胃癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，在中國(guó)其發(fā)病率和病死率均較高[1]。胃癌的發(fā)生發(fā)展與多種因素(包括環(huán)境因素、幽門螺桿菌感染、飲食習(xí)慣、遺傳因素等)密切相關(guān)，且療效及預(yù)后與腫瘤的轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)密切相關(guān)[2]。胃癌的發(fā)生并不是由正常胃黏膜細(xì)胞直接轉(zhuǎn)變?yōu)槟[瘤細(xì)胞的，而是一個(gè)多因素參與、多步驟癌變的過程[3]。拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα(TOP2A)又稱旋轉(zhuǎn)酶，參與了機(jī)體內(nèi)基因復(fù)制、細(xì)胞增殖等過程[4]。研究顯示，TOP2A在乳腺癌等多種腫瘤中呈高表達(dá)，且與腫瘤的惡性程度呈正相關(guān)[5]。染色質(zhì)重塑因子1(Rsf-1)位于11q13.5擴(kuò)增基因，該位置包含EMSY、PAK1、CCND1及Rsf-1等多個(gè)候選致癌基因。既往研究顯示，Rsf-1在頭頸部、消化系統(tǒng)及泌尿系統(tǒng)腫瘤組織中高表達(dá)，且與患者腫瘤的惡性程度、治療耐藥性及預(yù)后不良等關(guān)系密切[6-7]。目前有關(guān)Rsf-1、TOP2A在胃癌中的研究報(bào)道較少，本文觀察了其在胃癌及癌前病變組織中的表達(dá)，探討其在胃癌發(fā)生、發(fā)展機(jī)制中的作用，旨在為臨床診治、判斷預(yù)后提供參考。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

收集湖北省腫瘤醫(yī)院于2015年3月至2018年10月間存檔的胃組織標(biāo)本，包括33例慢性萎縮性胃炎、31例腸上皮化生、35例異型增生，另選擇同期在本院行手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的55例胃癌組織及癌旁組織(距腫瘤組織>5 cm)標(biāo)本。55例胃癌組織標(biāo)本中，男性36例，女性19例，平均年齡(58.67±11.32)歲；33例慢性萎縮性胃炎組織標(biāo)本中，男性22例，女性11例，平均年齡(58.12±10.69)歲；31例腸上皮化生組織標(biāo)本中，男性20例，女性11例，平均年齡(57.96±11.34)歲；35例異型增生組織標(biāo)本中，男性23例，女性12例，平均年齡(58.36±11.47)歲。各組受試者的年齡、性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。所有患者術(shù)前均未接受放射、化學(xué)治療，臨床資料完整。本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)要求，并經(jīng)本院倫理委員會(huì)核準(zhǔn)。

1.2 方法

采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)慢性萎縮性胃炎組織標(biāo)本、腸上皮化生組織標(biāo)本、異型增生組織標(biāo)本及胃癌組織標(biāo)本和配對(duì)癌旁組織標(biāo)本中的Rsf-1蛋白、TOP2A的表達(dá)情況。所有標(biāo)本采用4 %甲醇溶液固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，厚度為4 μm。采用Histostain-Plus試劑盒(購(gòu)自上海起福生物科技有限公司)參照說明書步驟進(jìn)行切片的免疫組織化學(xué)染色。由本院2位資深病理科醫(yī)師在顯微鏡下對(duì)染色切片進(jìn)行雙盲觀察。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn)

觀察記錄各組標(biāo)本的Rsf-1蛋白、TOP2A表達(dá)陽(yáng)性率，并分析各組標(biāo)本之間陽(yáng)性率的差異，以及胃癌組織標(biāo)本的陽(yáng)性率與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系。

Rsf-1蛋白、TOP2A陽(yáng)性判斷依據(jù)著色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞率。著色強(qiáng)度評(píng)分：未染色計(jì)0分，淺黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，棕褐色計(jì)3分。對(duì)3個(gè)典型區(qū)域進(jìn)行高倍(400倍)視野觀察，計(jì)數(shù)150～200個(gè)細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞率≤5%計(jì)0分，5%<陽(yáng)性細(xì)胞率≤25%計(jì)1分，25%<陽(yáng)性細(xì)胞率≤50%計(jì)2分，50%<陽(yáng)性細(xì)胞率≤75%計(jì)3分，75%<陽(yáng)性細(xì)胞率≤100%計(jì)4分。陽(yáng)性細(xì)胞率評(píng)分×著色強(qiáng)度評(píng)分<3分為陰性，≥3分為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本研究采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料以例(%)表示，行卡方檢驗(yàn)。各臨床指標(biāo)間的關(guān)系進(jìn)行Spearman相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Rsf-1蛋白、TOP2A在各組中的表達(dá)

與胃癌組織相比較，癌旁組織、慢性萎縮性胃炎組織、腸上皮化生組織、異型增生組織的Rsf-1蛋白、TOP2A陽(yáng)性率明顯降低；與癌旁組織相比較，腸上皮化生組織、異型增生組織中的Rsf-1蛋白、TOP2A陽(yáng)性率均明顯升高；慢性萎縮性胃炎組織、癌旁組織的Rsf-1蛋白、TOP2A陽(yáng)性率均低于異型增生組織，上述差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見表1。

