馬學(xué)禮

（寧夏回族自治區(qū)農(nóng)業(yè)學(xué)校 750021）

1 試驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

寧夏回族自治區(qū)銀川市各縣區(qū)7 家規(guī)模養(yǎng)殖園區(qū)的良種荷斯坦奶牛。

1.2 培養(yǎng)基

普通營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基、血液瓊脂平板、麥康凱培養(yǎng)基、甘露醇高鹽瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基。

1.3 儀器及藥品

超凈工作臺(tái)、高倍顯微鏡、游標(biāo)卡尺、不銹鋼蒸汽消毒器、恒溫干燥箱、恒溫培養(yǎng)箱、高速離心機(jī)、一次性輸精管套、輸精器、75%酒精棉、2%新潔爾滅消毒液等；不同規(guī)格的一次性注射器若干。

2 試驗(yàn)方法

2.1 奶牛子宮內(nèi)膜炎診斷

經(jīng)臨床診斷，患牛拱腰、舉尾，有時(shí)努責(zé)，不時(shí)從陰道流出大量污濁或棕黃色黏液膿性分泌物，有腥臭味，內(nèi)含絮狀物或胎衣碎片，常附著尾根，形成干癡。子宮內(nèi)膜炎的患牛子宮分泌物量多，較稀薄不能拉成絲狀，或量少且黏稠渾濁，呈灰白色或灰黃色[1]。陰道檢查陰道內(nèi)可見子宮頸口不同程度的腫脹和充血。在子宮頸封閉不全時(shí)，有不同性狀的炎性分泌物經(jīng)子宮頸排出，可判定為奶?；加凶訉m內(nèi)膜炎。

2.2 病料采集

獸醫(yī)工作人員將病牛保定，清理患子宮內(nèi)膜炎的病牛外陰糞便，清洗病牛陰門，采用事先準(zhǔn)備好的2%新潔爾滅沖洗消毒。將經(jīng)過(guò)不銹鋼蒸汽滅菌器消毒過(guò)的輸精專用金屬管插入一次性無(wú)菌輸精管套中，采用常用輸精方法將金屬管套插入患病奶牛子宮內(nèi)，用50ml 一次性滅菌注射器在金屬管另一端抽吸數(shù)次，迅速取出輸精管套，將金屬管頂部的分泌物快速注入無(wú)菌玻璃瓶中，嚴(yán)密封口，標(biāo)記病牛號(hào)和采集日期、時(shí)間，迅速送病料到微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)[2]。另取患病奶牛子宮分泌物進(jìn)行涂片染色鏡檢，在采集病料時(shí)切記不能污染病料。

2.3 細(xì)菌分離

利用超凈工作臺(tái)將患病奶牛子宮洗出液用無(wú)菌生理鹽水稀釋一倍后，分別接種到普通營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基、血瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基和甘露醇高鹽瓊脂培養(yǎng)基平板內(nèi)，然后放置37℃溫箱內(nèi)分別培養(yǎng)24h[3]。根據(jù)細(xì)菌生長(zhǎng)狀況、溶血與否、菌落形態(tài)、顏色等分別挑取單菌落進(jìn)行進(jìn)一步的劃線分離純化，平板37℃倒置培養(yǎng)24h。如發(fā)現(xiàn)雜菌需繼續(xù)純化，直到獲得純培養(yǎng)為止。菌種用含20%甘油的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，低溫保存。

2.4 細(xì)菌鑒定

將純化的各菌株接種于細(xì)菌生化鑒定管中，然后放入滅菌平皿，置37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，觀察并記錄生化反應(yīng)結(jié)果[4]。根據(jù)奶牛子宮內(nèi)膜炎致病細(xì)菌的生物學(xué)特性、培養(yǎng)特性和染色特性等進(jìn)行歸類，再根據(jù)奶牛子宮內(nèi)膜炎致病細(xì)菌生化反應(yīng)特性進(jìn)行鑒定。

