彭 有 金武龍

口腔癌是常見的口腔惡性腫瘤之一，占比高達90%以上，而口腔鱗狀細胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)約占頭頸部惡性腫瘤80%以上[1]，常發(fā)生在舌、牙齦、頰粘膜等部位[2]。在我國，其發(fā)病率約在3.6/ 10～8.0/ 10 萬人。近年來，OSCC發(fā)病率逐年升高并且有年輕化的趨勢。在臨床中采用手術(shù)治療、放化療等手段為主要治療方案。但因其惡性程度高且容易出現(xiàn)局部侵襲和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，高達60%的OSCC 患者在就診時已處于臨床進展的晚期階段(Ⅲ期、Ⅳ期)，使得患者不僅存活率較低，并且生活質(zhì)量受到嚴重影響[3]。在過去的30 年里，OSCC 患者的總體生存率也只能達到50%左右而并未出現(xiàn)明顯改善。

既往的研究者們多試圖以優(yōu)化臨床治療方法為突破口，但讓人深感遺憾的是研究結(jié)果并不理想。隨著近年來分子生物學的迅猛發(fā)展，二代測序技術(shù)的進一步廣泛應用，對分子通路和蛋白組學等相關(guān)研究報道不斷增多，人類對自身的了解從基因?qū)用嫔线M一步加深。研究者們發(fā)現(xiàn)有一種特殊的RNA在腫瘤細胞中異常表達，并在腫瘤發(fā)展進程中扮演重要的角色[4]。于是許多研究者逐漸意識到可以通過深入研究LncRNA 在OSCC 的分子發(fā)生機制層面的作用，進而分析OSCC 發(fā)生和發(fā)展的可能機制并積極探索臨床治療OSCC 的有效靶點對促進OSCC 的早期發(fā)現(xiàn)、診斷及治療都具有積極的意義[5，6]。由于國內(nèi)和國際上關(guān)于頭頸部腫瘤的區(qū)域劃分習慣不同，“OSCC”的定義為國內(nèi)研究者的習慣，故本文所討論的研究進展多為國內(nèi)的研究者報道在國際期刊的優(yōu)秀成果。

1.長鏈非編碼RNA 的概念

人類基因組序列轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的RNA 中僅有不足2%能編碼蛋白，其中的絕大部分不能編碼蛋白。這一大部分不能編碼蛋白的RNA 被稱為非編碼RNA(non-coding RNA，ncRNA)。顧名思義，這些RNA 都可以轉(zhuǎn)錄但不翻譯蛋白。在RNA 水平就開始影響細胞的分子進程。這類RNA 根據(jù)長度可以分三類。這其中大多數(shù)為第三類，即長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，LncRNA)，約有5.8 萬個[7，8]。

2.OSCC組織中的LncRNA

研究者對LncRNA 的認識還處在探索階段，如此數(shù)量眾多的LncRNA 起初被認為是無功能的“噪音”，是RNA 聚合酶II 轉(zhuǎn)錄的副產(chǎn)物，不具有生物學功能。隨著研究者發(fā)現(xiàn)LncRNA 參與了X染色體沉默、基因組印記以及基因修飾、轉(zhuǎn)錄激活、轉(zhuǎn)錄干擾、核內(nèi)運輸?shù)榷喾N重要的調(diào)控過程。LncRNA 的作用才逐漸開始引起研究者們廣泛的關(guān)注。隨著研究的不斷深入，近年來研究者們發(fā)現(xiàn)LncRNA 可以在表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后多個水平調(diào)控基因表達，對于影響細胞多種生物和病理過程的調(diào)控更直接更快速[9，10]。國內(nèi)外大量的研究證實LncRNA 在不同層面參與多種腫瘤發(fā)生和發(fā)展的病理過程[11]。研究表明LncRNA 參與了許多重要的生理和病理過程，比如細胞增殖[12]，分化[13]，形成組織[14]、器官等[15]過程。

在2011 年第一代圖譜中LncRNA 的異常表達被報道，其中涉及到了多達十九種癌癥。LncRNA可以通過基因修飾、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后處理等途徑作為基因表達的調(diào)節(jié)因子。許多研究表明，LncRNA可通過多種途徑和分子機制參與OSCC 的增殖、凋亡、血管生成、轉(zhuǎn)移和侵襲。在過去的幾年里，大量的研究表明，LncRNA 的上調(diào)和下調(diào)參與了OSCC 的發(fā)展和進展。

