漆愛(ài)紅

【摘要】 目的 探討溶血、脂肪血及保存條件對(duì)乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸（HBV DNA）、人類免疫缺陷病毒核糖核酸（HIV RNA）核酸檢測(cè)的影響。方法 回顧性分析30份行HBV DNA、HIV RNA核酸檢測(cè)標(biāo)本的臨床資料， 應(yīng)用羅氏MPX V2.0試劑， 分別于4℃、25℃、37℃及-30℃的條件下測(cè)定4 h、24 h、48 h、72 h、1周、4周HBV DNA、HIV RNA的Ct值， 并在不同溶血及脂肪血中測(cè)定HBV DNA、HIV RNA的Ct值。結(jié)果 -30℃、4℃、25℃溫度下保存HBV DNA、HIV RNA的Ct值比較， 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在37℃條件下， HBV DNA在72 h及1周的Ct值高于其他時(shí)間及溫度下的Ct值， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。高濃度TG并不影響核酸檢測(cè)（NAT）， 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。而Hb濃度在97 g/L時(shí)出現(xiàn)NAT檢測(cè)抑制， 其他濃度無(wú)明顯影響， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 高血脂標(biāo)本<7.93 mmol/L可以接收， 溶血標(biāo)本>34 g/L時(shí)需重新留取樣本， 血液標(biāo)本檢測(cè)時(shí)間不宜超過(guò)72 h， 保存溫度以-30℃最佳。

【關(guān)鍵詞】 HBV DNA;HIV RNA;溶血;脂肪血;Ct值

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.33.111

目前臨床對(duì)血液制品的檢測(cè)均采用核酸檢測(cè)技術(shù)（NAT）， 能有效檢出因病毒變異、隱匿性感染等因素， 導(dǎo)致的污染血液。但在實(shí)際工作中， 血液標(biāo)本容易受到保存溫度、溶血、脂肪血等因素影響， 進(jìn)而導(dǎo)致核酸檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)誤差[1]。羅氏MPX V2.0試劑說(shuō)明書(shū)中也提出了相應(yīng)的指導(dǎo)意見(jiàn)， 但各地區(qū)的實(shí)驗(yàn)室對(duì)HBV DNA、HIV RNA檢測(cè)的影響因素不同。本研究進(jìn)一步分析了溶血、脂肪血及保存條件對(duì)HBV DNA、HIV RNA核酸檢測(cè)的影響， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料來(lái)源 回顧性分析2018年1～12月在本中心行HBV DNA、HIV RNA核酸檢測(cè)的30例標(biāo)本的臨床資料。所有血液標(biāo)本經(jīng)血清學(xué)檢測(cè)HBV DNA、HIV RNA均為陰性， 同時(shí)收集HBV DNA、HIV RNA 檢測(cè)陽(yáng)性的血漿， 經(jīng)病毒濃度定量檢測(cè)后， 加入血清學(xué)及NAT 檢測(cè)均為陰性的透亮血漿， 制成12～30倍的核酸試劑檢測(cè)下限濃度的HBV DNA、HIV RNA標(biāo)本。

1. 2 方法 使用羅氏Z480熒光定量PCR儀核酸檢測(cè)系統(tǒng)。分別將標(biāo)本置于-30℃、4℃、25℃、37℃的環(huán)境中放置4 h、24 h、48 h、72 h、1周、4周， 采用熒光PCR法檢測(cè)。收集血液標(biāo)本中的紅細(xì)胞懸液、嚴(yán)重乳糜血漿， 將紅細(xì)胞懸液制成全溶血樣本， 將兩個(gè)樣本離心制成溶血樣本及脂肪血樣本， 然后將溶血樣本、脂肪血樣本、血清學(xué)及NAT檢測(cè)均為陰性的血漿標(biāo)本、12～30倍核酸試劑檢測(cè)下限濃度HBV DNA、HIV RNA標(biāo)本， 保持這兩個(gè)樣本的HBV DNA、HIV RNA最終濃度約為2～5倍核酸試劑檢測(cè)下限濃度[2];采用6混樣模式， 在全自動(dòng)STAR加樣儀中混勻制成血紅蛋白（Hb）， 分為濃度97、34、17、8、5及3 g/L的溶血標(biāo)準(zhǔn)樣本， 以及TG濃度在7.93、3.80、2.63、1.83及1.49 mmol/L的脂肪血標(biāo)準(zhǔn)樣本， 分別行Hb濃度、TG濃度及NAT檢測(cè)。

1. 3 觀察指標(biāo) 比較不同保存條件下HIV RNA、HBV DNA的Ct值;比較不同Hb、TG濃度下HIV RNA、HBV DNA的Ct值。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 不同保存條件下HIV RNA、HBV DNA的Ct值比較

-30℃、4℃、25℃溫度下保存HBV DNA、HIV RNA的Ct值比較， 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在37℃條件下， HBV DNA在72 h及1周的Ct值高于其他時(shí)間及溫度下的Ct值， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2. 2 不同Hb、TG濃度下HIV RNA、HBV DNA的Ct值比較 高濃度TG并不影響NAT檢測(cè)， 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。而Hb濃度在97 g/L時(shí)出現(xiàn)NAT檢測(cè)抑制， 其他濃度無(wú)明顯影響， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

Hb對(duì)核酸檢測(cè)的影響主要是通過(guò)卟啉環(huán)與Taq酶的不可逆結(jié)合， 抑制Taq酶活性[3-6]。脂肪血對(duì)核酸檢測(cè)的影響主要通過(guò)乳糜微粒屏蔽和吸收熒光， 產(chǎn)生熒光淬滅作用， 降低了熒光信號(hào)強(qiáng)度， 減少擴(kuò)增效率[7-10]。本研究結(jié)果顯示， -30℃、4℃、25℃溫度下保存HBV DNA、HIV RNA的Ct值比較， 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。在37℃條件下， HBV DNA在72 h及1周的Ct值高于其他時(shí)間及溫度下的Ct值， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。說(shuō)明HBV DNA在常溫下穩(wěn)定性較高， 在37℃中可能有核酸降解的趨勢(shì)。HIV RNA在各個(gè)不同溫度下均很穩(wěn)定。另外， 本研究中， 高濃度TG并不影響NAT檢測(cè)， 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。而Hb濃度在97 g/L時(shí)出現(xiàn)NAT檢測(cè)抑制， 其他濃度無(wú)明顯影響， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

綜上所述， 高血脂標(biāo)本<7.93 mmol/L可以接收， 溶血標(biāo)本>34 g/L時(shí)需重新留取樣本， 血液標(biāo)本檢測(cè)時(shí)間不宜超過(guò)72 h， 保存溫度以-30℃最佳。

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[收稿日期：2019-03-27]