2.5 藥敏試驗(yàn)

采用濾紙片瓊脂擴(kuò)散法。藥敏試驗(yàn)結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：抑菌圈直徑(包含濾紙片直徑) 用游標(biāo)卡尺進(jìn)行精密測(cè)量。藥敏試驗(yàn)敏感性標(biāo)準(zhǔn)分為3 級(jí)：抑菌圈直徑≥20mm 為非常敏感(++)、在10～20mm 是中敏(+)，＜10mm 為耐藥(-)。

3 結(jié)果

3.1 奶牛子宮內(nèi)膜炎發(fā)病情況

表1 銀川市各縣區(qū)7 家奶牛養(yǎng)殖園區(qū)奶牛子宮內(nèi)膜炎發(fā)生情況統(tǒng)計(jì)

表1 表明，銀川市各區(qū)縣7 家奶牛養(yǎng)殖園區(qū)奶牛子宮內(nèi)膜炎的發(fā)病率為20.65%。

3.2 細(xì)菌分離鑒定結(jié)果

本試驗(yàn)采集銀川市各縣區(qū)7 家奶牛養(yǎng)殖園區(qū)69 頭患子宮內(nèi)膜炎的奶牛的子宮洗出液病料樣品，有效分離并鑒定出6 種類型病原細(xì)菌共計(jì)102 株。

表2 奶牛子宮內(nèi)所分離細(xì)菌種類及數(shù)量

由表2 可知，本次分離出的患牛奶牛子宮內(nèi)膜炎的主要致病菌為大腸桿菌、葡萄球菌、鏈球菌。

3.3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

表3 藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果（單位：mm）

藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，分離出的葡萄球菌對(duì)慶大霉素、環(huán)丙沙星非常敏感，分離出的大腸桿菌對(duì)慶大霉素、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、卡那霉素非常敏感；分離出來(lái)的鏈球菌對(duì)青毒素、環(huán)丙沙星非常敏感；分離出的沙門氏菌對(duì)慶大霉素、氟苯尼考、環(huán)丙沙星、卡那霉素非常敏感；分離出的消化鏈球菌對(duì)氨芐西林鈉、慶大霉素、氟苯尼考非常敏感[5]，參見表3。綜上所述，治療奶牛子宮內(nèi)膜炎的首選藥物是環(huán)丙沙星、慶大霉素、氟苯尼考、卡那霉素。克林霉素、青霉素、氨芐西林鈉效果欠佳，究其原因很大程度上與臨床治療過(guò)程中長(zhǎng)期反復(fù)使用這些藥物產(chǎn)生耐藥性有一定關(guān)系。

4 討論

4.1 奶牛子宮內(nèi)膜炎發(fā)病率

奶牛子宮內(nèi)膜炎發(fā)病原因有很多，主要有病原菌感染、飼養(yǎng)管理、環(huán)境因素、機(jī)體自身抵抗力等，多數(shù)情況下是由于奶牛在產(chǎn)犢過(guò)程中感染傳染性致病菌所致，本試驗(yàn)對(duì)銀川市各縣區(qū)7 家奶牛場(chǎng)患病牛只進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查得知，銀川市各區(qū)縣奶牛養(yǎng)殖園區(qū)奶牛子宮內(nèi)膜炎的發(fā)病率為20.65%，與其他地區(qū)相關(guān)研究資料相比，銀川地區(qū)奶牛子宮內(nèi)膜炎發(fā)病率不低。

4.2 奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌

病原菌經(jīng)產(chǎn)道進(jìn)入奶牛子宮，引起奶牛子宮內(nèi)膜炎的病原菌種類較多，本次試驗(yàn)分離出的6 類病原細(xì)菌分別是大腸桿菌、鏈球菌、葡萄球菌、沙門氏菌、消化鏈球菌、棒狀桿菌。由于試驗(yàn)存在一定誤差，子宮分泌物是否還有其他種類細(xì)菌還需進(jìn)一步探討。