一些LncRNA 在OSCC 組織中的高表達促進了癌細胞增殖、侵襲和遷移。劉等[16]研究發(fā)現(xiàn)在OSCC 組織中TUG 1 的表達較高。然而，它的生物學機制口腔鱗狀細胞癌尚不清楚。本研究采用實時定量聚合酶鏈反應(PCR)方法檢測了TUG 1 在口腔鱗癌細胞中的表達。結(jié)果發(fā)現(xiàn)TUG 1 的過表達顯著地促進了OSCC 細胞的增殖和遷移潛能。

linc00152 也是LncRNA 家族成員之一，且已有研究表明其高表達于頭頸部鱗狀細胞癌。故推測在OSCC 的病理過程中，linc00152 可能也發(fā)揮了一定作用。馬等[17]通過對OSCC 組織、正常癌旁組織及OSCC 細胞系中的linc00152 表達水平進行檢測，并比較不同臨床病理特征的OSCC 患者linc00152表達水平的差異。實驗結(jié)果表明linc00152 表達水平在OSCC 組織標本中的發(fā)生明顯上調(diào)。但沒有證據(jù)表明linc00152 的表達水平受到年齡、性別、TNM 分期及是否伴有局部浸潤的其他因素影響。研究者發(fā)現(xiàn)通過敲低linc00152 在OSCC 細胞中的表達后，可有效阻滯OSCC 細胞增殖、侵襲和遷移，從而推斷l(xiāng)inc00152 可能作為原癌基因而誘導OSCC 的進展[18，19]。

本文綜述了LncRNA 在OSCC 組織的發(fā)展和進展中的作用。

3.LncRNA 在OSCC組織中的作用

3.1 LncRNA 影響轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)轉(zhuǎn)化生長因子-β 在不同類型的人類癌癥的進展中起著至關(guān)重要的作用。在癌癥發(fā)展過程中經(jīng)常觀察到轉(zhuǎn)化生長因子-β 的激活[20]。轉(zhuǎn)化生長因子-β在早期階段通過抑制癌細胞增殖而發(fā)揮抑制作用，而在晚期階段則會促進癌癥轉(zhuǎn)移[21]。PAPAS 是一種對核糖體RNA 合成具有抑制作用的LncRNA。張等[22]認為PAPAS 的過表達導致轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)升高，促進OCSS 細胞的侵襲和遷移。TGF-β1 抑制劑可以減輕PAPAS 過表達的影響反向印證了這一觀點。由此，他們推斷PAPAS 可能通過上調(diào)TGF-β1 促進OCSS 的發(fā)生。另一種可以影響TGF-β1 水平的LncRNA 是MIR4435-2HG。沈等[23]研究發(fā)現(xiàn)MIR4435-2HG 過度表達導致TGF-β1 表達上調(diào)。

3.2 LncRNA 影響細胞對化療藥物的敏感性順鉑目前是臨床上常用的化療藥物。王等[24]發(fā)現(xiàn)HOX 反義轉(zhuǎn)錄本(HOX antisense intergenic RNA，HOTAIR)通過抑制OSCC 細胞自噬，促進細胞凋亡及對順鉑的敏感性。自噬是癌組織細胞一種重要的自我保護機制[25]。Tao 等[26]發(fā)現(xiàn)在OSCC 組織中存在HOTAIR-miR-326-MTA2 軸影響細胞的生物學行為。同樣會影響癌細胞對順鉑敏感性的還有PVT1。王等[27]發(fā)現(xiàn)PVT1 通過調(diào)節(jié)miR-194-5p/ HIF1a 軸增強OSCC 細胞的增殖和順鉑耐藥。

3.3 LncRNA 參與調(diào)節(jié)“軸” Liu 等[28]發(fā)現(xiàn)RP11-874J12.4 通過miR-19a-5p/ EBF1 軸促進OSCC 的發(fā)生。RP11-874J12.4 和miR-19a-5p 形成了一個負調(diào)節(jié)環(huán)，抑制了OSCC 中miR-19a-5p的表達。miR-19a-5p 通過直接結(jié)合EBF1 mRNA的非翻譯區(qū)抑制EBF1。Li 等[29]發(fā)現(xiàn)RBM5-AS1通過調(diào)節(jié)miR-1285-3p/ YAP1 軸促進OSCC 的侵襲行為。另一位研究者發(fā)現(xiàn)[30]OIP5-AS1 通過調(diào)節(jié)miR-338-3p/ NRP1 軸促進口腔鱗狀細胞癌的進展。OIP5-AS1/ miR-338-3p/ NRP1 軸調(diào)控OSCC 的增殖、遷移和侵襲。類似的，Sun 等[31]發(fā)現(xiàn)敲低長非編碼RNA 結(jié)腸癌相關(guān)轉(zhuǎn)錄1(CCAT1)通過抑制盤狀蛋白結(jié)構(gòu)域受體2(DDR2)/ ERK/AKT 軸抑制口腔鱗狀細胞癌的增殖、侵襲和遷移。

