葉智裕，秦鑒，陳洪達

中山大學附屬第七醫(yī)院，廣東 深圳 518000

在卵巢功能保護方法中，熱量限制為延緩卵巢及機體衰老的重要方式之一，但具體作用機制目前鮮有報道?；诖耍敬芜x42只8周健康雌性C57BL/6小鼠分組進行自由飲食及熱量限制研究，并探究熱量限制對小鼠抗氧化應激能力對卵巢影響。

1 材料與方法

1.1 一般材料 選2018年6月-2019年8月期間，42只8周健康雌性C57BL/6小鼠，隨機分組，形成常規(guī)組（21只，飲食自由）、研究組（21只，熱量限制），飼養(yǎng)2周后開始用于模型構建。

1.2 方法 常規(guī)組：飼料成分：纖維5%、脂肪4%、蛋白18%，每天每只飼料為3.8g，不限制飲水。

研究組：按照常規(guī)組75%進行飼養(yǎng)，即每只每天飼料為2.8g，不限制飲水。飼養(yǎng)8周后完成模型構建。

模型構建完成后，每組隨機取7只小鼠，腹腔麻醉注射處死后，眼球摘除采血；分離雙側卵巢，兩側卵巢分別以-80℃干凍保存、4%多聚甲醛固定。

1.3 觀察指標 對兩組小鼠雌二醇、孕酮、卵泡數(shù)量、抗過氧化應激反應相關指標進行比較。

雌二醇、孕酮檢測方式采用ELISA試劑盒檢測；卵泡數(shù)量檢測方式：取以4%多聚甲醛固定的卵巢以常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片（厚度為4μm），每4片后取出1片行HE染色（蘇木素-伊紅染色法），請2名閱片者共同閱片，取平均數(shù)，卵泡術計數(shù)標準為在光鏡下卵母細胞核?？寡趸瘧し磻嚓P指標檢測指標包括SIRT（基因sirtuin）3、CAT（過氧化氫酶）mRNA，檢測方式為實施熒光定量PCR技術。

1.4 統(tǒng)計學方法 選用SPSS24.0計算，計量資料（技術水平等）用（Mean±SD）表示，t檢驗，計數(shù)資料（卵泡數(shù)量等）用（%）表示，χ2檢驗；P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組小鼠卵泡數(shù)量 研究組總卵泡764個，常規(guī)組401個，始基卵泡占比分別為38.22%（292/764）、29.43%（118/401），閉鎖卵泡占比分別為5.37%（41/765）、16.71%（67/401），差異有統(tǒng)計學意義（χ2=8.916、40.71，P=0.003、0.000＜0.05）。

2.2 兩組小鼠血清雌二醇、孕酮水平 研究組雌二醇水平較常規(guī)組高，孕酮水平較常規(guī)地低（P＜0.05），見表1。

表1 兩組小鼠血清雌二醇、孕酮水平（Mean±SD）

2.3 兩組小鼠抗氧化應激相關指標 常規(guī)組SIRT3、CAT表達水平為1.00，研究組SIRT3表達水平1.38、CATmRNA表達水平1.55，研究組兩者表達水平均較常規(guī)組上調，差異有統(tǒng)計學意義，（t=4.087、5.916，P=0.002、0.000＜0.05）。

3 討論

熱量限制指保證生物體營養(yǎng)成分基礎上，限制每日熱量攝入，能夠在一定程度上降低生物體老齡化發(fā)生的心血管疾病、延長壽命等作用[1]。卵巢衰老為自然過程，主要原因為卵巢儲備功能下降、卵泡數(shù)量下降，同時因卵巢環(huán)境變化，引發(fā)內分泌水平紊亂等情況。因此本次研究探究熱量限制對卵巢保護功能的影響[2]。

本次研究中，相同飲食時間內，研究組小鼠始基卵泡占比增加，減少閉鎖卵泡占比，能夠說明，熱量飲食可阻止化療小鼠始基卵泡向初級卵泡轉變，進而減少卵泡募集消耗；而此時小鼠雌二醇數(shù)量上升，在下丘腦-垂體-卵巢軸抑制下，可降低黃體形成，并在孕酮水平較低的情況下，使其生殖能力受到一定程度的抑制，但因卵巢儲備功能的相對提升，一旦恢復正常飲食，可增強小鼠生殖能力；在對氧化應激反應研究中，研究組SIRT3、CATmRNA表達水平均較常規(guī)組上調，考慮原因為機體食物代謝過程中可產(chǎn)生大量自由基，而熱量限制可減少機體氧化應激反應發(fā)生，進而達到抗卵巢衰老的作用。

綜上，熱量限制可通過增強小鼠卵巢抗氧化應激能力，進而可增強及卵巢儲備能力，并改善改善內分泌水平，達到增強卵巢保護功能的效果。但卵巢衰老過程中受多種因素影響，因此具體機制仍有待進一步研究，以為延緩卵巢衰老提供治療思路。