4.3 病原菌藥敏試驗(yàn)

本次分離出的病原菌有大腸桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、沙門氏菌、消化鏈球菌、棒狀桿菌，經(jīng)過(guò)藥敏試驗(yàn)得出主要致病菌為大腸桿菌、葡萄球菌、鏈球菌；治療奶牛子宮內(nèi)膜炎的首選理想藥物有慶大霉素、環(huán)丙沙星、氟苯尼考、卡那霉素。氨芐西林鈉、青霉素、克林霉素效果不明顯，抗菌藥子宮灌注投藥是治療奶牛子宮內(nèi)膜炎的主要方法，如長(zhǎng)期用藥或不規(guī)范用藥，引起抗藥性、耐藥性等不良因素的發(fā)生，從而影響藥物治療效果，導(dǎo)致給藥劑量增大，用藥次數(shù)增加，治療成本提高[6]。同時(shí)可導(dǎo)致藥物殘留，牛奶無(wú)法食用，導(dǎo)致此類常規(guī)藥物的應(yīng)用受到限制。

5 小結(jié)

綜上所述，導(dǎo)致奶牛子宮內(nèi)膜炎的病原菌種類較多，從銀川地區(qū)7 家奶牛養(yǎng)殖園區(qū)患子宮內(nèi)膜炎的病牛子宮洗出液中分離出的6 種類型病原菌，與其他地區(qū)分離到的細(xì)菌種類和比例有一定差異，這與省市奶牛養(yǎng)殖區(qū)域的環(huán)境、飼養(yǎng)管理、奶牛體況、預(yù)防和治療情況等有較大關(guān)系。本試驗(yàn)結(jié)果可以看出，從患奶牛子宮洗出液分離出的大腸桿菌、葡萄球菌、鏈球菌是本地區(qū)奶子宮內(nèi)膜炎的主要病原菌。根據(jù)葡萄球菌、鏈球菌和大腸桿菌的特性得知，這3 類細(xì)菌具備高傳染性、高致病性等特點(diǎn)，奶牛子宮內(nèi)膜炎主要在母牛生產(chǎn)過(guò)程中發(fā)生傳播，大多數(shù)情況下經(jīng)地下水源、工作人員的手、手術(shù)剪刀等途徑混入產(chǎn)道和子宮。高傳染性、高致病性病原菌對(duì)奶牛損傷非常大，一旦感染奶牛會(huì)形成傳染源，如是隱性感染也會(huì)感染養(yǎng)殖場(chǎng)其他牛只，導(dǎo)致傳染病的發(fā)生。因此，對(duì)于導(dǎo)致奶牛子宮內(nèi)膜炎的病原菌應(yīng)及早發(fā)現(xiàn)，快速治療，采取有效防控措施控制傳染源，最大限度減少感染機(jī)會(huì)，更要采取相應(yīng)措施阻斷傳播途徑。

本次試驗(yàn)還分離到環(huán)境性致病細(xì)菌，環(huán)境性致病菌一般存在于養(yǎng)殖區(qū)周圍環(huán)境中，采取消毒措施也不能徹底撲滅，如飼養(yǎng)管理不當(dāng)，奶牛抵抗能力下降，環(huán)境性病原細(xì)菌會(huì)乘虛而入，導(dǎo)致奶牛發(fā)病。因此，養(yǎng)殖場(chǎng)要及時(shí)清潔、保持干燥，可有效降低環(huán)境性致病細(xì)菌的傳播感染，減少奶牛子宮內(nèi)膜炎的發(fā)病概率。在傳染病臨床治療實(shí)踐過(guò)程中多采用聯(lián)合用藥或交替使用藥物，減小單純藥物的用藥劑量或用藥時(shí)間，以預(yù)防耐藥菌株的產(chǎn)生。