楊曉婷

草莓是薔薇科草莓屬多年生草本植物。因其口感酸甜可口且營養(yǎng)價(jià)值高，而深受人們喜愛。目前，草莓的工廠化生產(chǎn)迅速發(fā)展，在2003年和2015年我國草莓的栽培面積和總產(chǎn)量均居世界首位。

草莓可進(jìn)行種子繁殖、分株繁殖、匍匐莖繁殖和組培繁殖，在生產(chǎn)中草莓主要靠匍匐莖和分株進(jìn)行無性繁殖，通過這樣的方式獲得的后代有效果不佳、繁殖速度慢、不易保持優(yōu)良性狀、易感病毒等缺點(diǎn)。而通過快繁，可以快速得到性狀優(yōu)良的品種。

本文以離體快繁的一般流程為主線，從外植體選擇、不同消毒溶液及消毒時(shí)間、不同品種在培養(yǎng)的不同階段培養(yǎng)基的選擇和不同激素選擇以及褐化、玻璃化現(xiàn)象防治等方面進(jìn)行簡單概述，綜述草莓離體快繁的技術(shù)流程，為草莓離體快繁體系的優(yōu)化以及草莓工業(yè)化生產(chǎn)提供基本資料。

1 草莓離體快繁技術(shù)的流程

1.1外植體的選擇

草莓離體快繁的第一步是要進(jìn)行外植體的選擇。目前，人們采用的外植體有草莓匍匐莖的莖尖、葉片等，其中最常采用的是草莓匍匐莖莖尖。選取莖尖作為外植體有三個(gè)優(yōu)點(diǎn)，一是莖尖分生組織是植物細(xì)胞生長、分裂最為旺盛的組織，在1.0mm的范圍內(nèi)病毒不能到達(dá)，利用這個(gè)部位來進(jìn)行組織培養(yǎng)就可以有效地脫去病毒，獲得健康無病毒種苗;二是莖尖的發(fā)芽率高、成芽速度快，葉片、花藥的發(fā)芽率相對低;三是莖尖培養(yǎng)不經(jīng)過愈傷組織去分化和再分化的途徑，可以直接誘導(dǎo)形成不定芽，利于大規(guī)模工廠化培養(yǎng)。因此，幼嫩的莖尖是作草莓快繁的理想的外植體。

1.2外植體的消毒

外植體選擇好以后，要進(jìn)行消毒。對外植體進(jìn)行消毒可以防止外植體污染和提高組培苗成活率，所用的溶液濃度和消毒時(shí)間都會(huì)影響后續(xù)結(jié)果，在保證細(xì)胞組織不受傷害的前提下盡可能的殺死所選外植體表面的細(xì)菌和微生物。

從目前的研究來看，常用方法是用70%～75%酒精消毒30s，用0.1%的升汞溶液消毒7min。其中，在所用溶液濃度方面有不同看法，李曉亮等人設(shè)置不同了10組不同濃度 HgCl₂溶液和不同消毒時(shí)間進(jìn)行草莓莖尖的消毒滅菌試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出用0.2%的升汞溶液處理8～11min，消毒效果最好;在消毒所用時(shí)間方面，升汞消毒的時(shí)間長短對組培的影響是研究最多的一方面，大多數(shù)作者報(bào)道 7～8 min 為宜。

另外，需要注意的是不同品種對升汞的敏感程度有差異，在消毒時(shí)，應(yīng)根據(jù)草莓品種的不同，考慮其敏感程度和耐受程度，適當(dāng)選擇消毒所用溶液濃度和消毒時(shí)間長短。

1.3外植體的接種

若以莖尖作為外植體，可將其剪成0.5～1cm長短，接種時(shí)直接插入培養(yǎng)基即可，但操作過程中應(yīng)注意上下方向，因?yàn)橹参镏荒苡尚螒B(tài)學(xué)上端運(yùn)輸?shù)叫螒B(tài)學(xué)下端，所以在操作時(shí)方向一定不要弄錯(cuò)。

若以葉片作為外植體，可以平鋪接種，培養(yǎng)時(shí)葉片正面朝上放置更有利于愈傷組織的產(chǎn)生。這是因?yàn)槿~背面氣孔多，所以葉面正面朝上放置易從培養(yǎng)基中吸收更多營養(yǎng)。

無論是以哪種材料作為外植體，在接種時(shí)必須要注意的就是無菌操作。

1.4外植體的誘導(dǎo)培養(yǎng)

接種后要進(jìn)行人工誘導(dǎo)培養(yǎng)，若外植體為莖尖或莖段時(shí)，可誘導(dǎo)外植體直接成芽。培養(yǎng)時(shí)多以MS為基本培養(yǎng)基，加入細(xì)胞分裂素和生長素兩類植物生長調(diào)節(jié)劑，細(xì)胞分裂素（6-BA）的濃度一般為0.5～2.0 mg/L，生長素（NAA、IBA）的濃度一般為0.01～0.1mg/L。

不同品種的草莓進(jìn)行初代培養(yǎng)所需的最適培養(yǎng)基是不同的，其中誘導(dǎo)率（誘導(dǎo)率%=（萌發(fā)出芽的莖尖/接種的莖尖數(shù)）×100%）是一個(gè)關(guān)鍵的指標(biāo)。如紅顏草莓的最適培養(yǎng)基為

MS+2.0mg/L6-BA+0.3mg/LNAA+0.3mg/LIBA，誘導(dǎo)率可達(dá)92%。對于同一品種的草莓來說，誘導(dǎo)率隨6-BA質(zhì)量濃度的適度增加而增加。

1.5芽的增殖培養(yǎng)

