王彩媚，伍偉聰，王 淼

（廣東省藥品檢驗(yàn)所，廣東 廣州 510700）

復(fù)方醋酸曲安奈德溶液為皮膚科類(lèi)藥品，臨床用于治療神經(jīng)性皮炎、慢性濕疹、結(jié)節(jié)性癢疹、皮膚淀粉樣變、疥瘡結(jié)節(jié)等。某些復(fù)方醋酸曲安奈德溶液處方中以3-叔丁基-4-羥基苯甲醚（BHA）和2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）為抗氧劑，為控制制劑質(zhì)量，本研究中采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定復(fù)方醋酸曲安奈德溶液中兩者的含量。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1200型高效液相色譜儀，包括二極管陣列檢測(cè)器、紫外檢測(cè)器（美國(guó)Agilent公司）；CP224D型電子分析天平（德國(guó)Sartorius公司）。

圖1 高效液相色譜圖

1.2 試藥

復(fù)方醋酸曲安奈德溶液（A公司，3批，規(guī)格為每瓶15 mL）；BHA對(duì)照品（美國(guó) Macklin公司，批號(hào)為C10013313，含量大于98%）；BHT對(duì)照品（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)為F20100917，含量大于98%）；甲醇為色譜純，乙醇為分析純，水為去離子水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Merck RP-18 Endcapped柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇（A）-水（B），梯度洗脫（10 min時(shí) 40%A，10～40 min時(shí) 40%A→90%A，40～50 min時(shí) 90%A，50～51 min時(shí) 90%A→40%A，51～60 min 時(shí) 40%A）；流速：1.0 mL ／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL[1-2]。

2.2 溶液制備

取BHA和BHT對(duì)照品各10mg，精密稱(chēng)定，置100mL容量瓶中，加85%乙醇溶解并定容，搖勻，即得混合對(duì)照品溶液。取樣品作為供試品溶液。取85%乙醇（本品的處方溶劑）作為陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液、供試品溶液各適量，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1。理論板數(shù)以BHA和BHT峰計(jì)均大于5 000，分離度均大于1.5，基線(xiàn)分離良好。

專(zhuān)屬性試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照品溶液各適量，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液在與混合對(duì)照品溶液保留時(shí)間相同處無(wú)干擾峰，表明方法專(zhuān)屬性良好。

線(xiàn)性關(guān)系考察：取BHA及BHT對(duì)照品各適量，精密稱(chēng)定，加85%乙醇溶解，制成BHA和BHT質(zhì)量濃度均分別為 0.04，0.08，0.10，0.12，0.16，0.20 g ／L 的系列溶液，精密量取10 μL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積為橫坐標(biāo)（X）、質(zhì)量濃度為縱坐標(biāo)（Y，μg／mL）進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得BHA和BHT的回歸方程分別為Y1=0.1219X1+1.257 5（r1=0.999 6）、Y2=0.215 3X2+1.331 6（r2=0.999 7）。結(jié)果表明，BHA 和 BHT質(zhì)量濃度均在0.04～0.20 g／L范圍內(nèi)與峰面積線(xiàn)性關(guān)系良好。

檢測(cè)限與定量限考察：精密量取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液各適量，倍比稀釋?zhuān)磾M訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以信噪比（S／N）10∶1和3∶1分別計(jì)算定量限與檢測(cè)限。結(jié)果BHA和BHT的定量限分別為0.2μg／mL和 0.4μg／mL，檢出限分別為 0.04 μg ／mL 和 0.10 μg ／mL。

精密度試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液各適量，按擬訂色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果BHA和 BHT峰面積的RSD分別為 0.2%和 0.1%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下供試品溶液適量，分別于室溫下放置 0，2，4，8，10，19 h 時(shí)按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果BHA和BHT峰面積的RSD分別為0.3%和0.4%（n=6），表明供試品溶液室溫放置19 h內(nèi)基本穩(wěn)定。由于85%乙醇揮發(fā)性強(qiáng)，建議8 h內(nèi)完成檢測(cè)。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密量取同一批樣品適量，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算含量。結(jié)果BHA和BHT平均含量分別為0.09g／L和 0.10 g／L，RSD分別為0.4%和0.9%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密量取已知含量的樣品2 mL，共9份，分別加入低、中、高質(zhì)量濃度的BHA和BHT對(duì)照品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.4樣品含量測(cè)定

取3批樣品各適量，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，平行3次，記錄峰面積，并計(jì)算樣品含量。結(jié)果3批樣品中BHA 含量均為0.09g／L，BHT含量均為 0.10g／L。

3 討論

根據(jù)復(fù)方醋酸曲安奈德溶液的處方溶劑性質(zhì)及BHA和BHT的結(jié)構(gòu)性質(zhì)，可選擇HPLC法和氣相色譜法進(jìn)行分析測(cè)定[3-4]，由于前法使用更普遍，分析更簡(jiǎn)單，更經(jīng)濟(jì)，故最后選擇HPLC法進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)BHA和BHT的結(jié)構(gòu)性質(zhì)首選C18色譜柱；從環(huán)保角度流動(dòng)相首選甲醇-水系統(tǒng)，經(jīng)試驗(yàn)，BHA和BHT在甲醇-水系統(tǒng)中能得到較好的分離度和峰形；為將處方中極性較大的成分如水楊酸等先沖洗出系統(tǒng)，故設(shè)計(jì)甲醇-水梯度洗脫；流速采用常用流速1.0 mL／min；柱溫選擇高于藥典規(guī)定室溫（25℃），設(shè)定為30℃；利用甲醇-水系統(tǒng)經(jīng)過(guò)全波長(zhǎng)掃描，BHA和BHT在280 nm波長(zhǎng)處均有較大吸收；且供試品溶液與對(duì)照品溶液中BHA和BHT保留時(shí)間一致的色譜峰紫外吸收?qǐng)D譜一致，說(shuō)明無(wú)干擾峰，故設(shè)定波長(zhǎng)均為280 nm。該樣品性狀為澄清液體，直接濾過(guò)后測(cè)定發(fā)現(xiàn)，峰面積和峰形均在合理范圍內(nèi)，設(shè)定直接取樣品作為供試品溶液。配制對(duì)照品選用該樣品處方中的85%乙醇作為溶劑。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

綜上所述，本研究中所建方法的精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性均較好，可用于測(cè)定復(fù)方醋酸曲安奈德溶液中BHA和BHT的含量。