2.2 Rsf-1蛋白、TOP2A在胃癌組織中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系

胃癌組織中Rsf-1蛋白、TOP2A陽(yáng)性率均與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(χ2=7.090，P=0.008；χ2=5.960，P=0.015)，而與患者年齡、性別、腫瘤大小、浸潤(rùn)深度及TNM分期無明顯關(guān)系(P>0.05)。詳見表2。

表1 Rsf-1蛋白、TOP2A在各組中陽(yáng)性表達(dá)比較[例(%)]

注：與胃癌組織相比，aP<0.05；與癌旁組織相比，bP<0.05；與異型增生組織相比，cP<0.05

表2 Rsf-1蛋白、TOP2A在胃癌中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系/例(%)

續(xù)表2 Rsf-1蛋白、TOP2A在胃癌中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系/例(%)

2.3 Rsf-1蛋白、TOP2A在胃癌組織中的表達(dá)相關(guān)性及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

經(jīng)Spearman相關(guān)分析顯示，Rsf-1蛋白、TOP2A在胃癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.379，P<0.05)；Rsf-1蛋白、TOP2A在胃癌組織中的共陽(yáng)性表達(dá)與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(χ2=7.689，P<0.05)。

3 討論

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)涉及多種因素、多個(gè)步驟的復(fù)雜過程，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為癌前病變(淺表性胃炎→萎縮性胃炎→腸上皮化生→異型增生→胃癌)是胃癌發(fā)生、進(jìn)展的重要機(jī)制之一[8]。分子學(xué)機(jī)制包括抑癌基因失活、致癌基因激活等，使細(xì)胞增殖失控，腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移，進(jìn)而導(dǎo)致惡性轉(zhuǎn)化。鑒于胃癌的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制，本研究比較了慢性萎縮性胃炎組織、腸上皮化生組織、異型增生組織、胃癌組織及癌旁組織中的Rsf-1蛋白、TOP2A表達(dá)水平，旨在為臨床診治提供參考。

Rsf-1位于細(xì)胞核內(nèi)，是常見的擴(kuò)增基因之一，可與人類蔗糖性非發(fā)酵蛋白2同源體(hSNF2H)相互作用，使細(xì)胞在基因生長(zhǎng)信號(hào)和環(huán)境方面的調(diào)控異常而發(fā)生異常增生，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)，Rsf-1在多種消化道腫瘤組織中高表達(dá)，且與患者預(yù)后不良關(guān)系密切[9]。本研究結(jié)果顯示，胃癌組織中的Rsf-1表達(dá)陽(yáng)性率為72.73%，明顯高于癌旁組織，且在異型增生組織、腸上皮化生組織及慢性萎縮性胃炎組織中表達(dá)水平依次降低。提示Rsf-1可能參與了胃癌的發(fā)生、進(jìn)展，且在此過程中扮演致癌基因的角色。本研究分析了Rsf-1與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)Rsf-1陽(yáng)性表達(dá)與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切(P<0.05)。但有研究報(bào)道，Rsf-1的陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及分化程度均有關(guān)[10]。本研究結(jié)果與上述文獻(xiàn)類似，但又不完全一致，考慮可能與本研究的分組及樣本量偏少有關(guān)。

DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶在正常、異常細(xì)胞中均廣泛分布，具有核糖酸空間結(jié)構(gòu)調(diào)節(jié)作用，且是實(shí)現(xiàn)核糖酸生理功能的關(guān)鍵酶。TOP2A是DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶的重要類型，分布于第17號(hào)染色體上，可通過控制DNA拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，在DNA的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺導(dǎo)管癌中TOP2A基因異常發(fā)生率為20.49%，且與患者腫瘤組織分級(jí)、直徑有關(guān)[11]。另有研究指出，TOP2A是影響胃癌患者總生存期的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，且其表達(dá)水平隨表柔比星治療效果的提升而降低[12]。本研究結(jié)果顯示，胃癌組織中的TOP2A蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為67.27%，明顯高于癌旁組織，而在異型增生組織、腸上皮化生組織及慢性萎縮性胃炎組織中的表達(dá)水平依次降低，且TOP2A蛋白陽(yáng)性表達(dá)與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切(P<0.05)。這與林陳石[13]的研究結(jié)果相似，但該研究發(fā)現(xiàn)TOP2A蛋白的表達(dá)水平與性別有關(guān)，與本研究結(jié)果并不一致，這可能與研究納入條件(該研究為胃腺癌)不同有關(guān)。此外，本研究發(fā)現(xiàn)Rsf-1與TOP2A蛋白在胃癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)，與既往研究結(jié)果基本一致[14-15]。

綜上所述，Rsf-1、TOP2A蛋白在胃癌組織中表達(dá)升高，高于癌旁組織和癌前病變組織，且與胃癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，對(duì)其檢測(cè)有利于對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移進(jìn)行評(píng)估，從而指導(dǎo)臨床診治。

本研究的局限性在于僅為單中心回顧性研究，樣本例數(shù)偏少，未能隨訪觀察不同Rsf-1、TOP2A蛋白表達(dá)水平患者的預(yù)后，這為后續(xù)研究指明了方向。