張文燕,郭福慶,曹曉云

(天津市藥品檢驗(yàn)研究院，天津 300070)

半夏糖漿收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》第八冊(cè)，處方中含有生半夏、麻黃、紫菀、桔梗、枇杷葉、遠(yuǎn)志(制)、陳皮、甘草、薄荷油，有止咳化痰的功效，臨床上主要用于咳嗽痰多、支氣管炎。半夏止咳糖漿收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》第十四冊(cè)。處方中含有姜半夏、苦杏仁、款冬花、紫菀、陳皮、瓜蔞皮、麻黃、甘草，有止咳祛痰的功效，臨床上主要用于風(fēng)寒咳嗽、痰多氣逆。本試驗(yàn)對(duì)來自全國(guó)22個(gè)生產(chǎn)企業(yè)的156批半夏糖漿和82批半夏止咳糖漿，按照《中國(guó)藥典》2015年版四部通則1105和1106進(jìn)行計(jì)數(shù)方法和控制菌檢查法的適用性試驗(yàn)和檢查[1]，對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并對(duì)該藥品進(jìn)行了微生物學(xué)質(zhì)量評(píng)價(jià)。因?yàn)樘菨{劑含蔗糖量不低于45%(g/ml)[1]，其含糖量較高的特殊性極利于微生物的生長(zhǎng)繁殖，本試驗(yàn)分別抽取計(jì)數(shù)檢查結(jié)果沒有微生物檢出的39批樣品和有微生物檢出的38批樣品進(jìn)行開封后4個(gè)月微生物計(jì)數(shù)的檢查，以期探討糖漿開啟后存放的適宜時(shí)間長(zhǎng)度，為百姓用藥安全提供一定的指導(dǎo)。

1 儀器與材料

1.1儀器 BINDER BD240 恒溫培養(yǎng)箱(德國(guó)BINDER)； BINDER KB720恒溫培養(yǎng)箱(德國(guó)BINDER)；SANYO MIR-254恒溫培養(yǎng)箱(日本三洋株式會(huì)社)；SANYO MIR-554恒溫培養(yǎng)箱(日本三洋株式會(huì)社)； SG-403A TX-INT生物安全柜(美國(guó)Baker)；SQP 精密電子天平(德國(guó)賽多利斯)；Lab dancer 漩渦混合器(德國(guó)IKA)； MSL-3750高壓滅菌鍋(日本三洋株式會(huì)社)；SHAKE4000-8CE搖床 (美國(guó)Thermo公司)；YamatoADS161SMU超凈工作臺(tái)(日本Yamato株式會(huì)社)。

1.2試驗(yàn)菌種 大腸埃希菌[Escherichiacoli，CMCC(B) 44102]、乙型副傷寒沙門菌[SalmonellaparatyphiB，CMCC(B) 50094]、金黃色葡萄球菌[Staphylococcusaureus, CMCC (B)26003]，枯草芽孢桿菌[Bacillussubtilis, CMCC(B)63501]，銅綠假單胞菌[Pseudomonasaeruginosa, CMCC(B)10104]，白色念珠菌[Candidaalbicans,CMCC (F) 98001]，黑曲霉[Aspergillusniger,CMCC (F)98003]，均購自中國(guó)食品藥品檢定研究院。

1.3培養(yǎng)基及稀釋劑 胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基TSA(批號(hào)160815)、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基TSB(批號(hào)170722)、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基SDA(批號(hào)170316)、麥康凱液體培養(yǎng)基(批號(hào)160229)、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基(批號(hào)160405)均購自北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司； pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液(批號(hào)20160316)購自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司。以上市售脫水培養(yǎng)基均按標(biāo)簽說明配制并高壓滅菌后備用。

1.4樣品 抽樣自22個(gè)廠家共計(jì)238批次樣品。抽取的22個(gè)廠家中，A廠家同時(shí)生產(chǎn)半夏糖漿和半夏止咳糖漿。其中，生產(chǎn)半夏糖漿的廠家A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L、M、N、O、P、Q、R共18個(gè)，抽取樣品共計(jì)156批；生產(chǎn)半夏止咳糖漿的廠家A、S、T、U、V共5個(gè)，抽取樣品共計(jì)82批。

2 方法

2.1菌液制備 取金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物接種至10 ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，32.5 ℃培養(yǎng)24 h；取白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物，接種至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，22.5 ℃培養(yǎng)72 h。取上述4種菌的新鮮培養(yǎng)物，用pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的菌懸液。取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物接種至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基(培養(yǎng)基約25 ml，試管內(nèi)徑為25 mm)中，22.5 ℃培養(yǎng)7 d后，加入4 ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，將孢子洗脫。吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用含0.05%聚山梨酯80 的pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的黑曲霉孢子懸液。

