朱傳進(jìn)

栽培配方對(duì)杏鮑菇子實(shí)體生長(zhǎng)的影響

朱傳進(jìn)

（古田縣食用菌研發(fā)中心，福建 寧德 352200）

將雜木屑、麩皮、玉米粉、米糠、碳酸鈣等常見栽培原料及兩種新原料——大豆糖蜜和豆餅粉，按照不同比例設(shè)置5種杏鮑菇工廠化栽培配方。通過(guò)測(cè)定各配方菌絲生長(zhǎng)速度、不同生長(zhǎng)階段相關(guān)酶活性、子實(shí)體性狀、生物學(xué)效率等系列指標(biāo)，探究得到最優(yōu)配方：棉籽殼50%、雜木屑15%、麩皮25%、大豆糖蜜5%、玉米粉5%，表現(xiàn)菌絲生長(zhǎng)速度快、酶活性強(qiáng)、生物學(xué)效率高。

杏鮑菇；栽培配方；酶活性；生物學(xué)效率

杏鮑菇（Pleurotus eryngii）又名刺芹側(cè)耳，菇體具有杏仁香味，肉質(zhì)肥厚，口感鮮嫩，營(yíng)養(yǎng)豐富，并具有降血脂、降膽固醇、抗癌、防治心血管病、促進(jìn)胃腸消化、增強(qiáng)機(jī)體免疫能力等功效，在食用菌市場(chǎng)中占據(jù)重要地位[1～6]。

杏鮑菇工廠化栽培以米糠、玉米粉、麩皮等為主要氮源，以玉米芯、木屑、棉籽殼等為主要碳源。而大豆糖蜜是生產(chǎn)大豆?jié)饪s蛋白過(guò)程中，醇溶部分物質(zhì)，經(jīng)濃縮處理后的產(chǎn)品，因富含糖類物質(zhì)，顏色和流動(dòng)性類似于蜂蜜而得名。其含有大量的大豆異黃酮及大豆低聚糖等，是酵母發(fā)酵的較好營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之一，也是價(jià)格低廉的飼料原料。豆餅粉是采用壓榨法提取油后的大豆剩余物粉碎而成，含有豐富的蛋白質(zhì)，可以提供充足的氮源。本研究通過(guò)利用大豆糖蜜、豆餅粉、棉籽殼、不同粗細(xì)雜木屑等調(diào)整優(yōu)化杏鮑菇栽培配方營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成，以期獲得更優(yōu)的栽培效果。

1 材料與方法

1.1 材料

（1）供試菌株。杏鮑菇菌株P(guān)le-tm為福建農(nóng)林大學(xué)（古田）菌業(yè)研究院實(shí)驗(yàn)室保藏菌種。

（2）供試培養(yǎng)基。母種為PDA加富培養(yǎng)基：葡萄糖20 g、馬鈴薯200 g、酵母粉3 g、蛋白胨3 g、KH2PO41.5 g、MgSO4?7H2O 1.5 g、維生素B10.01 g、瓊脂20 g，加水至1 000 mL，pH自然。

栽培培養(yǎng)基配方設(shè)5個(gè)，各配方含水量均為60%～65%。

配方1為常用配方（對(duì)照）：雜木屑（細(xì)）35%、麩皮15%、玉米芯32.5%、玉米粉5%、米糠10%、碳酸鈣1.5%、石灰1%。同時(shí)也用作原種培養(yǎng)基。

配方2：雜木屑（粗）35%、麩皮15%、玉米芯32.5%、玉米粉5%、米糠10%、碳酸鈣1.5%、石灰1%。

配方3：棉籽殼50%、雜木屑（粗）15%、麩皮25%、豆餅粉5%、玉米粉5%。

配方4：棉籽殼48.5%、雜木屑（粗）35%、麩皮10%、玉米粉5%、石灰1.5%。

首先應(yīng)用分子模擬方法，構(gòu)建正確的二維或三維分子結(jié)構(gòu)，采用構(gòu)象分析、分子力學(xué)等方法獲得最優(yōu)化的構(gòu)象；采用拓?fù)鋵W(xué)方法、量子力學(xué)方法等計(jì)算化合物的分子結(jié)構(gòu)特征參數(shù)，獲取分子的結(jié)構(gòu)信息，進(jìn)行分子結(jié)構(gòu)描述。

