摘要：本文通過(guò)綜述當(dāng)歸分子的基因組DNA提取方法及其檢測(cè)方法以及其分子鑒定的方法，提供給大家有效提取當(dāng)歸基因組DNA分子的一些改進(jìn)思路，有望為當(dāng)歸分子基因組DNA提取的方法及其分子鑒定方法的完善提供一些理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：當(dāng)歸;DNA分子;分子鑒定

1.取樣

當(dāng)歸作為重要的中草藥成分，經(jīng)過(guò)加工，加入到藥品中，不同相態(tài)的藥品中的當(dāng)歸成分取樣方法各不相同，基因組DNA不同的提取方法也不同。傳統(tǒng)的十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）法現(xiàn)在多以這些方式對(duì)不同相態(tài)中的藥品進(jìn)行取樣：藥片、散劑和藥丸，稱(chēng)量后用研磨法取樣;膠囊類(lèi)藥品脫去外殼后，直接稱(chēng)量即可;液體藥劑直接用移液槍抽取合適的量即可。

2.DNA分子提取

DNA分子的提取方法較多：十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）法，十二烷基磺酸鈉（SDS）法以及磁珠法等，這三種提取方法在中草藥成分的基因組DNA提取中都比較常用。其中CTAB法為經(jīng)典的DNA提取方法，許多物種的DNA都可以用它來(lái)提取，且經(jīng)濟(jì)易得，但其在當(dāng)歸DNA分子提取中一直難以應(yīng)用。

最近幾年，當(dāng)歸基因組DNA分子的提取一直是一個(gè)研究熱點(diǎn)，有研究者將中草藥中提取DNA的方法在當(dāng)歸基因組DNA分子提取中都做了實(shí)驗(yàn)，尤其是對(duì)傳統(tǒng)CTAB法進(jìn)行了深入的研究，研究結(jié)果顯示：?jiǎn)我坏氖褂檬榛谆寤@（CTAB）法提取藥品中當(dāng)歸基因組DNA分子的方法不可取，提取雜質(zhì)多甚至于難以提出，但先用十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）法提取藥品中當(dāng)歸基因組DNA分子，然后再用試劑盒進(jìn)行后續(xù)提純處理，會(huì)大大提高實(shí)驗(yàn)的完成度和準(zhǔn)確性，遠(yuǎn)勝于其他一些提取藥物中當(dāng)歸基因組DNA分子的提取方法。

3.DNA分子檢測(cè)

3.1設(shè)計(jì)引物

根據(jù)目標(biāo)基因片段的堿基序列按引物設(shè)計(jì)的一般原則設(shè)計(jì)引物，引物設(shè)計(jì)的好壞直接關(guān)系到PCR擴(kuò)增的結(jié)果。

3.2PCR擴(kuò)增

PCR技術(shù)是現(xiàn)代分子生物學(xué)的常用的技術(shù)，是在體外模擬基因序列擴(kuò)增的技術(shù)，可實(shí)現(xiàn)基因組序列短期內(nèi)的快速擴(kuò)增，放大特定的基因序列，便于檢測(cè)。這項(xiàng)技術(shù)大致可分為三個(gè)部分：高溫變性，使目的基因的雙鏈在95°C高溫下被打開(kāi);低溫退火，使引物與單鏈按照堿基互補(bǔ)配對(duì)選擇進(jìn)行結(jié)合，一般需要自己進(jìn)行溫度梯度，尋找合適的退火溫度，通常退火溫度在60°C左右;適溫延伸，在DNA聚合酶的最適溫度72°C下，DNA聚合酶可以沿著磷酸到五碳糖（5-3）的方向合成互補(bǔ)鏈，最終完成目的基因序列的擴(kuò)增。

3.3瓊脂糖凝膠電泳與紫外分光光度計(jì)測(cè)量法

瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)是檢測(cè)DNA完整性和濃度比較好的一項(xiàng)技術(shù)，可以通過(guò)與PCR技術(shù)的結(jié)合，完成多種檢測(cè)任務(wù)，比如：目的基因的鑒定。該方法采用瓊脂糖凝膠作為介質(zhì)，提供以堿性緩沖液環(huán)境來(lái)檢測(cè)大分子量的核酸，可以用大一點(diǎn)的點(diǎn)樣孔進(jìn)行電泳檢測(cè)。電泳完成后有后續(xù)實(shí)驗(yàn)需要可進(jìn)行目的條帶的切膠回收。同樣，紫外分光光度計(jì)也可以檢測(cè)微量基因組DNA的濃度，但對(duì)特異性DNA的檢測(cè)沒(méi)有瓊脂糖凝膠電泳效果好，兩者可以結(jié)合用于當(dāng)歸基因組DNA的檢測(cè)。

4.當(dāng)歸分子的鑒定研究

DNA條碼技術(shù)是中草藥成分鑒定最為普遍的一項(xiàng)技術(shù)，通過(guò)對(duì)提取的樣本基因組DNA中的線(xiàn)粒體細(xì)胞色素C氧化酶亞基1（CO1）基因序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并與其數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行對(duì)比分析，從而實(shí)現(xiàn)物種的快速、準(zhǔn)確的鑒定與分離。這項(xiàng)技術(shù)同時(shí)涉及到了當(dāng)歸基因組DNA的提取和其CO1基因序列的擴(kuò)增，所以能很好的從藥物中提出當(dāng)歸分子的基因組DNA和進(jìn)行目的基因的擴(kuò)增仍是基礎(chǔ)，包括檢測(cè)特異性條帶的瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)。

除了可以快速鑒別與分離出物種的DNA條碼技術(shù)之外，有研究者提出，用葉綠體中的trnL-F序列也可以實(shí)現(xiàn)當(dāng)歸的分子鑒定。當(dāng)歸分子制成藥品的加工過(guò)程中，基因組DNA偶有損傷，而葉綠體基因組相對(duì)于核基因組來(lái)說(shuō)容易保留，不易被破壞，其基因序列更易得到擴(kuò)增，從而完成對(duì)當(dāng)歸分子的鑒定。因此，我們可以鑒此思路，從線(xiàn)粒體和葉綠體的基因組中，尋找適合做當(dāng)歸分子鑒定的基因序列，也就是在藥品加工過(guò)程中最不易被破壞的那部分基因序列，提高鑒定效率。

展望

當(dāng)歸是重要的中草藥成分，在治療方面發(fā)揮著重要的作用。因此，從含有當(dāng)歸成分的藥中成功檢測(cè)出當(dāng)歸DNA分子顯得尤為重要。一方面要綜合現(xiàn)在分子生物學(xué)技術(shù)：PCR技術(shù)，瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)等，保證DNA分子的完整性和成功鑒定;另一方面利用DNA條碼技術(shù)，實(shí)現(xiàn)當(dāng)歸分子的特異性鑒定。本文綜述了當(dāng)歸DNA分子提取及其分子鑒定中用到的一些技術(shù)，希望為藥物中當(dāng)歸成分的有效鑒定提供一些理論依據(jù)。

基金項(xiàng)目：貴州省2017年度黔南州社會(huì)發(fā)展科技計(jì)劃項(xiàng)目“黔南地區(qū)當(dāng)歸道地性相關(guān)的遺傳信息研究”（編號(hào)：黔南科合社字（2017）1號(hào)）

作者簡(jiǎn)介：任永超（1989-），男，貴州都勻人，漢族，研究生，工程師，研究方向：生物化學(xué)與分子生物學(xué)。