2.2比值計(jì)算 計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)中，采用平皿法或薄膜過濾法時(shí)，試驗(yàn)組菌落數(shù)減去供試品對(duì)照組菌落數(shù)的值與菌液對(duì)照組菌落數(shù)的比值應(yīng)在0.5～2范圍內(nèi)[1，2]。公式：試驗(yàn)組的比值=( 試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)-供試品對(duì)照組的平均菌落數(shù))/菌液對(duì)照組的平均菌落數(shù)[1]。

2.3半夏糖漿方法適用性試驗(yàn)

2.3.1需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)(平皿傾注法測(cè)定) 取本品2瓶混合均勻，作為供試品原液。取供試品原液50 ml，加pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液稀釋制成1∶2供試液。取供試品原液20 ml，加pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液稀釋制成1∶5供試液。取供試品原液10 ml，加pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液稀釋制成1∶10供試液。

2.3.1.1試驗(yàn)組 A：取供試品原液9.9 ml置滅菌試管中，加入適量濃度的0.1 ml枯草芽孢桿菌菌液，制成菌含量<100 cfu/ml的供試液，取1 ml注皿，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，置32.5 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)72 h，逐日觀察結(jié)果。同法制備含金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌和黑曲霉的供試液。B：取1∶2供試液、1∶5供試液和1∶10供試液各9.9 ml置滅菌試管中，后同項(xiàng)下A法。

2.3.1.2供試品對(duì)照組 取供試品原液、1∶2供試液、1∶5供試液和1∶10供試液各1 ml注皿，后同“2.3.1.1”項(xiàng)下A法。

2.3.1.3菌液對(duì)照組 取適量濃度的0.1 ml枯草芽孢桿菌菌液加pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液稀釋至10 ml，制成菌含量<100 cfu/ml的供試液，取1 ml注皿，后同“2.3.1.1”項(xiàng)下A法。

2.3.2霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)(平皿傾注法測(cè)定)

2.3.2.1試驗(yàn)組 A：取“2.3.1”項(xiàng)下供試品原液9.9 ml置滅菌試管中，加入適量濃度的0.1 ml白色念珠菌菌液，制成菌含量<100 cfu/ml的供試液，取1 ml注皿，立即傾沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，置32.5 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)120 h，逐日觀察結(jié)果。同法制備黑曲霉的供試液。B：取“2.3.1”項(xiàng)下1∶2供試液和1∶5供試液各9.9 ml置滅菌試管中，后同A法。

2.3.2.2供試品對(duì)照組 取供試品原液、1∶2供試液和1∶5供試液各1 ml注皿，后同“2.3.2.1”項(xiàng)下A法。

2.3.2.3菌液對(duì)照組 取適量濃度的0.1 ml白色念珠菌菌液加pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液稀釋至10 ml，制成菌含量<100 cfu/ml的供試液，取1 ml注皿，后同“2.3.2.1”項(xiàng)下A法。

2.3.3控制菌方法適用性試驗(yàn)

2.3.3.1供試液制備 同“2.3.1”需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)項(xiàng)下1∶10供試液制備。

2.3.3.2菌液制備 取大腸埃希菌的新鮮培養(yǎng)物接種至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，32.5 ℃培養(yǎng)24 h。取上述大腸埃希菌的新鮮培養(yǎng)物，用pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的菌懸液。

2.3.3.3方法適用性試驗(yàn) ①試驗(yàn)組：取1∶10的供試液10 ml和規(guī)定量大腸埃希菌(不大于100 cfu)，置100 ml的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，32.5 ℃培養(yǎng)18 h，依法檢查。②陽性對(duì)照組：取規(guī)定量大腸埃希菌(不大于100 cfu)，加入100 ml的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，32.5 ℃培養(yǎng)18 h，依法檢查。③陰性對(duì)照組：取10 ml pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液同①操作。取試驗(yàn)組、陽性對(duì)照組和陰性對(duì)照組上述培養(yǎng)物各1 ml接種至100 ml麥康凱液體培養(yǎng)基中，43 ℃培養(yǎng)24 h。取上述麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上， 32.5 ℃培養(yǎng)24 h。觀察是否有菌生長(zhǎng)及菌落形態(tài)，判斷是否檢出大腸埃希菌。