配方5：棉籽殼50%、雜木屑（粗）15%、麩皮25%、大豆糖蜜5%、玉米粉5%。

1.2 方法

將保存于4 ℃的杏鮑菇母種在無(wú)菌條件下接到 PDA加富培養(yǎng)基平板上，25 ℃恒溫培養(yǎng)直至長(zhǎng)滿后轉(zhuǎn)接至原種袋制備原種。

（1）不同培養(yǎng)基上杏鮑菇菌絲生長(zhǎng)速度的測(cè)定。根據(jù)5個(gè)配方配置相應(yīng)的栽培培養(yǎng)基，采用瓶口直徑5.5 cm，高9 cm規(guī)格的栽培瓶，每瓶裝料量為濕料200 g（干料約78 g）。裝瓶后高壓121 ℃滅菌3 h，取杏鮑菇菌絲健壯的原種袋，在無(wú)菌的條件下轉(zhuǎn)接于各栽培培養(yǎng)基上，每配方接種20瓶，栽培袋置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中避光養(yǎng)菌。培養(yǎng)至10天、20天時(shí)測(cè)量記錄各配方菌絲生長(zhǎng)速度。

（2）粗酶液的制備。按照杏鮑菇的生長(zhǎng)發(fā)育情況，生長(zhǎng)期10天、20天、30天，后熟期結(jié)束（35天），原基期，出蕾期各取一次樣，共6次樣。取樣后將栽培瓶中栽培料取出揉碎，混勻，精確稱取10 g，加入50 mL水，26 ℃，120 r/min 搖床2 h。8 000 r/min，4 ℃離心15 min。上清液即為粗酶液。

（3）酶活的測(cè)定。杏鮑菇的酶活測(cè)定方法參照文獻(xiàn)[11,12]進(jìn)行。木聚糖酶，采用DNS法；纖維素酶，采用濾紙法；漆酶，采用ABTS法[7～10]；木質(zhì)素過(guò)氧化酶，采用黎蘆醇氧化速率法；錳過(guò)氧化物酶，采用愈創(chuàng)木酚法，按3.1 mL反應(yīng)體系。

（4）出菇試驗(yàn)。菌絲滿瓶并后熟一周后開蓋，用經(jīng)滅菌的藥匙輕輕刮去表面的老菌塊、菌皮和氣生菌絲。浸水2 h并倒掉多余水分，放入15 ℃、濕度90%的出菇培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)。

待長(zhǎng)出原基后，溫度和濕度保持不變，設(shè)置500～1 000 lx散射光繼續(xù)培養(yǎng)。菇蕾高度3 cm左右時(shí)疏蕾，每瓶保留品相優(yōu)良的菇蕾3～4個(gè)，其余去除。待子實(shí)體成熟時(shí)，采收、記錄子實(shí)體形態(tài)、大小、顏色、菌柄長(zhǎng)度、菌蓋大小、軟硬度等；稱重、計(jì)算生物學(xué)效率（生物學(xué)效率=子實(shí)體質(zhì)量/培養(yǎng)料干重×100%）。

（5）數(shù)據(jù)采集與分析。5種栽培配方中分別隨機(jī)選取3瓶進(jìn)行1～10天、11～20天的菌絲生長(zhǎng)速度測(cè)定；按照杏鮑菇的生長(zhǎng)發(fā)育情況，于生長(zhǎng)期10天、20天、30天，后熟期結(jié)束（35天），原基期，以及出蕾期各取3瓶測(cè)定酶活；采收時(shí)隨機(jī)選擇3瓶測(cè)定出菇性狀。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌絲生長(zhǎng)速度

表1 各配方前20天的菌絲平均生長(zhǎng)速度

2.2 酶活

（1）木聚糖酶。對(duì)5個(gè)配方菌絲萌發(fā)期、半滿期、滿瓶期、后熟期、原基期、出蕾期6個(gè)時(shí)期的培養(yǎng)料進(jìn)行木聚糖酶測(cè)定，結(jié)果只有配方5在菌絲萌發(fā)期與半滿期出現(xiàn)了酶活，分別為16.9±1.43 U/mL和26.9±0.62 U/mL，其余配方均未檢出，說(shuō)明只有配方5在滿袋前產(chǎn)生木聚糖酶，證明其可分解木聚糖。

