劉海芹

【摘要】 目的 分析住院兒童人類皰疹病毒Ⅳ型（EV病毒）感染情況。方法 100例疑似EB病毒感染的住院患兒， 均接受PCR 熒光法檢測全血中EB病毒核酸， 計(jì)算陽性率。結(jié)果 100例患兒的標(biāo)本， 檢測為陽性17份， 陽性率17.00%;其中患兒性別男9例（52.94%）， 女8例（47.06%）。學(xué)齡組患兒陽性率1.49%低于嬰兒組的30.00%、幼兒組的38.46%、學(xué)齡前組的22.22%， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。17例EB病毒感染住院患兒， 表現(xiàn)為支氣管肺炎1例（5.88%）， 表現(xiàn)為心肌炎3例（17.65%）， 表現(xiàn)為咽炎1例

（5.88%）， 表現(xiàn)為傷寒1例（5.88%）， 表現(xiàn)為傳染性單核細(xì)胞增多癥14例（64.71%）;部分患兒同時(shí)表現(xiàn)為兩種疾病。不同季節(jié)就診的疑似EB病毒感染患兒陽性率比較， 差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。17例EB病毒陽性住院患兒中合并感染者8例， 占47.06%;合并病原體>2種者2例， 占11.76%。結(jié)論 EB病毒感染是住院兒童呼吸道感染的一類主要病原體， 各季節(jié)均可能發(fā)病， 且易出現(xiàn)混合其他病原體感染的情況。

【關(guān)鍵詞】 住院;兒童;EB病毒;感染

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.33.101

EB病毒侵襲機(jī)體細(xì)胞分為潛伏感染和增殖性感染兩種形式， 與其他皰疹病毒科的病毒具有相似性[1]。EB病毒主要感染上皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞， 首次感染后病毒會在上呼吸道上皮細(xì)胞或淋巴組織中持續(xù)潛伏存在， 因此EB病毒感染的主要特征為終生攜帶、潛伏感染[2]。當(dāng)前， 臨床上對于EB病毒感染相關(guān)疾病譜的重視程度逐年上升， 本研究具體分析住院兒童EB病毒感染情況， 選取本院2017年1月～2018年12月接受治療的100例疑似EB病毒感染的住院患兒為研究對象， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2017年1月～2018年12月于本院接受治療的100例疑似EB病毒感染住院患兒為研究對象， 所有患兒均存在發(fā)熱、咳嗽等上呼吸道感染癥狀， 且接受常規(guī)抗感染治療效果不佳， 年齡0～12歲。根據(jù)年齡不同將患兒分為嬰兒組（≤1歲， 10例）、幼兒組（1～3歲， 13例）、學(xué)齡前組（3～6歲， 20例）、學(xué)齡組（6～12歲， 67例）。

1. 2 儀器與試劑 熒光定量基因擴(kuò)增儀;全自動(dòng)核酸提取儀;臺式高速離心機(jī);干式恒溫器;EB病毒核酸定量檢測試劑盒。

1. 2 方法

1. 3. 1 標(biāo)本采集 抽取患兒3～5 ml EDTA-K2抗凝靜脈全血， 抽取后緩慢上下顛倒， 保證充分混勻， 立即送檢， 不能立即送檢的標(biāo)本需置于2～8℃溫度下保存， 但要保證在48 h內(nèi)送檢， 且注意不能多次凍融。

1. 3. 2 核酸提取 抽取500 μl抗凝血至1.5 ml離心管， 將1×1000 μl紅細(xì)胞裂解液加入后顛倒混勻， 在室溫下靜止放置5 min。之后在室溫下進(jìn)行5 min的離心處理， 離心速度5000 r/min， 除去上清液， 留取沉淀物。重復(fù)進(jìn)行一次裂解步驟后選取核酸提取液50 μl加入沉淀物內(nèi)， 充分混勻， 以2000 r/min的速度進(jìn)行離心處理10 s， 以100℃的溫度加熱

10 min， 繼續(xù)以12000 r/min的速度下進(jìn)行離心處理10 min， 收集上清液進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

1. 3. 3 PCR擴(kuò)增、熒光檢測 采用35.6 μl、0.4 μl Taq酶制作EB反應(yīng)混合液， 選取4 μl待測樣本DNA加入其中， 設(shè)質(zhì)控品同步處理， 反應(yīng)總體系是40 μl， 低速離心數(shù)秒后順序置于PCR 儀上， 擴(kuò)增程序：95℃， 3 min， 1個(gè)循環(huán);94℃， 15 s;60℃， 30 s;共進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。閾值設(shè)定為恰好超過陰性對照增長曲線的最高點(diǎn)， 檢測樣本中EB DNA為5.0×102～1.0×108 copies/ml時(shí)， 增長曲線為S曲線， 若EB DNA >1.0×108 copies/ml則需做適當(dāng)稀釋， 確保其在有效范圍內(nèi)。陽性率=（強(qiáng)陽性+弱陽性）/總例數(shù)×100%。