2.4半夏止咳糖漿方法適用性試驗(yàn) 分別參照上述“2.3.1”、“2.3.2”和“2.3.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)和控制菌檢查方法的適用性試驗(yàn)。

2.5糖漿樣品開封后存放過程中微生物增殖計(jì)數(shù)

2.5.1樣品 需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)小于10 cfu/ml，且霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)結(jié)果小于5 cfu/ml的39批樣品，為沒有微生物生長(zhǎng)的樣品；需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)大于等于10 cfu/ml，或霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)大于等于5 cfu/ml的38批樣品，為有微生物生長(zhǎng)的樣品。二者均包括半夏糖漿和半夏止咳糖漿。

2.5.2樣品儲(chǔ)存條件 樣品做微生物限度檢查時(shí)在超凈工作臺(tái)開封并取樣，試驗(yàn)結(jié)束后擰緊瓶蓋，放置在樣品間，房間溫度為23～25 ℃，濕度為40%～60%RH，樣品在儲(chǔ)存期間沒有開啟。在開封4個(gè)月后進(jìn)行微生物總數(shù)計(jì)數(shù)。

2.5.3需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù) ①取本品2瓶混合均勻，作為供試品原液。取供試品原液10 ml，加pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液稀釋制成1∶5、1∶10和1∶100供試液。取1∶10和1∶100供試液各1 ml注皿，傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基。將平皿倒置培養(yǎng)箱32.5 ℃培養(yǎng)120 h，觀察結(jié)果。②陰性對(duì)照：取pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液1 ml注皿，同上述操作步驟。

2.5.4霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù) ①取1∶5供試液1 ml注皿，傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。將平皿倒置培養(yǎng)箱22.5 ℃培養(yǎng)168 h，觀察結(jié)果。②陰性對(duì)照：取pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液1 ml注皿，同上述操作步驟。

3 結(jié)果

3.1半夏糖漿的方法適用性結(jié)果 選取廠家H、M和P各1個(gè)樣品(批號(hào)分別為180101、18010202和201712001)，按“2.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)，根據(jù)“2.2”項(xiàng)下比值計(jì)算公式，供試品原液各試驗(yàn)組的比值均為0，1∶2供試液試驗(yàn)組3個(gè)樣品的枯草芽孢桿菌和銅綠假單胞菌的比值均達(dá)不到0.5，1∶5供試液試驗(yàn)組批號(hào)201712001樣品的枯草芽孢桿菌回收率為0.35，達(dá)不到0.5，1∶10供試液試驗(yàn)組的各菌的回收率均達(dá)到0.5～2。因此采用1∶10供試液方法進(jìn)行半夏糖漿需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)檢查。霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)，供試品原液各試驗(yàn)組的比值均為0，1∶2供試液試驗(yàn)組批號(hào)201712001樣品的白色念珠菌回收率為0.29，達(dá)不到0.5，1∶5供試液試驗(yàn)組各菌的回收率均達(dá)到0.5～2。因此采用1∶5供試液方法進(jìn)行半夏糖漿霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)檢查。試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 半夏糖漿需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)結(jié)果

大腸埃希菌的適用性試驗(yàn)，3個(gè)批號(hào)樣品均采用1∶10的供試液10 ml置100 ml的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，依法檢查。試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 半夏糖漿控制菌檢查法方法適用性試驗(yàn)結(jié)果

注：“+”表示液體培養(yǎng)基變渾濁，或分離平板上有菌落生長(zhǎng)，且生長(zhǎng)特征與相應(yīng)目標(biāo)菌標(biāo)準(zhǔn)菌株一致?！?”表示液體培養(yǎng)基澄清，或分離平板上無菌生長(zhǎng)，或有菌生長(zhǎng)但生長(zhǎng)特征與相應(yīng)目標(biāo)菌標(biāo)準(zhǔn)菌株不一致。 “/”表示未加菌。

3.2半夏止咳糖漿的方法適用性結(jié)果 選取廠家A、S和T各1個(gè)樣品(批號(hào)分別為17110030、20171105和2018001)，按“2.4”項(xiàng)下方法進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)，根據(jù)“2.2”項(xiàng)下比值計(jì)算公式，供試品原液各試驗(yàn)組的比值均為0，1∶2供試液試驗(yàn)組3個(gè)樣品的枯草芽孢桿菌和銅綠假單胞菌的比值均達(dá)不到0.5 ，1∶5供試液試驗(yàn)組3個(gè)批號(hào)樣品枯草芽孢桿菌的回收率均在0.5左右(0.58、0.48、0.52)，為了保證檢驗(yàn)方法的適用性，需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)采用1∶10供試液進(jìn)行檢查。霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)，供試品原液各試驗(yàn)組的比值均為0，1∶2供試液試驗(yàn)組批號(hào)20171105樣品白色念珠菌的比值達(dá)不到為0.33，1∶5供試液試驗(yàn)組各菌的回收率均達(dá)到0.5～2。因此采用1∶5供試液方法進(jìn)行半夏糖漿霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)檢查。試驗(yàn)結(jié)果見表3。

