現(xiàn)異變形桿菌經(jīng)過丁香酚處理后膜的完整性破壞，蛋白質(zhì)泄漏；錢麗紅等[28]研究表明茶多酚能夠影響金黃色葡萄球菌內(nèi)蛋白質(zhì)的表達(dá)，處理后大多數(shù)蛋白質(zhì)條帶變淺甚至消失。

2.4 芳樟醇對(duì)大腸桿菌菌體蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)的影響

圖 9 芳樟醇處理對(duì)大腸桿菌熒光強(qiáng)度的影響Fig. 9 Effect of linalool on fluorescence intensity of E. coli

大腸桿菌菌膜的主要成分為蛋白質(zhì)，組成蛋白質(zhì)的苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸殘基可以產(chǎn)生熒光，當(dāng)這些殘基在蛋白質(zhì)中的位置發(fā)生改變時(shí)，熒光強(qiáng)度也會(huì)發(fā)生改變，通過熒光強(qiáng)度和峰位的變化可以反映蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)的變化。如圖9所示，大腸桿菌菌液熒光強(qiáng)度隨著芳樟醇含量增加和處理時(shí)間延長(zhǎng)呈不同程度的增強(qiáng)。表明芳樟醇與大腸桿菌膜蛋白發(fā)生反應(yīng)，使大腸桿菌蛋白內(nèi)源熒光強(qiáng)度變化而引起了蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)的改變，提高芳樟醇處理含量和延長(zhǎng)處理時(shí)間有利于大腸桿菌蛋白分子充分伸展，暴露出更多的生色基團(tuán)，導(dǎo)致熒光強(qiáng)度隨之增強(qiáng)。Kong Ming等[27]的研究也證明抗菌物質(zhì)能夠影響大腸桿菌上膜蛋白結(jié)構(gòu)，可能是與蛋白質(zhì)發(fā)生相互作用。

2.5 芳樟醇對(duì)大腸桿菌脂肪酸組成的影響

表 4 芳樟醇對(duì)大腸桿菌脂肪酸相對(duì)含量的影響Table 4 Effect of linalool vapor treatment time on fatty acid composition of E. coli

由表4可知，大腸桿菌經(jīng)芳樟醇處理后，其菌體細(xì)胞脂肪酸的含量隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)出規(guī)律性的變化，C13:0和C17:1相對(duì)含量隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)而增多，其中C13:0相對(duì)含量增加較為明顯；C18:0相對(duì)含量隨處理時(shí)間的延長(zhǎng)而減少。呂飛[29]的研究也證明復(fù)合精油處理后釀酒酵母體內(nèi)不飽和脂肪酸C14:1和C13:0相對(duì)含量明顯升高?？梢姡竽c桿菌經(jīng)芳樟醇?xì)庀嗵幚砗笸ㄟ^合成長(zhǎng)鏈飽和脂肪酸減少、不飽和脂肪酸以及較短鏈脂肪酸增多來維持細(xì)胞膜的流動(dòng)性，同時(shí)也提高了細(xì)胞膜的通透性，使胞內(nèi)物質(zhì)更易泄漏出來。

3 結(jié) 論

芳樟醇具有較強(qiáng)的氣相抗菌活性，對(duì)大腸桿菌的MIC和MBC均為200 μL/L。大腸桿菌經(jīng)芳樟醇?xì)庀嘌籼幚頃r(shí)，首先細(xì)胞壁的完整性受到破壞，使細(xì)胞膜更易暴露于芳樟醇，導(dǎo)致合成生物膜的長(zhǎng)鏈飽和脂肪酸減少、不飽和脂肪酸以及較短鏈脂肪酸增多，使細(xì)胞膜流動(dòng)性增加；同時(shí)，導(dǎo)致細(xì)胞膜蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，使細(xì)胞膜完整性被破壞。由于芳樟醇導(dǎo)致大腸桿菌細(xì)胞膜膜脂組成以及膜蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，使細(xì)胞膜的通透性增加，引起一些維持細(xì)胞正常生長(zhǎng)的鉀鹽、磷酸鹽等小分子以及蛋白質(zhì)、DNA、RNA等生物大分子物質(zhì)泄漏，最終導(dǎo)致大腸桿菌死亡。