1. 4 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 觀察所有疑似EB感染患兒EB病毒及其他病原體檢測陽性情況， 比較四組疑似EB感染患兒及不同季節(jié)就診的疑似EB感染患兒EB病毒檢出情況， 觀察陽性患兒疾病表現(xiàn)情況。陽性判定標(biāo)準(zhǔn)：增長曲線呈S型曲線且Ct值≤20為強(qiáng)陽性;增長曲線呈S型曲線且Ct值為20～38為弱陽性;不符合陽性標(biāo)準(zhǔn)為陰性。

1. 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 100例疑似EB病毒感染住院患兒的血標(biāo)本EB病毒陽性檢出情況 100例患兒的標(biāo)本， 檢測為陽性17份， 陽性率17.00%;其中患兒性別男9例（52.94%）， 女8例（47.06%）。嬰兒組患兒陽性1例， 占比5.89%， 陽性率為30.00%;幼兒組患兒陽性5例， 占比29.41%， 陽性率為38.46%;學(xué)齡前組患兒陽性8例， 占比47.06%， 陽性率為22.22%;學(xué)齡組患兒陽性3例， 占比17.65%， 陽性率為1.49%。學(xué)齡組患兒陽性率低于嬰兒組、幼兒組、學(xué)齡前組， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2. 2 17例EB病毒陽性住院患兒疾病表現(xiàn)情況 17例EB病毒感染住院患兒， 表現(xiàn)為支氣管肺炎1例（5.88%）， 表現(xiàn)為心肌炎3例（17.65%）， 表現(xiàn)為咽炎1例（5.88%）， 表現(xiàn)為傷寒1例（5.88%）， 表現(xiàn)為傳染性單核細(xì)胞增多癥14例（64.71%）;部分患兒同時(shí)表現(xiàn)為兩種疾病。

2. 3 100例疑似EB病毒感染住院患兒EB病毒感染季節(jié)分布情況 春季就診的疑似EB病毒感染患兒陽性率為15.00%（3/20）， 夏季就診的疑似EB病毒感染患兒陽性率為22.73%（5/22）， 秋季就診的疑似EB病毒感染患兒陽性率為16.00%（4/25）， 冬季就診的疑似EB病毒感染患兒陽性率為15.15%（5/33）。不同季節(jié)就診的疑似EB病毒感染患兒陽性率比較， 差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2. 4 17例EB病毒陽性住院患兒其他病原體檢出情況 17例

EB病毒陽性住院患兒檢出副流感病毒者1例， 占5.88%;檢出肺炎支原體者3例， 占17.65%;檢出乙型腦炎病毒者2例， 占11.76%;檢出傷寒或副傷寒桿菌者2例， 占11.76%;檢出戊型肝炎病毒者1例， 占5.88%;檢出腺病毒者1例， 占5.88%;檢出腸道病毒者1例， 占5.88%;檢出乙型肝炎病毒者1例， 占5.88%;檢出輪狀病毒者1例， 占5.88%。其中合并感染者8例， 占47.06%;合并病原體>2種者2例， 占11.76%。

3 討論

EB病毒是一種嗜淋巴細(xì)胞性皰疹病毒， 其特異性高， 是皰疹病毒科γ亞科中唯一一個(gè)可以感染人類的淋巴濾泡病毒， 一般對表皮細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞進(jìn)行侵犯， 且這一過程中細(xì)胞蛋白、病毒糖蛋白均會參與[3]。EB病毒感染不僅會導(dǎo)致傳染性單核細(xì)胞增多癥， 研究還發(fā)現(xiàn)小兒Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌也和EB病毒感染存在相關(guān)性， 甚至可能導(dǎo)致壞死性淋巴結(jié)炎、噬血細(xì)胞綜合征、川崎病、慢性活動(dòng)性EB病毒感染、重癥肺炎等[4]。

EB病毒在人群中感染率非常廣泛， 兒童時(shí)期出現(xiàn)的多是原發(fā)性感染， 具有隱匿起病的特點(diǎn)， 大部分1～5歲患兒發(fā)生EB病毒原發(fā)感染時(shí)多沒有伴發(fā)特異性疾病[5]。EB病毒是學(xué)齡前兒童出現(xiàn)感染性疾病的常見病原體， 同時(shí)臨床發(fā)現(xiàn)EB病毒感染具有地域差異、年齡差異， 發(fā)生EB感染后可能終生潛伏， 其主要傳播途徑是唾液傳播， 部分可經(jīng)輸血液傳播[6]。

EB病毒-DNA載量的分子生物學(xué)檢查、EB病毒相關(guān)抗體的血清學(xué)檢查是EB病毒實(shí)驗(yàn)室檢查的主要內(nèi)容， 不過不同檢驗(yàn)項(xiàng)目、標(biāo)本臨床適用范圍存在差別。通過進(jìn)行EB病毒核酸載量檢測能夠輔助判斷患兒是否為活動(dòng)性EB病毒感染， 且進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR是當(dāng)前檢測EB病毒核算載量最有效的方法[7-10]。

綜上所述， 在小兒感染性疾病中EB病毒感染的比重較高， 同時(shí)臨床會有多種癥狀表現(xiàn)， 臨床必須注重做好EB感染的檢測， 了解相關(guān)疾病發(fā)生的情況， 為臨床診療提供更多科學(xué)信息。

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[收稿日期：2019-03-21]