（2）纖維素酶。5種配方在杏鮑菇生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中纖維素酶酶活測(cè)定結(jié)果顯示有增有減，且變化幅度不定。對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)，配方5的纖維素酶活性顯著較高，平均吸光度值最高，為3.24±0.62；其他各配方（1、2、3、4）的纖維素酶活性基本上處于同一水平，平均吸光度值分別為2.94±0.48、2.10±0.32、2.74±0.69、2.58±0.57。說(shuō)明配方5可以利用的纖維素水平更高（表2）。

A—配方1；B—配方2；C—配方3；D—配方4；E—配方5。

圖1 5個(gè)配方杏鮑菇菌絲的生長(zhǎng)情況（接種第20天）

表2 纖維素酶酶活測(cè)定結(jié)果 （單位：U/mL）

（3）漆酶。漆酶酶活測(cè)定結(jié)果顯示，5種配方均為出蕾期時(shí)活性最低，整個(gè)過(guò)程呈現(xiàn)先上升后下降趨勢(shì)，配方2、3變化幅度較小，配方5、4分別在接種第20天和第30天達(dá)到最高水平，分別為41.8±6.35 U/mL和51.6±9.62 U/mL（表3）。平均吸光度值則以配方5最大，為18.80±2.19。其他各配方（1、2、3、4）的平均吸光度值分別為11.42±1.86、12.23±0.94、8.65±1.74、14.70±3.21。

表3 漆酶酶活測(cè)定結(jié)果 （單位：U/mL）

（4）木質(zhì)素過(guò)氧化物酶。木質(zhì)素過(guò)氧化物酶測(cè)定結(jié)果，各配方在6個(gè)階段的變化不一，在特定時(shí)期下存在不同程度的增加或減少。其中，以配方1的木質(zhì)素過(guò)氧化物酶活性較高（表4），且木質(zhì)素過(guò)氧化物酶的平均吸光度值也最大，為43.27±8.56；其次是配方5，平均吸光度值為37.50±2.37；配方4、3、2平均吸光度值分別為27.28±3.26、16.55±0.75和16.15±2.87。

表4 木質(zhì)素過(guò)氧化物酶酶活測(cè)定結(jié)果（單位：U/mL）

（5）錳過(guò)氧化物酶。錳過(guò)氧化物酶測(cè)定結(jié)果，各配方在不同時(shí)期的酶活性大體上呈拋物線狀，5種配方在菌絲萌發(fā)期均無(wú)酶活性，滿瓶期均有酶活性，而其余階段總存在某個(gè)配方無(wú)酶活性，只有配方5在萌發(fā)期后各期測(cè)定均存在酶活性。結(jié)合平均吸光度分析可知，配方5的平均吸光度值最高，為1.72±0.32，說(shuō)明其錳過(guò)氧化物酶活性高（表5）。錳過(guò)氧化物酶平均吸光度值配方1、2、3、4分別為1.24±0.32、0.71±0.16、1.05±0.25、1.13±0.16。

3 出菇試驗(yàn)

3.1 產(chǎn)量指標(biāo)和生物學(xué)效率

5個(gè)配方子實(shí)體形態(tài)基本無(wú)差異（圖2），均為傘狀，菌柄白色，菌蓋淺褐色，質(zhì)感硬實(shí)。柄寬和柄長(zhǎng)等指標(biāo)相差不大（表6），配方1、2菌柄直徑較小，配方5菌柄最短；菌蓋直徑，除配方3外，其余配方均在5 cm以上，其中配方1、5最大。生物學(xué)效率配方5明顯優(yōu)于其他配方，達(dá)到83.32%。