表3 半夏止咳糖漿需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)結(jié)果

大腸埃希菌的適用性試驗(yàn)，3個(gè)批號(hào)樣品均采用1∶10供試液10 ml置100 ml的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，依法檢查。試驗(yàn)結(jié)果同表2半夏糖漿各項(xiàng)結(jié)果。

3.3156批半夏糖漿和82批半夏止咳糖漿的微生物限度結(jié)果及分析 半夏糖漿和半夏止咳糖漿均為液體口服制劑，根據(jù)《中國(guó)藥典》2015年版四部通則“1107非無菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)”的規(guī)定，本品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)為：1 ml供試品中，需氧菌總數(shù)不得過102cfu，霉菌和酵母菌總數(shù)不得過101cfu，不得檢出大腸埃希菌。本次抽樣結(jié)果表明，238批樣品微生物限度檢查結(jié)果均符合規(guī)定。

3.3.1156批半夏糖漿結(jié)果分析 156批半夏糖漿，需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)小于10 cfu/ml且霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)結(jié)果小于5 cfu/ml的有127批，需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)大于等于10 cfu/ml，或霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)大于等于5 cfu/ml的有23批。其中，有3批樣品TSA和SDA平板上均有菌生長(zhǎng)，但總體菌數(shù)均沒有超過標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。總體來講，抽樣樣品的微生物質(zhì)量比較滿意。本次抽樣生產(chǎn)半夏糖漿的18個(gè)廠家，其中9個(gè)廠家的樣品有微生物(包括需氧菌總數(shù)X、霉菌和酵母菌總數(shù)Y)檢出。D、H、M和P廠家為本次抽樣量最多的4個(gè)廠家，分別有21批、33批、13批和34批，其中，D廠家21批中有4批檢出微生物，檢出率為19%；H廠家33批中有4批檢出，檢出率為12%；M廠家13批中有1批檢出，檢出率為8%；P廠家34批中有2批檢出，檢出率為6%，D廠家和H廠家檢出率均較高，表明廠家在生產(chǎn)過程中樣品有不同程度的污染。其余廠家的抽樣數(shù)目均小于10批。見表4。

表4 半夏糖漿微生物污染分布表

3.3.282批半夏止咳糖漿結(jié)果分析 本次抽樣生產(chǎn)半夏止咳糖漿的5個(gè)廠家，生產(chǎn)均比較集中，其中3個(gè)廠家的樣品有微生物檢出。 A、S、T和U 4個(gè)廠家的抽樣量分別為19批、23批、18批和19批，抽樣量比較大，廠家V只有3批樣品。82批半夏止咳糖漿微生物(包括需氧菌總數(shù)X、霉菌和酵母菌總數(shù)Y)檢出結(jié)果，需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)大于等于10 cfu/ml，或霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)大于等于5 cfu/ml的有15批，其中14批均為S廠家生產(chǎn)的樣品，占該廠家抽樣的56.5%，問題比較集中，說明該企業(yè)在該品種的生產(chǎn)及其他流通過程中存在較嚴(yán)重的微生物污染。且在這14批中，有2批樣品需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)(菌落均為霉菌)分別為60 cfu/ml和70 cfu/ml，這在液體糖漿劑中，菌數(shù)屬于偏多。見表5。

表5 半夏止咳糖漿微生物污染分布表

3.4糖漿樣品開封后存放過程中微生物增殖計(jì)數(shù)結(jié)果分析 通過對(duì)需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)小于10 cfu/ml，且霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)結(jié)果小于5 cfu/ml的39批樣品開封4個(gè)月后進(jìn)行微生物檢查，結(jié)果表明，23的樣品有微生物的檢出，檢出結(jié)果均在5～20 cfu/ml之間，沒有超過標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。通過對(duì)需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)結(jié)果大于10 cfu/ml或霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)結(jié)果大于5 cfu/ml的38批樣品進(jìn)行微生物檢查，結(jié)果表明，6批沒有微生物檢出，32批樣品均有微生物的檢出，占樣品比例的84%，其中有5批樣品霉菌均達(dá)到200 cfu/ml以上，超出標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。這5批樣品在第一次檢查計(jì)數(shù)時(shí)，需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)結(jié)果分別為10、20、20、60和70 cfu/ml。霉菌的繁殖需要適宜的條件和一定的起始菌量，二者缺一不可，若二者只滿足其中一項(xiàng)，則霉菌的繁殖不能正常進(jìn)行。所以，有微生物檢出的38批樣品在存放4個(gè)月后，有的樣品微生物就大量繁殖，有的則檢測(cè)不到微生物。