外植體誘導(dǎo)成芽后，需要進(jìn)行繼代培養(yǎng)進(jìn)行芽的增殖。與誘導(dǎo)培養(yǎng)基相似，基本培養(yǎng)基一般也是以MS，加入細(xì)胞分裂素和生長素兩類植物生長調(diào)節(jié)劑，但所需濃度不同，細(xì)胞分裂素的濃度一般為0.3～1.0 mg/L，生長素的濃度一般為0.01～0.5mg/L。

不同品種的草莓進(jìn)行繼代培養(yǎng)所需的最適培養(yǎng)基是不同的，其中增殖系數(shù)（增殖系數(shù)=增殖后不定芽總數(shù)/接種的不定芽數(shù)）是一個(gè)關(guān)鍵的指標(biāo)。如白雪公主的最適培養(yǎng)基MS+0.5mg/L6-BA+0.1mg/LIBA，增殖系數(shù)為8.0。增殖系數(shù)隨6-BA濃度的適度增高而增大，但6-BA濃度過高玻璃化現(xiàn)象嚴(yán)重。對于同一品種的草莓來說，較高濃度的 NAA 反而不利于紅顏叢生芽的增殖， 這與董敬超的研究結(jié)果一致。

1.6試管苗的生根培養(yǎng)

選取生長良好、玻璃化較小的叢生苗作為生根培養(yǎng)的材料，轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，25～30d后統(tǒng)計(jì)生根率、平均根長和平均每株生根條數(shù)。

草莓組培苗較易生根，基本可達(dá)到100%，但不同的生根培養(yǎng)基、不同種類濃度的生長調(diào)節(jié)劑、以及附加物都對生根指數(shù)有一定的影響。培養(yǎng)時(shí)一般采用1/2MS的培養(yǎng)基，1/2MS培養(yǎng)基的母液中大量元素含量少，生根效果最好，也有采用1/4MS培養(yǎng)基的。不同激素的種類及濃度對于其生根的影響差異顯著。生長素NAA和 IBA 對誘導(dǎo)草莓生根具有良好效果，兩者所誘導(dǎo)根系分化的特征有所不同，NAA誘導(dǎo)生根數(shù)較多，IBA促進(jìn)新根伸長作用明顯。在培養(yǎng)基附加物方面，一般認(rèn)為，在培養(yǎng)基中添加活性炭更利于生根。不同品種的草莓進(jìn)行生根培養(yǎng)所需的最適培養(yǎng)基是不同的，其中生根指數(shù)（生根指數(shù)包括生根率、平均生根數(shù)和平均根長）是判斷生根培養(yǎng)成功率高低的關(guān)鍵指標(biāo)。如紅顏草莓的最適培養(yǎng)基為1/2MS+0.4mg/L IBA，生根率100%，平均生根數(shù)10.0，平均根長5.0。

1.7試管苗的馴化移栽

移栽的基質(zhì)和季節(jié)對移栽成活率影響極大?；|(zhì)分為有機(jī)基質(zhì)和無機(jī)基質(zhì)，移栽時(shí)兩種基質(zhì)常搭配使用，無機(jī)基質(zhì)中蛭石作為土壤改良劑，其離子交換性能有效促進(jìn)植物根系的生長;珍珠巖透氣性能好，保水能力強(qiáng)，所以都會(huì)以這兩種或其中一種與有機(jī)基質(zhì)以不同的配比作為移栽基質(zhì)。如紅顏草莓最佳移栽基質(zhì)配比為營養(yǎng)土：珍珠巖：蛭石=1：1：1，移栽成活率達(dá)到97.7%。3月至5月上旬為最佳移栽季節(jié)。

2 草莓快繁中的問題

2.1培養(yǎng)條件

培養(yǎng)溫度控制在24～27℃，濕度控制在30%～45%，光照時(shí)間12～16h/d，光照強(qiáng)度為1500lx～3000lx。培養(yǎng)基若無特殊說明，均加蔗糖30g/L，瓊脂粉7g/L，培養(yǎng)基pH 5.6～6.0，pH過高培養(yǎng)基變硬，過低培養(yǎng)基不能凝固。

2.2試管苗的褐化及玻璃化

組培苗的玻璃化、褐化現(xiàn)象較為常見，玻璃化苗葉片呈浸水狀，失綠嚴(yán)重，苗脆弱易斷，無法正常生長。培養(yǎng)基中蔗糖和瓊脂的不同濃度配比、培養(yǎng)基中水分含量過高、6-BA濃度的增加都可能增加組培苗玻璃化現(xiàn)象發(fā)生的概率。

通過適當(dāng)提高培養(yǎng)基中瓊脂和蔗糖的濃度、降低培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素和赤霉素的濃度、增加自然光照等方式，可以減少草莓組培苗玻璃化。在對外植體進(jìn)行消毒后，用300mg/LVC浸泡12min，可以防止草莓莖尖組織培養(yǎng)褐化及玻璃化現(xiàn)象。

3 總結(jié)

在快繁的不同階段，植物所需的激素種類和濃度不同，一般都需要從單一因素和綜合兩個(gè)方面進(jìn)行分析，最終確定每個(gè)時(shí)期最適合的一個(gè)濃度。通過建立不同品種草莓離體快繁的體系，草莓的離體快繁技術(shù)已日趨完善，但組培快繁技術(shù)成本較高，而近年來草莓的工廠化生產(chǎn)迅速發(fā)展，要想滿足這樣的需求，需要致力于新型的快繁技術(shù)，研究如何以最低的成本，達(dá)到最好的效益。目前，已有一些新的技術(shù)出現(xiàn)，如基于植物微擴(kuò)繁器的草莓快繁技術(shù)，相信以后這樣的研究后越來越多。

（作者單位：哈爾濱師范大學(xué)教師教育學(xué)院）