表5 錳過(guò)氧化物酶酶活測(cè)定結(jié)果 （單位：U/mL）

注：各配方萌發(fā)期錳過(guò)氧化物酶酶活測(cè)定結(jié)果均為0U/mL。

3.2 產(chǎn)量和生物學(xué)效率

5種配方生物學(xué)效率以配方5和配方3優(yōu)于其他配方，子實(shí)體的柄粗和柄長(zhǎng)相差不大，菌蓋直徑，除配方3之外，其余配方均在5 cm以上，其中配方1和5菌蓋直徑最大（表6）。

表6 各配方杏鮑菇產(chǎn)量與子實(shí)體性狀

3 結(jié)論與討論

5種配方酶活力測(cè)定以及出菇試驗(yàn)結(jié)果顯示，栽培效果以添加大豆糖蜜的配方5（棉籽殼50%、雜木屑15%、麩皮25%、大豆糖蜜5%、玉米粉5%）較優(yōu)。本實(shí)驗(yàn)中，配方3和5的生物學(xué)效率遠(yuǎn)高于配方1、2和4。從配方組成看，配方3和5的雜木屑含量相同，遠(yuǎn)低于其他3個(gè)配方，而麩皮含量遠(yuǎn)高于其他3個(gè)配方，說(shuō)明在一定范圍內(nèi)，雜木屑含量越低，麩皮含量越高，菌絲生長(zhǎng)越好，生物學(xué)效率越高。這與王鵬等和班立桐等的研究結(jié)果相一致[13,14]。

A—配方1；B—配方2；C-配方3；D—配方4； E—配方5

圖2 子實(shí)體形態(tài)

添加玉米芯的配方1、2生物學(xué)效率低于添加棉籽殼的配方3、5，配方4在配方3的基礎(chǔ)上利用雜木屑替換15%的麩皮，產(chǎn)量反而低于配方1、2?？梢钥闯隼妹拮褮ぷ鳛樵耘嗔铣龉疆a(chǎn)量?jī)?yōu)于玉米芯，麩皮含量的減少會(huì)導(dǎo)致含氮量過(guò)低，出菇產(chǎn)量降低，這與車星星等的研究結(jié)論[15]有所不同。配方3含有特殊組分的豆餅粉，配方5含有特殊組分的大豆糖蜜，添加豆餅粉或大豆糖蜜都可大幅度提高菌體生長(zhǎng)速度和生物學(xué)效率，從而使其他組分的影響變小，導(dǎo)致結(jié)果不同；配方4未添加特殊組分，生物學(xué)效率低于配方3、5。

添加豆餅粉或大豆糖蜜可提高杏鮑菇生物學(xué)效率，且添加大豆糖蜜則比添加豆餅粉效果更好。工廠化栽培杏鮑菇添加大豆糖蜜的最佳配方值得進(jìn)一步深入研究。

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Effects of different cultivation components on the growth offruiting bodies

Zhu Chuanjin

(Edible Fungi Research and Development Center of Gutian, Gutian 350002, China)

In this experiment, the common cultivated mats of mixed wood chips, wheat bran, corn flour, rice bran and calcium carbonate were prepared according to different proportions and try to add two new components including soybean molasses and soybean meal, mixed to form five kinds of cultivation formula. Growth rate, lignin degrading enzyme system and related enzyme activity, yield, growth cycle, biological efficiency and other indicators were determined to explore the different cultivation ofat different growth stages of enzyme activity and fruiting body growth (yield, growth cycle etc.). The results showed that the best cultivation formula was 50% of cottonseed hull, 15% of chunk wood, 25% of bran, 5% of soybean molasses and 5% of corn flour.

cultivated substrate;i; fruit body growth; enzyme activity; growth cycle

S646

B

2095-0934（2019）05-331-05

福建省發(fā)改委農(nóng)業(yè)五新工程項(xiàng)目（閩發(fā)改委投資[2012]931號(hào)）；福建省自然基金杰出青年項(xiàng)目（NO. 2014J060 10）；福建省食用菌產(chǎn)業(yè)重大研發(fā)平臺(tái)（2014N2101）；食用菌產(chǎn)業(yè)農(nóng)技推廣服務(wù)體系建設(shè)（KNJ-153011-3）

朱傳進(jìn)（1969—），男，大專，農(nóng)藝師，主要從事食用菌生物技術(shù)及應(yīng)用研究。E-mail：2992056713@qq.com。