4 討論

4.1本次抽樣238批樣品，分別來自廣西、貴州、湖北、重慶等12個(gè)省市，涵蓋了半夏糖漿和半夏止咳糖漿主要生產(chǎn)地和生產(chǎn)企業(yè)。本次抽樣有微生物生長(zhǎng)的樣品，不論是需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)還是霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)，TSA和SDA平板上長(zhǎng)的菌均以霉菌居多，細(xì)菌為少數(shù)。這個(gè)為正?，F(xiàn)象，糖漿制劑蔗糖的含量一般為45%～60%，在《中國(guó)藥典》中培養(yǎng)霉菌和酵母菌的沙氏葡萄糖液體和瓊脂培養(yǎng)基(SDB和SDA)，其中葡萄糖的含量分別為67%和62%[1]，不難解釋霉菌得以繁殖的原因了。

4.2針對(duì)本次抽樣微生物生長(zhǎng)批數(shù)最多的S廠，TSA和SDA上檢測(cè)出來的均為霉菌。集中生產(chǎn)批號(hào)均在2017年10月—2018年2月份之間，抽樣單位分布在全國(guó)各地，包括廣東、天津、河南、重慶、葫蘆島等地。分析在這個(gè)時(shí)間段，雖然氣溫較低，但生產(chǎn)地位于我國(guó)西南地區(qū)，冬季的平均氣溫在3. 0～12. 0 ℃之間，但由于整個(gè)冬季80%以上的時(shí)段該地區(qū)相對(duì)濕度都維持在70%上下，也較利于霉菌的繁殖，霉菌孢子對(duì)低溫等惡劣環(huán)境也有較高的耐受性。植物根莖葉正是中藥材和飲片的主要來源，極易受到霉菌的污染。分析有可能這段時(shí)間里生產(chǎn)用的原藥材或者純化水[3]等被霉菌孢子污染，在后續(xù)的生產(chǎn)過程中沒有被清除干凈，殘留在了藥品中。溫度濕度營(yíng)養(yǎng)等條件合適時(shí)，孢子即生長(zhǎng)繁殖長(zhǎng)出霉菌。結(jié)合藥材原料中的初始污染菌和生產(chǎn)車間采集的微生物，與終產(chǎn)品中的污染菌進(jìn)行同源性比對(duì)和溯源分析，有助于生產(chǎn)企業(yè)確定微生物來源，更有針對(duì)性的進(jìn)行質(zhì)量控制[4]。

4.3在近幾年的藥品微生物方法適用性建立的實(shí)踐中，糖漿類的樣品，多數(shù)情況下原液回收率均達(dá)不到《中國(guó)藥典》規(guī)定的0.5～2之間，甚至大多數(shù)情況下，回收率基本為0。因此，一般建議采用稀釋法1∶2,1∶5等方法逐級(jí)進(jìn)行方法確認(rèn)，稀釋度越低，檢驗(yàn)結(jié)果越能接近樣品被污染的真實(shí)情況。

4.4一般情況下，糖漿劑開啟后會(huì)很快服用完，有時(shí)也會(huì)有剩余，存放起來。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，在超凈操作臺(tái)里只開啟一次的情況下，存儲(chǔ)4個(gè)月，84%的樣品有菌生長(zhǎng)。在日常生活中，在自然環(huán)境下開封的糖漿劑，有的會(huì)直接服用，這些過程中，微生物的污染幾率會(huì)大大增加。另外，建議糖漿劑在開封后也不要放置在冰箱中，因?yàn)榈蜏貢?huì)使有效物質(zhì)的溶解度有所改變，藥性成分有所變化，影響后續(xù)療效。因此，開封后糖漿劑的保存時(shí)間不宜太長(zhǎng)。服用時(shí)將糖漿倒入勺子或其他容器中，避免直接與口接觸造成的污染。在下次服用時(shí)應(yīng)先觀察樣品的外觀，有霉菌生長(zhǎng)的樣品應(yīng)及時(shí)處理，避免誤服造成的傷害。