3.4 LncRNA 對分子通路產(chǎn)生影響 LncRNA不僅參與調(diào)節(jié)“軸”，還參與分子通路。方正月等[32]檢測了101 例OSCC 組織中CASC9 的表達并進行了臨床相關(guān)性及生存分析。推斷CASC9 是OSCC的獨立危險因素，其通過激活PI3K/ AKT 通路促進OSCC 的發(fā)展。方首次證明了CASC9 在OSCC組織中的表達明顯升高。其中CASC9 高表達的患者生存時間明顯縮短；在沉默CASC9 后，PI3K和p-AKT 的表達明顯降低，SCC15 細胞的增值、遷移和侵襲能力明顯減弱[33]。

Xiong Lei 等[34]發(fā)現(xiàn)HOTTIP 的敲除抑制了OTSCC 細胞的增殖、遷移和侵襲。作為一種分子海綿的HOTTIP 拮抗miR-124-3p 對OTSCC 細胞增殖、遷移和侵襲的有效性。miR-124-3p 與HMGA2 直接相互作用，通過HMGA2 調(diào)節(jié)OT SCC 細胞的增殖、遷移和侵襲。故推斷HOTTIP靶向miR-124-3p 調(diào)控HMGA2 介導的Wnt/ bcatenin 通路。

3.5 LncRNA 的負相關(guān)及反饋調(diào)節(jié) 在OSCC細胞中，存在一些與LncRNA 相關(guān)的反饋調(diào)節(jié)。Kong 等[35]發(fā)現(xiàn)LINC01133 通過GDF15 的反饋調(diào)節(jié)回路抑制口腔鱗狀細胞癌轉(zhuǎn)移。在OSCC 中，LINC01133 的高表達與較少的轉(zhuǎn)移和較好的預后有關(guān)。RNA-seq 的結(jié)果表明，LINC01133 抑制GDF15，GDF15 能挽救LINC01133 對OSCC 細胞遷移和侵襲的抑制作用。有趣的是，GDF15 也抑制了LINC01133。此外，在臨床研究中，LINC01133和GDF15 的表達之間存在顯著的負相關(guān)關(guān)系。同樣的，Jin 等[36]發(fā)現(xiàn)腫瘤組織和健康組織中MORT和ROCK1 的表達水平呈負相關(guān)。在腫瘤組織中的MORT 表達下調(diào)，而ROCK1 表達上調(diào)，高于OSCC 患者的癌旁健康組織。低MORT 水平與不良生存率顯著相關(guān)。

3.6 LncRNA 家族中的反義RNA1(AS1) Opa相互作用蛋白5 反義RNA 1(OIP5-AS1)是一種新的鑒定出的LncRNA，已被認為是多種癌癥中的癌基因。Li 等[30]發(fā)現(xiàn)OIP5-AS1 通過調(diào)節(jié)miR-338-3p/ NRP1 軸促進口腔鱗狀細胞癌的進展。相似的，另一位研究者發(fā)現(xiàn)RBM5-AS1 通過調(diào)節(jié)miR-1285-3p/ YAP1 軸促進口腔鱗狀細胞癌的侵襲行為。

缺氧微環(huán)境在包括OSCC 在內(nèi)的實體腫瘤的進展中起著重要作用。透明質(zhì)酸合成酶2 反義RNA 1(HAS2-AS1)已被證實在OSCC 細胞中增加。Zhu等[37]發(fā)現(xiàn)HAS2-AS1 是唯一一個在其啟動子區(qū)具有低氧反應元件(HRE)的酶。進一步研究發(fā)現(xiàn)HAS2-AS1 通過穩(wěn)定HAS2 介導缺氧誘導的OSCC細胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)變。

4.小結(jié)

通過不斷深入的研究，LncRNA 在OSCC 的分子發(fā)生機制層面的作用逐漸被廣大研究者注意到。通過這些研究，大家開始逐漸獲知OSCC 的發(fā)生發(fā)展的分子機制，并據(jù)此積極探索臨床治療OSCC 的切入點。LncRNA 在OSCC 的發(fā)生發(fā)展過程中必定是在多水平多方面發(fā)揮巨大作用，這猶如一座寶庫有待廣大醫(yī)務(wù)工作者和科研人員深入發(fā)掘。我相信，隨著高質(zhì)量測序技術(shù)的進一步推廣，越來越多的有關(guān)LncRNA 的作用將會揭開神秘面紗。這些作用機制和原理的發(fā)現(xiàn)，必將為OSCC 的治療作出巨大貢獻。